CDCA5基因在子宫颈癌组织细胞中表达变化及对肿瘤细胞增殖的影响

目的 观察细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)基因在子宫颈癌组织细胞中的表达变化,观察CDCA5基因过表达对子宫颈癌细胞增殖能力的影响,并探讨可能的分子机制。方法 收集子宫颈癌组织和癌旁正常组织各60例,培养人宫颈上皮永生化细胞系H8和人子宫颈癌细胞系SiHa、C-33A、MS751、HeLa,采用实时荧光定量PCR法检测组织和细胞中的CDCA5 mRNA。将CDCA5 mRNA相对表达量最低的子宫颈癌细胞随机分为对照组、过表达组,分别转染pCDH空载体质粒、CDCA5过表达质粒,采用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖能力,Western blotting法检测细胞中的p-ERK、p-AKT蛋白。结果 子宫颈癌组织中CDCA5 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05);子宫颈癌细胞系SiHa、C-33A、MS751、HeLa中CDCA5 mRNA表达高于H8细胞,其中HeLa细胞中相对表达量最低(P均<0.05)。过表达组24、48、72 h细胞增殖能力高于对照组,过表达组细胞平板克隆形成数量及p-ERK、p-AKT蛋白表达高于对照组(P均<0.05)。结论 CDCDA5基因在子宫颈癌组织、细胞中高表达,CDCDA5基因过表达可增强人子宫颈癌细胞的增殖能力,该作用可能与调控ERK/AKT信号通路有关。

CDCA5、miR-146a、S100A7水平与过敏性鼻炎严重程度的关系及其临床价值

目的 检测过敏性鼻炎(AR)患者外周血中细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)、微小RNA-146a(miR-146a)及鼻腔分泌物中S100钙结合蛋白A7(S100A7)的水平,分析上述3项指标与AR病情严重程度的关系及其对AR的临床诊断价值。方法 回顾性选取2019年7月至2022年3月于延安市人民医院就诊的83例AR患者作为观察组,另选取同期在该院体检且无过敏性疾病和呼吸道相关疾病的健康人50例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶联反应和酶联免疫吸附试验分别检测两组受试者外周血中CDCA5、miR-146a水平及鼻腔分泌物中S100A7水平;采用Spearman相关分析CDCA5、miR-146a、S100A7与AR病情严重程度的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CDCA5、miR-146a、S100A7对AR的诊断效能。结果 观察组患者CDCA5水平高于对照组,miR-146a和S100A7水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CDCA5水平与AR病情严重程度呈正相关(r=0.637,P<0.05);miR-146a、S100A7水平与AR病情严重程度呈负相关(r=-0.596、-0.605,P<0.05)。CDCA5、miR-146a、S100A7单独诊断AR的曲线下面积(AUC)分别为0.778、0.784、0.806,而3项指标联合诊断AR的AUC为0.897、灵敏度为87.9%、特异度为83.6%。结论 CDCA5、miR-146a、S100A7水平与AR患者病情严重程度关系密切,3项指标联合检测能提高对AR的临床诊断效能,对评估患者病情及指导临床诊治具有重要意义。

结肠癌患者癌组织中CDCA5的表达变化及机制

目的观察结肠癌患者癌组织及癌旁正常组织中细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)的表达水平,并探讨其在结肠癌发病中的机制研究。方法收集石家庄市人民医院住院治疗的结肠癌组织及癌旁组织各30份,采用免疫组织化学检测结肠癌组织及癌旁正常组织中CDCA5的蛋白水平,采用qRT-PCR、Western Blot检测结肠癌患者癌组织及癌旁正常组织中CDCA5的mRNA及蛋白表达水平,同时采用qRT-PCR和Western blot检测癌组织及癌旁正常组织细胞周期蛋白B1(cyclinB1)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、P21、半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase3)mRNA及蛋白的表达。结果结肠癌患者癌组织中CDCA5在mRNA及蛋白水平明显高于结肠癌旁正常组织(P<0.01),癌组织相关基因cyclinB1、ERK、P21的mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.01),而caspase3表达显著降低(P<0.05或<0.01)。结论结肠癌组织中CDCA5高表达,可能通过上调cyclinB1、ERK、P21及下调caspase3参与结肠癌的发生发展。

miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响

目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达;双荧光素酶报告实验验证miR-105-5p与CDC5L的靶向关系。结果:与正常脑组织比较,胶质瘤组织中miR-105-5p水平显著下降,CDC5L mRNA显著升高(P<0.05)。miR-105-5p表达水平与CDC5L表达水平呈负相关(r=-0.512,P=0.002)。与control组、si-NC组比较,si-CDC5L组细胞p21蛋白表达量升高(P<0.05),24h、48h、72h OD值、迁移细胞数、CDC5L mRNA表达量及CDC5L、CyclinDl、MMP-2、MMP-9蛋白表达量均降低(P<0.05);与control组、miR-NC组比较,miR-105-5p mimics组miR-105-5p表达量和p21蛋白表达量升高(P<0.05),24h、48h、72h OD值、迁移细胞数、CDC5L mRNA表达量以及CDC5L、CyclinDl、MMP-2、MMP-9蛋白表达量均降低(P<0.05);过表达CDC5L逆转miR-105-5p对U251细胞的增殖、迁移及CyclinDl、MMP-2、MMP-9、p21蛋白蛋白的影响(P<0.05)。双荧光素酶实验验证,CDC5L是miR-105-5p的下游靶点。结论:miR-105-5p通过靶向下调CDC5L抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移。

细胞分裂周期相关蛋白5在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)在肝细胞肝癌中的表达及临床意义。方法取260例原发性肝细胞肝癌患者的肝细胞肝癌组织,取52例肝脏良性病变患者的正常肝组织作为对照。蛋白质印迹法(Western blot)检测CDCA5、ERK、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)的相对表达量;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CDCA5、ERK mRNA的相对表达量,并分析其与患者临床特征的关系。采用Pearson相关性分析CDCA5和ERK与肝细胞肝癌患者病理特征间的相关性。结果肝细胞肝癌组织中CDCA5、ERK mRNA的相对表达量均高于正常肝组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肝细胞肝癌组织中CDCA5、ERK、CDK1和cyclin B1蛋白的相对表达量均高于正常肝组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同肿瘤直径、Edmondson分级、巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期、合并门静脉癌栓情况和甲胎蛋白(AFP)水平肝细胞肝癌患者肝细胞肝癌组织中CDCA5、ERK mRNA的相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。CDCA5、ERK的表达与Edmondson分级为Ⅲ~Ⅳ级、BCLC分期为B~C期、有门静脉癌栓和AFP水平升高呈正相关(P﹤0.05)。结论CDCA5可能依赖ERK的磷酸化来促进CDK1、cyclin B1的表达,促进肿瘤细胞的恶性增殖,临床有望将其作为治疗肝细胞肝癌的新靶点。

PTBP1结合CDC5L对胃癌细胞增殖活动的影响

目的为探索胃癌细胞增殖的分子机制,研究多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)和细胞分裂周期5样(裂殖酵母)(CDC5L)基因结合促进胃癌细胞增殖凋亡的影响。方法GEPIA2数据库预测PTBP1和CDC5L在胃癌细胞中的表达;RT⁃qPCR和Western blot检测PTBP1和CDC5L的表达水平;GEPIA2数据库预测CDC5L和PTBP1之间的相关性,并通过免疫蛋白沉淀实验检测验证。通过转染,干扰PTBP1和CDC5L的表达。随后,克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl⁃2和caspase3的表达。结果GEPIA2数据库预测所示PTBP1和CDC5L在胃癌中表达差异有统计学意义(P<0.05),且高表达。与癌旁组织中蛋白表达相比,PTBP1和CDC5L在胃癌组织中表达提高(P<0.01);比正常细胞中蛋白表达相比,PTBP1和CDC5L在胃癌细胞中表达均上调(P<0.01);GEPIA2数据库显示PTBP1与CDC5L具有正向线性相关性;免疫沉淀实验结果表明PTBP1和CDC5L可相互结合。细胞克隆实验表明PTBP1和(或)CDC5L被抑制后,胃癌细胞增殖水平下降(P<0.05);且敲低PTBP1和/或CDC5L后胃癌细胞周期G0/G1期受阻滞(P<0.001)。细胞凋亡水平检测显示,与对照组相比,干扰PTBP1和/或CDC5L后,胃癌细胞凋亡增多(P<0.01);相关凋亡蛋白差异具有统计学变化(Bcl⁃2,P<0.05;Bac,P<0.01;cleaved⁃caspase3/caspase3,P<0.05)。结论PTBP1和CDC5L具有结合关系,敲低PTBP1和CDC5L的表达具有抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡作用。

