circVANGL1/miR-134-5p/CDCA3轴调控乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的探讨circVANGL1/miR-134-5p/细胞分裂周期相关因子3(CDCA3)轴调控乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的机制。方法收集2021年2月至2023年11月治疗乳腺癌患者的乳腺癌组织及相对应癌旁组织。体外培养乳腺癌MCF-7细胞干细胞亚群,根据不同处理方法将其分为Con组、si-NC组、si-circVANGL1组、pcDNA组、pcDNA-circVANGL1组、miR-NC组、miR-134-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-134-5p组、si-circVANGL1+anti-miR-134-5p组、si-circVANGL1+pcDNA-CDCA3组。采用qRT-PCR检测circVANGL1、miR-134-5p和CDCA3 mRNA在乳腺癌组织、癌旁组织及各组乳腺癌干细胞中的表达水平;Western blot检测CDCA3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证circVANGL1与miR-134-5p、miR-134-5p与CDCA3靶向关系;CCK-8实验检测乳腺癌干细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中circVANGL1、CDCA3 mRNA、CDCA3蛋白表达水平较高,miR-134-5p表达水平较低(P<0.05)。circVANGL1可靶向调控miR-134-5p的表达,miR-134-5p可靶向调控CDCA3蛋白的表达。干扰circVANGL1表达后,乳腺癌干细胞增殖活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、侵袭细胞数以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。下调miR-134-5p表达或过表达CDCA3可部分逆转干扰circVANGL1对乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的作用(P<0.05)。结论circVANGL1可能通过miR-134-5p/CDCA3轴调控乳腺癌干细胞的增殖、迁移、侵袭。

CDCA3在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA3)在上皮性卵巢癌中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集于本院进行手术切除的50例患者的卵巢癌组织和30例患者的正常卵巢组织,选取A2780、Hey、CAOV3、SKOV3细胞进行研究。RT-PCR检测组织和细胞中CDCA3 mRNA表达水平,Western blot检测组织和细胞中CDCA3蛋白表达水平。将CAOV3细胞分为沉默组和Control组,沉默组转染CDCA3 siRNA,Control组转染阴性对照序列;将Hey细胞分为过表达组和对照组,过表达组用CAOV3慢病毒感染,对照组用空载体慢病毒感染。CCK-8检测细胞活性;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果与正常卵巢组织比较,上皮性卵巢癌组织中CDCA3 mRNA和蛋白表达水平较高(P<0.05);在A2780、Hey、CAOV3、SKOV3上皮性卵巢癌细胞系中,CAOV3 mRNA和蛋白表达水平最高,而Hey最低。沉默CDCA3后CAOV3细胞CDCA3蛋白表达水平、细胞增殖活力、侵袭和迁移能力降低(P<0.05),Cyclin D1、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)。过表达CDCA3后Hey细胞CDCA3蛋白表达水平、细胞增殖活力、侵袭和迁移能力升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论CDCA3在上皮性卵巢癌中高表达,能够促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

