MCM7和CDC6蛋白表达与肝细胞癌病理特征的相关性

目的探讨微染色体维持蛋白7(MCM7)和细胞分裂周期蛋白6(CDC6)与肝细胞癌病理特征的相关性。方法选取68例原发性肝细胞癌患者,分别取癌组织和癌旁组织,采用免疫组化染色(SP)法检查MCM7和CDC6表达,比较癌组织及癌旁组织中MCM7阳性检出率及CDC6高表达占比;分析不同临床病理特征的肝细胞癌患者MCM7阳性占比及CDC6高表达占比,采取多因素logistics回归分析MCM7阳性、CDC6高表达的危险因素;3年院外随访,记录癌组织MCM7阳性及CDC6高表达患者术后3年存活率。结果癌组织内MCM7阳性检出率及CDC6高表达占比高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄及乙肝抗原(HBsAg)阳性患者的MCM7阳性检出率及CDC6高表达占比差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤直径≥5 cm、肿瘤淋巴结转移(TNM)分期Ⅲ~Ⅳ期、分化程度低分化、血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L、有卫星结节患者的MCM7阳性检出率及CDC6高表达占比较高,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤直径≥5 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、HBsAg阳性、血清AFP≥400μg/L、有卫星结节是MCM7阳性和CDC6高表达的危险因素(P<0.05);所有患者均获得3年院外随访,3年死亡率38.24%(26/68),存活率61.76%(42/68);MCM7阳性原发性肝癌患者死亡率44.00%(22/50)、存活率56.00%(28/50),MCM7阴性患者死亡率22.22%(4/18)、存活率83.05%(14/18),Kaplan-Meier生存分析显示癌组织MCM7阳性检出率越高患者存活率越低(P<0.05));CDC6高表达原发性肝癌患者死亡率50.00%(20/40)、存活率50.00%(20/40),CDC6低表达患者死亡率21.43%(6/28)、存活率78.57%(22/28),Kaplan-Meier生存分析显示癌组织CDC6表达越高患者存活率越低(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌患者癌组织内MCM7和CDC6与疾病的进展有关,癌组织MCM7阳性及CDC6高表达均会影响患者的3年存活率。

CDC6、DEK、β-catenin蛋白在结直肠癌中的表达及相关性研究

目的分析结直肠癌组织中CDC6、DEK、β-catenin蛋白的表达及临床病理性质,并探讨三者表达的相关性。方法选取结直肠癌(实验组)及对应的癌旁黏膜组织(对照组),每组52例。免疫组化检测2组CDC6、DEK、β-catenin蛋白水平,探讨其与患者临床病理性质的关联,并研究它们之间的相关。结果CDC6、DEK、β-catenin蛋白的表达在实验组阳性率分别为80.77%(42/52)、84.62%(44/52)、65.38%(34/52),在对照组阳性率分别为3.85%(2/52),7.69%(4/52),23.08%(12/52),差异有统计学意义(P<0.01);结肠癌中,CDC6、DEK、β-catenin蛋白高表达均与结肠癌的T分期、临床分期、脉管侵犯呈相关性(P<0.05),且DEK蛋白的表达还与结肠癌分级呈相关性(P<0.05),三种蛋白相互之间具有正相关性。结论CDC6、DEK、β-catenin表达增高与结直肠癌的进展有关,且互相存在正相关,可用作判断结直肠癌预后的潜在参数和药物靶点。

宫颈癌组织中MCM4、CDC6的表达及其与HPV_(16/18)感染的相关性

目的:研究微小染色体维持蛋白4(minichromosome maintenance proteins4,MCM4)、细胞分裂周期蛋白(cell divi-sion cycle6,CDC6)在宫颈癌组织中的表达及其与人乳头状瘤病毒16/18型(human papilloma virus16/18type,HPV16/18)感染的相关性及其临床意义。方法:收集2006-2007年间山西大同市第五人民医院病理科经病理证实的50例宫颈癌、20例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ、20例CINⅡ-Ⅲ、20例正常宫颈组织石蜡标本,以免疫组织化学法检测这些组织标本中MCM4、CDC6的表达,同时采用PCR技术检测HPV16/18的感染情况。结果:(1)在宫颈癌组织中MCM4、CDC6表达的阳性率显著高于CIN和正常宫颈组织(均P<0.05),且MCM4、CDC6阳性表达率与宫颈癌病理分级和淋巴转移相关(均P<0.05),而与年龄分组、临床分期无关(均P>0.05)。(2)HPV16/18感染在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌组织中的阳性率依次升高(P<0.05),但与宫颈癌患者年龄、临床分期、病理分级、淋巴转移无关(均P>0.05)。(3)宫颈癌组织中MCM4和CDC6的表达呈正相关(r=0.390;P<0.05);MCM4和CDC6表达均与HPV16/18感染相关(r=0.634,P<0.05;r=0.386,P<0.05)。结论:宫颈癌及CIN组织中MCM4、CDC6表达的改变与HPV16/18感染密切相关,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生与发展。