细胞分裂周期蛋白-6、同源异型盒基因-5蛋白表达水平与乳腺癌患者组织学分级的关联性分析

目的:探讨同源异型盒基因-5(HOXA5)、细胞分裂周期蛋白-6(CDC6)蛋白表达水平与乳腺癌患者组织学分级的关联性。方法:选取乳腺癌患者119例与癌前病变119例患者为研究对象。所有乳腺癌患者均采取手术治疗,并于术中切取病变组织,用免疫组化法测定HOXA5及CDC6阳性表达情况。统计乳腺癌组与癌前病变组、乳腺癌组不同组织分化程度患者间HOXA5及CDC6阳性表达情况。结果:与癌前病变组比较,乳腺癌组CDC6(74.79%vs 19.33%,P<0.05))和HOXA5(68.07%vs 26.05%,P<0.05)阳性表达率显著增加;不同组织分化程度乳腺癌患者间HOXA5及CDC6阳性表达率存在显著差异(P<0.05),且高分化患者CDC6阳性率(53.85%)低于中分化(79.59%)及低分化患者(93.55%),高分化患者HOXA5阳性率(51.28%)低于低分化患者(87.10%)(P<0.05)。结论:乳腺癌患者肿瘤组织中HOXA5及CDC6过表达与乳腺癌组织学分级密切相关。

川楝素通过调控CDCA5表达对肺腺癌细胞体内外生长的抑制作用

目的 研究川楝素通过调控细胞分裂与周期相关蛋白5(CDCA5)的表达对肺腺癌细胞体内外生长的抑制作用。方法 用TCGA数据库分析CDCA5在不同肺组织中的表达情况;用蛋白质印迹法检测BEAS-2B细胞和A549细胞中CDCA5表达水平;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测不同浓度川楝素对A549细胞的存活率的影响。将A549细胞随机分为4组,对照组为正常细胞正常培养;川楝素组为正常细胞加入40μmol·L^(-1)川楝素培养;川楝素+pcDNA组和川楝素+CDCA5组分别在转染pcDNA空载体和CDCA5过表达载体后,加入40μmol·L^(-1)川楝素培养。培养48 h后,用CCK-8和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况,以蛋白质印迹法检测各组细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。将BALB/c裸鼠随机分组并构建sh-NC和sh-CDCA5稳转细胞株与裸鼠移植瘤模型,每日分别腹腔注射0.9%NaCl和40μmol·L-1的川楝素溶液,观察并记录肿瘤组织体积、体质量变化。结果 CCK-8结果显示:A549细胞经10、20、30、40、50、60、70μmol·L-1川楝素干预48 h后的存活率分别为(80.74±8.71)%、(72.96±6.53)%、(61.01±4.86)%、(51.20±3.13)%、(42.10±5.94)%、(38.93±3.18)%和(33.48±2.94)%,川楝素对A549细胞增殖具有显著的抑制作用。对照组、川楝素组、川楝素+pcDNA组和川楝素+CDCA5组的细胞增殖率分别为(100.00±4.19)%、(49.18±6.70)%、(55.75±5.74)%和(77.66±7.48)%,CDCA5蛋白相对表达水平分别为1.08±0.11、0.44±0.04、0.43±0.05、0.99±0.10。sh-NC组、sh-CDCA5组、川楝素+sh-NC组和川楝素+sh-CDCA5组裸鼠肿瘤组织中CDCA5蛋白相对表达水平分别为1.04±0.14、0.42±0.04、0.56±0.08、0.32±0.04。与sh-NC组相比,其他各组裸鼠形成的肿瘤块均明显减小、肿瘤体积和质量均明显下降(均P<0.05)。与川楝素+sh-NC组相比,川楝素+sh-CDCA5组对肿瘤形成的抑制作用更明显,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 川楝素对肺腺癌细胞在体内外的生长均具有抑制作用,主要与抑制CDCA5的表达有关。