卵巢上皮性癌组织中CDCA3的表达及其与生存预后的关系

目的探讨卵巢上皮性癌组织中细胞分裂周期相关蛋白3(cell division cycle associated protein 3,CDCA3)的表达与患者生存预后的关系。方法收集2016-06/2019-06月作者医院手术切除的82例患者的卵巢上皮性癌组织,另收集同期40例子宫肌瘤或子宫腺肌病患者手术切除的正常卵巢组织。免疫组织化学染色法检测组织CDCA3表达。随机选取10例患者的卵巢上皮性癌组织和10例患者的正常卵巢组织,采用Western blot检测CDCA3蛋白表达水平。Cox回归分析探讨卵巢上皮性癌生存预后的影响因素,生存分析采用Kaplan-Meier法。结果卵巢上皮性癌组织中CDCA3高表达率高于正常卵巢组织[65.85%(54/82)vs.20.00%(8/40),P<0.05]。卵巢上皮性癌组织CDCA3蛋白相对表达量高于正常卵巢组织(1.32±0.13 vs.0.38±0.08,P<0.05)。病理分级为G3级卵巢上皮性癌患者的CDCA3高表达率高于卵巢上皮性癌G1~G2级患者(P<0.05),病理分期为Ⅲ~Ⅳ期卵巢上皮性癌患者的CDCA3高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05),淋巴结转移卵巢上皮性癌患者的CDCA3高表达率高于未转移患者(P<0.05),化疗耐药卵巢上皮性癌患者的CDCA3高表达率高于未耐药患者(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,病理分级(HR=1.672)、病理分期(HR=1.803)、淋巴结转移(HR=1.325)和CDCA3表达(HR=2.671)是卵巢上皮性癌患者生存预后的影响因素(P<0.05)。CDCA3低表达卵巢上皮性癌患者的中位生存时间高于CDCA3高表达患者(47.50个月vs.21.40个月,P<0.05)。结论卵巢上皮性癌组织CDCA3高表达与不良生存预后有关,可能成为卵巢上皮性癌的生物学标志物。

CDCA3在肝细胞肝癌增殖中的作用研究

目的探讨细胞周期相关因子3(CDCA3)在肝癌中的生物学行为。方法收集2018年1月~2019年6月在武汉大学人民医院肝胆外科行手术治疗的肝细胞肝癌患者的组织标本,共30例肝癌标本和癌旁标本;分别采用Real-Time PCR检测不同组织中的CDCA3的表达情况;采用lip3000转染法分别将CDCA3干扰RNA序列和对照序列转入肝癌细胞株,应用CCK-8、EdU免疫荧光染色检测细胞增殖,流逝细胞术检测细胞周期。结果肝癌组织CDCA3的表达量明显高于癌旁组织,差异有高度统计学意义(P<0.01)。HepG2、Huh7、SMMC-7721细胞中CDCA3的表达量明显高于LO2细胞,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而BEL-7402细胞中CDCA3的表达量与LO2细胞的表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。siCDCA3#1和siCDCA3#2下调SMMC-7721细胞CDCA3的表达量与对照组(siNC)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),故选取SMMC-7721细胞完成后续研究。siCDCA3#1和siCDCA3#2下调SMMC-7721细胞CDCA3的表达量后,24 h和48 h细胞增殖数明显低于siNC,差异均有统计学意义(均P<0.05)。并且EdU检测阳性细胞数明显低于siNC。siCDCA3#2下调SMMC-7721细胞CDCA3表达量后,细胞周期的G1期时间较siNC延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CDCA3能够促进肝癌细胞增殖,是潜在的治疗靶点。

CDCA3在下咽鳞癌中的表达及临床意义

目的:探索与下咽鳞癌生长、转移及预后相关的分子标记物,为开发下咽鳞癌新的疗法提供理论依据。方法:分析Oncomine肿瘤芯片数据库中细胞分裂周期相关蛋白3(cell division cycle associated protein 3,CDCA3)在头颈部鳞癌及癌旁组织中的表达差异,检测下咽鳞癌及癌旁组织中CDCA3的表达,分析其表达水平与下咽鳞癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:通过分析Oncomine肿瘤芯片数据库中CDCA3的DNA拷贝数,发现在肿瘤基因图谱(TCGA)数据集中,相比全血及正常头颈部组织,CDCA3的DNA拷贝数在头颈鳞癌组织中显著上调(P<0.05)。下咽鳞癌组织中CDCA3的mRNA相对表达水平较癌旁正常黏膜表达水平升高(P<0.05)。CDCA3的蛋白表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示CDCA3阳性表达组患者的总生存期显著低于CDCA3阴性表达组(P<0.05)。结论:CDCA3在下咽鳞癌组织中高表达,与下咽鳞癌患者原发肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移情况密切相关,是影响患者预后的独立危险因素。