新疆妇女宫颈病变中MCM7、CDC6蛋白的表达及其意义

目的:探讨宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)中微小染色体维持蛋白7(MCM7)、细胞周期分裂蛋白6(CDC6)的表达及其意义。方法:应用免疫组织化学S-P法,检测宫颈癌31例、CIN50例、慢性宫颈炎10例中MCM7蛋白和CDC6蛋白的表达。结果:(1)MCM7在宫颈癌中的阳性表达率(93.6%)明显高于CIN(CINⅠ为60.0%,CINⅡ～Ⅲ为85.0%)和慢性宫颈炎(30.0%),差异有统计学意义(P<0.05);CDC6在宫颈癌中的阳性表达率(90.3%)明显高于CIN(CINⅠ为50.0%,CINⅡ～Ⅲ为77.5%)和慢性宫颈炎(30.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)在宫颈癌、CIN和慢性宫颈炎中,MCM7和CDC6的表达呈正相关(r=0.7356,P<0.05)。(3)MCM7的阳性表达率在宫颈癌不同分化程度间差异无统计学意义(P>0.05);CDC6在宫颈癌高分化组的阳性表达率(72.7%)明显低于中-低分化组(100.0%),差异有统计学意义(P<0.05);MCM7和CDC6的表达在不同年龄、民族间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MCM7和CDC6在宫颈癌的发生、发展中具有协同作用,对宫颈癌的早期诊断具有重要参考价值。

CDC6 mRNA在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达及其临床意义的研究

目的研究弥漫大B细胞淋巴瘤组织中细胞分裂周期蛋白6(CDC6)表达情况,分析CDC6 mRNA表达与弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征、预后的关系和意义。方法收集2012年1月~2018年12月期间我院60例DLBCL病例,以同期20例淋巴结反应性增生组织作为对照,采用实时荧光定量RCR(real-time PCR)检测其CDC6 mRNA的表达水平,并分析CDC6 mRNA与DLBCL患者临床病理特征及预后的关系。结果CDC6 mRNA在DLBCL中的表达量(0.441±0.070)较淋巴结反应性增生组织(0.113±0.029)显著增高(P<0.05);CDC6 mRNA在DLBCL中的上调与Hans分型中non-GCB亚型存在相关性(P=0.001);单因素分析显示,高表达CDC6 mRNA、临床分期Ⅲ+Ⅳ期、IPI评分3~5分、LDH升高(>245 U/L)、贫血(Hb<100 g/L)、Hans分型non-GCB亚型均与DLBCL患者不良预后有关;多因素Cox分析显示,高表达CDC6 mRNA、贫血、non-GCB亚型是影响DLBC预后的独立危险因素(P=0.006;0.001;0.022)。结论CDC6 mRNA表达与淋巴瘤关系密切,高表达CDC6 mRNA可能与DLBCL患者不良预后有关,可作为DLBCL患者预后的独立危险因素。

细胞分裂周期蛋白-6、同源异型盒基因-5蛋白表达水平与乳腺癌患者组织学分级的关联性分析

目的:探讨同源异型盒基因-5(HOXA5)、细胞分裂周期蛋白-6(CDC6)蛋白表达水平与乳腺癌患者组织学分级的关联性。方法:选取乳腺癌患者119例与癌前病变119例患者为研究对象。所有乳腺癌患者均采取手术治疗,并于术中切取病变组织,用免疫组化法测定HOXA5及CDC6阳性表达情况。统计乳腺癌组与癌前病变组、乳腺癌组不同组织分化程度患者间HOXA5及CDC6阳性表达情况。结果:与癌前病变组比较,乳腺癌组CDC6(74.79%vs 19.33%,P<0.05))和HOXA5(68.07%vs 26.05%,P<0.05)阳性表达率显著增加;不同组织分化程度乳腺癌患者间HOXA5及CDC6阳性表达率存在显著差异(P<0.05),且高分化患者CDC6阳性率(53.85%)低于中分化(79.59%)及低分化患者(93.55%),高分化患者HOXA5阳性率(51.28%)低于低分化患者(87.10%)(P<0.05)。结论:乳腺癌患者肿瘤组织中HOXA5及CDC6过表达与乳腺癌组织学分级密切相关。

细胞分裂周期蛋白基因6半定量检测方法的条件建立

目的 以beta actin为内参基因 ,细胞分裂周期蛋白基因 6 (CDC6 )为检测基因 ,探索半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)体系在检测CDC6基因时的条件建立。方法 以膀胱癌细胞株为标本 ,提取总RNA ,合成cDNA ,优化PCR反应条件 ,建立针对CDC6的半定量PCR反应体系。结果 通过对实验参数的优化 ,确定适宜的反应体系 :退火温度 5 8℃、Mg2 + 浓度 2 0mmol/L、循环次数 37次 ;批内、批间变异系数分别为 8 0 1%和 14 5 3% ,最小检测限为总RNA 0 0 5ng。通过重复性试验、敏感性试验和准确性实验分析 ,该方法具有良好的重复性、准确性和敏感性。结论 将内参基因与CDC6目的基因共同扩增 ,选择适当条件 ,可直接获得目的基因CDC6的mRNA的相对表达量。