细胞分裂周期相关蛋白5和叉头框蛋白A1在宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测宫颈癌组织中细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)和叉头框蛋白A1(FOXA1)的表达,分析两者在宫颈癌患者中的临床意义。方法选取2016年2月—2018年11月在丽水市人民医院确诊为宫颈癌的患者80例,利用实时荧光定量(qRT-PCR)技术检测宫颈癌组织和癌旁组织中CDCA5和FOXA1的相对表达量。分析宫颈癌组织中CDCA5和FOXA1表达与患者临床病理参数之间的关系。绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析CDCA5和FOXA1与宫颈癌患者预后的关系。分析宫颈癌组织中CDCA5与FOXA1表达的相关性。结果癌旁组织中CDCA5和FOXA1相对表达量分别为(1.00±0.00)和(1.00±0.00),宫颈癌组织中CDCA5和FOXA1相对表达量分别为(1.53±0.29)和(1.58±0.34),差异均有统计学意义(t=16.346、15.258,均P<0.05)。CDCA5和FOXA1相对表达量与宫颈癌患者的肿瘤直径、FIGO分期、肌层浸润深度之间关系密切(均P<0.05)。CDCA5和FOXA1高表达组患者的生存率低于低表达组患者(均P<0.05)。宫颈癌组织中CDCA5和FOXA1相对表达量呈正相关(r=0.548,P<0.05)。结论CDCA5、FOXA1在宫颈癌组织中表达上调,两者关系密切,可能共同参与宫颈癌的发病机制和病情进展,并且与患者预后有关。

胰腺癌组织中细胞分裂周期相关蛋白5的表达及其预后意义

目的:基于生物信息学方法分析胰腺癌组织中细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)的表达及其与预后的相关性。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载2021年1月至2021年12月168例胰腺癌样本RNA测序数据(HTSeq-FPKM)和相应的临床信息,从GEPIA2数据库中下载2021年1月至12月179例胰腺癌患者数据,同时整合TCGA和GTEx数据库中的171个正常胰腺组织样本。分析GEPIA2数据库中胰腺癌患者CDCA5 mRNA相对表达量及其与患者总生存(OS)和无病生存(DFS)的关系;结合患者临床资料,采用单因素和多因素Cox比例风险模型分析胰腺癌患者OS的影响因素;使用基因集富集分析(GSEA)探讨CDCA5在胰腺癌中可能参与的信号通路。结果:在GEPIA2数据库中,胰腺癌组织中CDCA5 mRNA相对表达量较正常胰腺组织升高,差异有统计学意义( P<0.05)。根据CDCA5 mRNA相对表达量的中位值将胰腺癌患者分为高表达组(89例)和低表达组(89例)(等于中位值者未分组),CDCA5 mRNA高表达的胰腺癌患者较低表达患者OS( P=0.024)和DFS差( P=0.025)。TCGA数据库中,N分期( HR=2.15,95% CI 1.24~3.72, P=0.006)和CDCA5( HR=1.71,95% CI 1.23~2.38, P=0.001)表达为胰腺癌患者OS的独立影响因素。GSEA富集分析结果表明,CDCA5 mRNA高表达主要富集在13个生物学通路[均 P<0.05,错误发现率(FDR)<0.005],其中包括细胞周期、DNA复制、同源重组、嘧啶代谢、错配修复、磷酸戊糖途径、糖酵解糖异生和p53等信号通路。CDCA5 mRNA的表达与HK2、PKM、PGK1、ALDOA、EN01和LDHA的表达均呈正相关(均 P<0.05)。 结论:CDCA5在胰腺癌组织中高表达,且与患者预后不良有关,可以作为胰腺癌的预后标志物。