SKA3在食管鳞状细胞癌中表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达意义及其与临床病理参数的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测SKA3蛋白在75例食管鳞状细胞癌组织和20例正常食管组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用癌症基因组图谱和基因芯片公共数据库分析SKA3 mRNA在203例食管鳞状细胞癌和102例正常对照中的表达。GEPIA在线工具分析SKA3与细胞周期调控基因的关系。Linkedomics及DAVID在线网站数据评价SKA3基因的共表达基因及其富集通路。结果在食管鳞状细胞癌组织中,SKA3 mRNA和蛋白的表达水平均高于正常食管上皮组织(P<0.05)。SKA3高表达与食管鳞状细胞癌患者肿瘤分化程度、临床分期及肿瘤神经侵犯密切相关(P<0.05)。SKA3与细胞周期调控基因CCND1、CDK1及CDK4的表达水平呈正相关(P<0.001)。结论在mRNA和蛋白水平上,SKA3在食管鳞状细胞癌中均高表达。SKA3高表达可能与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关,其可能通过调控细胞周期进程而促进食管鳞状细胞癌的进展。

细胞分裂周期相关因子3对乳腺癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨细胞分裂周期相关因子3(CDCA3)对乳腺癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法(1)选取4种人乳腺癌细胞MDA-MB-361、CAMA-1、MCF-7、SKBR-3,采用Western blot及实时荧光定量PCR分别检测各细胞中CDCA3蛋白及mRNA的表达水平,选取CDCA3表达水平较高的人乳腺癌细胞进行后续实验。(2)将筛选出的人乳腺癌细胞分为空白组、si-NC组、si-CDCA3组,空白组不给予干预,si-NC组、si-CDCA3组分别给予si-NC、si-CDCA3转染。转染3 d后,检测各组细胞增殖抑制率、细胞周期及细胞凋亡率。结果(1)MCF-7细胞和MDA-MB-361细胞的CDCA3蛋白及mRNA表达水平均高于CAMA-1细胞和SKBR-3细胞(均P<0.05),故选取前两种细胞进行后续实验。(2)无论是MCF-7细胞还是MDA-MB-361细胞,空白组、si-NC组、si-CDCA3组细胞的增殖抑制率、G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率均依次升高(均P<0.05)。结论CDCA3在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-361中呈高表达。沉默CDCA3的表达可抑制MCF-7细胞和MDA-MB-361细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期,并促进细胞凋亡。

miR-186-5p负性调控CDCA3对高脂高糖诱导的胰岛β细胞具有保护作用

目的探讨miR-186-5p通过细胞分裂周期相关因子3 (cell division cycle associated 3 protein,CDCA3)调控高脂高糖诱导的胰岛β细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法以胰岛β细胞NIT-1为对象,利用高脂高糖诱导损伤,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术评估细胞凋亡,Western blot分析细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)测定miR-186-5p、CDCA3 mRNA表达。生物信息学预测和双荧光素酶活性检测miR-186-5p与CDCA3的靶向关系。在NIT-1细胞中转染miR-186-5p或si-CDCA3,并进行高脂高糖处理,观察其对细胞增殖、凋亡的影响。结果高脂高糖明显降低NIT-1细胞的细胞活力,Ki-67、PCNA、Bcl-2蛋白表达,以及miR-186-5p表达,同时显著提高细胞的凋亡率和Bax蛋白表达,以及CDCA3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。miR-186-5p靶向负调控基因CDCA3。过表达miR-186-5p或敲减CDCA3明显增加高脂高糖损伤的NIT-1细胞的细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2蛋白表达,显著降低高脂高糖损伤的NIT-1细胞的凋亡率和Bax蛋白表达(P<0.05)。结论 miR-186-5p通过靶向负性调控CDCA3基因表达,促进高脂高糖诱导的胰岛β细胞的增殖,抑制细胞凋亡,从而保护高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤。