口腔鳞癌和癌前病变中微小染色体维持蛋白7和细胞分裂周期蛋白6的表达研究

目的探讨微小染色体维持蛋白7(Mcm7)和细胞分裂周期蛋白6(Cdc6)在口腔鳞癌(OSCC)和癌前病变中的表达及临床意义。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化方法分别检测47例冰冻标本、98例石蜡标本中Mcm7和Cdc6的mRNA及蛋白表达水平,分析其表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移等因素之间的相关性。结果 RT-PCR结果显示Mcm7 mRNA在口腔正常黏膜、癌前病变以及OSCC组织中均有阳性表达,各组之间相对表达量差异有统计学意义(P<0.01)。Cdc6 mRNA在正常黏膜中鲜有表达,癌前病变组与OSCC组均有阳性表达,各组之间相对表达量差异亦有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果显示Mcm7蛋白在口腔正常黏膜、癌前病变以及OSCC组织中均有阳性表达,其阳性标记指数分别为3.6%、22.3%和45.9%,各组之间阳性标记指数差异有统计学意义(P<0.01)。OSCC组Mcm7蛋白表达阳性指数高于癌前病变组(P<0.01)。Cdc6蛋白在以上标本中的阳性表达总体较Mcm7低,在正常口腔黏膜中鲜有表达,癌前病变以及OSCC组织中均有阳性表达。各组之间阳性标记指数差异有统计学意义(P<0.01)。Mcm7和Cdc6在有淋巴结转移组其阳性标记指数高于无转移组(P<0.01)。结论 Mcm7和Cdc6的高表达与口腔癌发生及转移有相关性。检测OSCC组织中Mcm7和Cdc6的表达有望成为其早期诊断与判断预后的分子指标之一。

靶向细胞分裂周期蛋白6RNAi慢病毒载体的构建

目的探讨细胞分裂周期蛋白6(Cdc6)RNAi慢病毒载体的构建。方法设计5个靶向Cdc6的RNA干扰靶点序列(Target1、2、3、4、5),构建靶向Cdc6的RNA干扰载体和Cdc6过表达载体,共转染293T细胞进行外源筛靶,采用Western blot检测Cdc6蛋白表达情况,判断不同靶点的干扰效果,选择两条最佳RNAi有效靶点序列,制备靶向Cdc6的慢病毒载体,并将其转染Tca8113细胞,通过Real-time RT-PCR和Western blot检测Cdc6mRNA和蛋白表达水平,以MTT法测定Tca8113细胞生长水平。结果成功构建Cdc6siRNA表达质粒及Cdc6过表达载体质粒,经外源筛靶实验显示,相对阴性对照组(NC),Target3和Target4靶点对Cdc6蛋白表达的敲减作用最显著,敲减率分别为69.15%和84.85%。在Tca8113细胞中,与NC组比较,靶向Cdc6慢病毒载体KD1和KD2组Cdc6mRNA表达的敲减率分别为50%和65%;Cdc6蛋白表达水平分别下降65.87%和79.38%;Tca8113细胞生长抑制率分别为25.84%和30.34%。结论成功构建两条靶向Cdc6RNAi慢病毒载体:Target3和Target4。

动态压应力对生长板软骨前体干细胞PTHrP及细胞外基质mRNA表达的影响

目的 研究动态压应力对体外培养的大鼠生长板软骨前体干细胞甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）以及软骨特性细胞外基质mRNA表达的影响.方法 免疫磁珠分选并体外培养大鼠软骨前体干细胞,用自行设计制作的可控细胞压力加载装置对细胞进行不同强度（30 mmHg、60 mmHg、90mmHg）和持续时间（1 h、6 h、24 h）的压应力刺激,未刺激组为对照组,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术分别检测各组细胞的PTHrP以及软骨特性细胞外基质（Ⅱ型胶原、X型胶原以及aggreean）mRNA表达并进行半定量分析.结果 生长板软骨前体干细胞在30 mmHg、60 mmHg、90 mmHg动态压力培养环境下,各时间点PTHrP、Ⅱ型胶原以及aggrecan mRNA表达水平明显增强并高于对照组（P〈0.05）;Ⅱ型胶原以及aggrecan mRNA表达水平于6h达高峰,PTHrP mRNA的表达水平随时间增加而增强,24 h仍有较高水平的表达;且压力值越大,相同时间点mRNA相对表达量越高.X型胶原表达水平较低且与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 适当的动态压应力能有效促进体外培养的大鼠软骨前体干细胞Ⅱ型胶原及aggreean mRNA表达,PTHrP在此力学信号转导过程中可能起重要的作用.