肾癌组织中CDCA3与CDCA5的表达水平及临床意义

目的探讨肾癌组织中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA3)与细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)的表达水平及临床意义。方法选取2014年7月至2016年3月本院收治的102例肾癌患者作为研究对象,获取肾癌组织和癌旁组织,采用免疫组化法测定细胞中CDCA3、CDCA5的表达水平。分析CDCA3、CDCA5蛋白表达水平与肾癌患者临床病理特征之间的关系,并采用多因素Cox比例风险回归分析影响肾癌患者预后的危险因素。结果肾癌组织中的CDCA3、CDCA5蛋白表达阳性率均高于癌旁组织(均P<0.001)。CDCA3、CDCA5蛋白表达水平与年龄、性别均无相关性(均P>0.05);CDCA3、CDCA5蛋白表达水平与肿瘤最大径、TNM分期、病理级别、淋巴结转移、复发均有相关性(均P<0.05),且肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期越高、病理级别越高、有淋巴结转移、有复发时,CDCA3、CDCA5的阳性表达率越高(均P<0.05)。CDCA3、CDCA5阳性肾癌患者的5年生存率均较阴性患者显著降低(均P<0.05)。肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴血管浸润、病理级别高、有复发、CDCA3及CDCA5阳性肾癌患者的5年生存率均显著降低(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、病理级别高、CDCA3及CDCA5表达阳性是影响肾癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论CDCA3、CDCA5在肾癌组织中过表达,CDCA3、CDCA5的表达水平与肾癌的病理特征有相关性,CDCA3、CDCA5表达阳性是影响肾癌患者预后的独立危险因素。

不同温度下酿酒酵母细胞分裂周期蛋白Cdc5在有丝分裂中的分子动力学研究

【目的】探究不同温度下酿酒酵母细胞分裂周期蛋白Cdc5蛋白在有丝分裂中的分子动力学变化。【方法】本研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为材料,采用活细胞成像的方法,探究Cdc5蛋白在不同温度下在酿酒酵母有丝分裂过程中的精细分子动力学变化;通过测量OD595绘制生长曲线图,看其宏观的分裂情况是否与微观下Cdc5蛋白的分子动力学变化一致;利用流式细胞术检测细胞的细胞周期变化的情况。【结果】在胞质分裂时,Cdc5蛋白从母细胞进入子细胞,并在芽颈处发生聚集。25℃条件下细胞中Cdc5蛋白在芽颈处的聚集时间长,37℃条件下Cdc5蛋白在芽颈处聚集时间短,两者间存在显著差异;但两个温度下,细胞中Cdc5蛋白的表达量没有显著性差异。同时,温度也会影响Cdc5蛋白在降解过程中的动力学行为,包括Cdc5蛋白在母细胞与子细胞中荧光强度峰值出现的次数和时间。生长曲线结果显示,酿酒酵母单一细胞分裂周期的变化影响了其宏观的细胞生长,且酵母分裂速度越快,子细胞长宽比越小;细胞周期结果表明,37℃下Cdc5蛋白的动力学变化与酿酒酵母细胞周期变化一致,酿酒酵母细胞周期从G_(0)/G_(1)期进入S期,亦加速了酿酒酵母的分裂。【结论】本研究首次探究了不同温度下酿酒酵母有丝分裂中Cdc5蛋白的精细分子动力学及对应的酵母的宏观生长情况,结果表明温度会对Cdc5蛋白的动力学产生影响,且其精细分子动力学与酿酒酵母的分裂速度成正相关,该结果为进一步研究其在细胞有丝分裂中的功能提供了前期研究基础。