健脾清热活血方干预PI3K-Akt/mTOR信号通路调控CDK1表达防治溃疡性结肠炎相关癌变

目的:观察健脾清热活血方对溃疡性结肠炎相关癌变小鼠组织形态、超微结构、PI3K-Akt/mTOR信号通路中相关指标及CDK1的表达变化,探讨其防治溃结相关癌变的可能机制。方法:140只SPF级Balb/c小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阻断剂组、治疗组及对照组,每组20只;除外正常组,其余各组采用DMH/DSS复合法制备溃结癌变模型,模型组予等剂量生理盐水,阻断剂组予PI3K阻断剂LY294002干预,治疗组予不同剂量健脾清热活血方药,对照组予美沙拉嗪,连续干预16周。应用光镜及电镜观察溃结癌变小鼠结肠组织形态学及超微结构变化;Western-blot及Real-time PCR检测结肠黏膜P110、P85、P-AKT、mTOR、CDK1蛋白及其mRNA表达变化。结果:模型组见黏膜上皮脱落,溃疡形成,腺体萎缩,部分有浸润癌表现,治疗组所见黏膜损伤程度较模型组有不同程度改善,其中以中、高剂量组结肠黏膜损伤改善情况显著,部分可见黏膜充血并肿胀,不典型增生及淋巴滤泡出现(P<0.05)。与正常组比较,模型组P110、P85、CDK1蛋白表达量上升(P<0.05);与模型组比较,治疗组P85、CDK1蛋白表达下降(P<0.05)。与模型组比较,治疗组P85、P-Akt基因表达下调(P<0.05)。各组间P110、mTOR基因表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾清热活血方可能通过下调P85、P-Akt,介导CDK1表达,诱导炎症缓解,修复肠道黏膜,发挥防治UCAC的效用。

1，4-双[3-脂肪基／苯基-1，2，4-三唑并[3，4-b]-1，3，4-噻二唑-6-基]芳基衍生物的合成与生物活性

在三氯氧磷催化下,6种3-脂肪基-1,2,4-三唑(1a^1f)和3-苯基-1,2,4-三唑(1g)分别与对苯二甲酸和2-氨基-1,4-对苯二甲酸发生环化反应,高产率合成了14种双枝三唑并噻二唑稠环衍生物(2和3),并对其进行了结构表征及药物活性测试.目标化合物对Cdc25B和PTP1B抑制活性筛选结果表明,化合物2f,3a和3g对Cdc25B有较高的抑制活性,IC50值分别为(3.45±0.60),(0.69±0.10)和(1.52±0.19)μg/mL;化合物3a和3b对PTP1B表现出较高的抑制活性,IC50值分别为(0.98±0.13)和(2.00±0.16)μg/mL.

肾癌组织中CDCA3与CDCA5的表达水平及临床意义

目的探讨肾癌组织中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA3)与细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)的表达水平及临床意义。方法选取2014年7月至2016年3月本院收治的102例肾癌患者作为研究对象,获取肾癌组织和癌旁组织,采用免疫组化法测定细胞中CDCA3、CDCA5的表达水平。分析CDCA3、CDCA5蛋白表达水平与肾癌患者临床病理特征之间的关系,并采用多因素Cox比例风险回归分析影响肾癌患者预后的危险因素。结果肾癌组织中的CDCA3、CDCA5蛋白表达阳性率均高于癌旁组织(均P<0.001)。CDCA3、CDCA5蛋白表达水平与年龄、性别均无相关性(均P>0.05);CDCA3、CDCA5蛋白表达水平与肿瘤最大径、TNM分期、病理级别、淋巴结转移、复发均有相关性(均P<0.05),且肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期越高、病理级别越高、有淋巴结转移、有复发时,CDCA3、CDCA5的阳性表达率越高(均P<0.05)。CDCA3、CDCA5阳性肾癌患者的5年生存率均较阴性患者显著降低(均P<0.05)。肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴血管浸润、病理级别高、有复发、CDCA3及CDCA5阳性肾癌患者的5年生存率均显著降低(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、病理级别高、CDCA3及CDCA5表达阳性是影响肾癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论CDCA3、CDCA5在肾癌组织中过表达,CDCA3、CDCA5的表达水平与肾癌的病理特征有相关性,CDCA3、CDCA5表达阳性是影响肾癌患者预后的独立危险因素。

新型细胞分裂周期25磷酸酯酶B和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂三唑并噻二唑-均三嗪的合成

以苯亚氨基为桥,设计合成了18个含有三唑并噻二唑和均三嗪双杂环的新型分子(4a^4i和5a^5i),并利用红外光谱、核磁共振谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。将吗啉和四氢吡咯分别与三聚氯氰发生双取代反应合成三嗪衍生物(1A和1B),然后将1A和1B分别与对氨基苯甲酸反应,合成重要中间体(2A和2B)。通过熔融法将8种脂肪酸与二氨基硫脲缩合得1,2,4-三唑衍生物3a^3h,最后将2A和2B在三氯氧磷和四丁基溴化铵催化下分别与3a^3h反应得目标产物。为了进一步比较3-脂肪基和3-苯基对药效活性的影响,利用相同方法设计合成了目标产物4i和5i。评价了目标产物对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性。结果发现:所有目标分子对Cdc25B均表现出良好的抑制活性,半抑制浓度(IC_(50)值)在2.40~0.31 mg/L之间,目标分子4a^4f和5a^5i的IC_(50)值均低于阳性参照物Na_3VO_4[(1.25±0.14)mg/L],有望成为潜在的Cdc25B抑制剂;在PTP1B测试中,14个目标分子具有优良的抑制活性,IC_(50)值在0.98~0.37 mg/L之间,低于阳性参照物齐墩果酸[(1.19±0.27)mg/L],有望成为潜在的PTP1B抑制剂。

不同分子分型膀胱癌的临床特征及预后

目的:以膀胱癌细胞分裂周期相关因子3(CDCA3)基因分型为例,分析不同分子分型膀胱癌患者的临床特征及预后情况,为临床中治疗方案的制定提供参考。方法:以美国癌症基因组图谱(TCGA)数据库为基础,下载147份膀胱癌CDCA3基因表达谱和相关病例的资料信息,根据CDCA3表达水平由低到高排列,找出中位数,将低于中位数的样本设置为CDCA3低表达组(74例),将高于中位数的样本设置为CDCA3高表达组(73例),对比不同CDCA3基因型膀胱癌患者的临床特征和预后,并以基因集富集分析(GSEA)CDCA3在膀胱癌发生及发展中的作用及机制。结果:CDCA3高表达组肌层浸润患者比例、高级别T分期及N分期、肿瘤转移患者比例均高于CDCA3低表达组,而肿瘤分化程度低于CDCA3低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CDCA3高表达组1年、3年复发率均高于CDCA3低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CDCA3高表达组1年、3年生存率均低于CDCA3低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GSEA发现CDCA3高表达膀胱癌细胞中富集了G2M检查点、糖酵解、E2F信号通路、MYC信号通路、MTOR信号通路、PTK通路、PI3K-AKT-m TOR信号通路、有丝分裂纺锤体、去折叠蛋白反应、胆固醇蛋白、精子发生等基因集。结论:CDCA3基因表达水平越低患者的肿瘤分期越低、肿瘤转移风险越小、分化程度越高,预后状况越好,复发率及死亡率也更低。CDCA3基因作用的发挥是通过调控多种基因通路实现的,CDCA3基因可能是潜在的膀胱癌生物标志物,可以通过分析其表达水平评估病情及预后,并展开针对性治疗。

CDCA3在肾癌中的表达及其对肾癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨细胞周期相关因子3(CDCA3)在肾癌组织中的表达水平及其对肾癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:回顾性分析来宾市人民医院2012年1月1日—2015年1月1日收治86例肾癌患者临床病理资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法分析CDCA3在肾癌组织和癌旁组织中表达水平;分析CDCA3在肾癌组织中表达水平与预后关系;肾癌细胞系(786-O)中转染si-CDCA3及阴性对照;MTT法检测细胞增殖能力变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化;Westernblot检测CDCA3、CyclinD1和cleaved caspase-3蛋白的表达变化。结果:CDCA3在肾癌组织中表达水平高于对应癌旁组织[(1.66±0.13) vs.(1.07±0.16),t=4.137,P<0.05]且表达水平与预后相关(P<0.05);肾癌细胞中转染si-CDCA3和si-NC,CDCA3 Mrna[(0.97±0.33) vs.(1.27±0.40),t=2.137,P<0.05]和蛋白表达下调[(0.45±0.12) vs.(0.22±0.16),t=2.455,P<0.05];沉默CDCA3,G;/G;比例增加[(61.34±0.42) vs.(50.57±0.38),t=9.367,P<0.05]、肾癌细胞凋亡率增加[(21.42±2.36) vs.(48.64±3.53),t=5.016,P<0.05]、CyclinD1蛋白表达下调[(0.62±0.25) vs.(0.44±0.09),t=2.349,P<0.05]、cleaved caspase-3蛋白表达上调[(0.35±0.10) vs.(0.46±0.50),t=2.943,P<0.05]。结论:CDCA3 mRNA在肾癌组织中高表达,可能通过靶向CyclinD1和cleaved caspase-3蛋白调控肿瘤细胞增殖和凋亡。

白消安对U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响

目的探究白消安对U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响。方法培养U87胶质瘤干细胞,分为四组,A组加入200μL含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基,B、C、D三组分别加入200μL含20、50、100μmol/L白消安的DMEM/F12培养基。比较四组细胞增殖情况[四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)]、细胞凋亡情况[即B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达水平],以及细胞周期。结果培养24 h后,四组U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h、72 h后,B、C、D组U87胶质瘤干细胞吸光度低于A组(P<0.05);培养48 h、72 h后,B、C、D组U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组U87胶质瘤干细胞Bax、Caspase-3、Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于A、B组,比较差异有统计学意义[吸光度值:C_(Bax)(0.38±0.01)比A_(Bax)(0.46±0.04)、B_(Bax)(0.41±0.01);C_(Caspase-3)(0.45±0.02)比A_(Caspase-3)(0.54±0.01)、B_(Caspase-3)(0.47±0.02);C_(Bax/Bcl-2)(1.19±0.04)比A_(Bax/Bcl-2)(1.36±0.01)、B_(Bax/Bcl-2)(1.22±0.04);阳性细胞表达率:C_(Bax)(47.53±1.34)%比A_(Bax)(39.81±4.02)%、B_(Bax)(39.51±1.37)%;C_(Caspase-3)(65.17±2.34)%比A_(Caspase-3)(54.42±1.34)%、B_(Caspase-3)(49.16±2.31)%;C_(Bax/Bcl-2)(60.24±4.10)%比A_(Bax/Bcl-2)(35.47±1.20)%、B_(Bax/Bcl-2)(37.41±4.12)%;P<0.05];D组U87胶质瘤干细胞Caspase-3、Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于A、B组,比较差异有统计学意义[吸光度值:D_(Bax)(0.37±0.01)比A_(Bax)(0.46±0.04)、B_(Bax)(0.41±0.01);D_(Caspase-3)(0.28±0.01)比A_(Caspase-3)(0.54±0.01)、B_(Caspase-3)(0.47±0.02);D_(Bax/Bcl-2)(0.97±0.02)此A_(Bax/Bcl-2)(1.36±0.01)、B_(Bax/Bcl-2)(1.22±0.04);阳性细胞表达率:D_(Caspase-3)(68.06±1.09)%比A_(Caspase-3)(54.42±1.34)%、B_(Caspase-3)(49.16±2.31)%;D_(Bax/Bcl-2)(65.10±2.15)%比A_(Bax/Bcl-2)(35.47±1.20)%、B_(Bax/Bcl-2)(37.41±4.12)%;P<0.05]。A组、D组处于G1期细胞分别占8.20%、3.22%,处于G2/M期细胞分别占16.07%、12.18%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组、D组处于G0/G1期细胞分别占52.27%、58.85%,处于S期细胞分别占23.36%、35.75%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白消安可抑制U87胶质瘤干细胞的增殖,促进其凋亡,并且呈现一定量效关系;机制可能与白消安上调Bcl-2、Bax、Caspase-3表达有关。

半枝莲提取物通过抑制STAT3/SKP2信号通路促进鼻咽癌细胞周期阻滞

目的:以人鼻咽癌CNE1细胞为研究对象,通过在培养液中添加半枝莲提取物(0.25、0.5、1 g·L^(-1)),来进一步探讨半枝莲提取物对鼻咽癌细胞周期阻滞的影响及其可能的分子作用机制。方法:半枝莲提取物处理CNE1细胞后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖情况;吉姆萨(Giemsa)染色检测克隆形成率;流式细胞术检测细胞周期分布;并且通过小干扰核糖核酸(siRNA)或者过表达的方式,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测mRNA的相对表达。结果:与空白组比较,半枝莲提取物组CNE1细胞的增殖和克隆形成率明显降低(P<0.05,P<0.01),呈浓度和时间依赖性。与空白组比较,半枝莲提取物组细胞合成前期(G_(0)/G_(1))升高(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,半枝莲提取物组S期激酶相关蛋白2(SKP2)表达水平显著降低(P<0.01);与半枝莲提取物组比较,过表达SKP2+半枝莲提取物组p21和p27蛋白水平显著降低(P<0.01)。与空白组比较,半枝莲提取物组CNE1细胞中转录激活因子3(STAT3)信号的活化及STAT3磷酸化水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:半枝莲提取物能够有效抑制鼻咽癌细胞CNE1的增殖,其机制可能与其作用于STAT3/SKP2途径有关。

核纤层蛋白B2通过细胞分裂周期相关蛋白3调控内皮细胞血管新生

目的探讨核纤层蛋白B2(LMNB2)在血管内皮细胞介导的血管新生中的作用及其调控方式。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)。利用LMNB2的短发夹RNA(shRNA)质粒在HUVEC细胞中下调LMNB2的表达,检测对内皮细胞体外成管的影响,统计单视野管状结构长度及节点数目;通过噻唑蓝(MTT)、细胞计数试剂盒(CCK-8)及划痕实验检测LMNB2对内皮细胞增殖及迁移的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞增殖及迁移相关标志物,包括细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9的表达;实时定量PCR(qPCR)检测细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA3)的mRNA表达;荧光素酶报告基因实验及CHIP实验检测LMNB2对CDCA3的调控作用。采用Student’st检验进行分析。结果在HUVEC细胞中,下调LMNB2会抑制内皮细胞血管新生,单视野平均管状结构总长由(6.45±0.63) mm下降至(2.61±0.52) mm,下降59.5%(t=4.709,P<0.01),节点数量下降由单视野的(14.75±1.25)个下降为(7.75±0.48)个,下降57.5%(t=5.230,P<0.01);LMNB2的敲低会抑制内皮细胞的增殖与迁移,伤口愈合率下降25%(t=4.541,P<0.05),且Ki-67、PCNA、MMP-2及MMP-9表达均显著降低;在HUVEC细胞中,LMNB2结合CDCA3启动子位点,促进CDCA3的转录。回复实验证实下调LMNB2后过表达CDCA3会回复由LMNB2缺失导致的增殖及血管新生缺陷。结论 LMNB2可调控内皮细胞增殖、迁移,并通过调控CDCA3的表达调控血管新生。