掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果 Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P<0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P<0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P<0.05)。结论 Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。

非小细胞肺癌组织EGFR突变及其临床意义的研究

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)的突变,探讨突变特征及其在肺癌治疗中的意义。方法:收集46例手术切除肺癌组织及其癌旁组织,分别提取DNA,采用PCR法扩增编码EGFR基因的第18、19、20及21外显子片段,对扩增片段进行DNA测序及分析。结果:46例NSCLC中12例(26.1%)患者肺癌组织存在EGFR酪氨酸激酶结合域的体细胞突变;癌旁组织均未发现突变。12例突变中,9例(75.0%)19号外显子上发生缺失突变,3例(25.0%)21号外显子上发生替代突变。伴细支气管肺泡癌分化特征的肺腺癌突变率(7/9,77.8%)显著高于普通腺癌(5/23,21.7%)和鳞癌(0/12,0)的突变率,P<0.05;女性突变率(9/15,60%)显著高于男性(3/31,9.7%),P<0.05;不吸烟者突变率(9/20,45%)显著高于吸烟者(3/26,11.5%),差异均有统计学意义,P<0.05。结论:国内NSCLC患者存在EGFR突变,女性、非吸烟者及伴细支气管肺泡癌分化特征的肺腺癌提示突变的高发性。

白英乙醇提取物对人卵巢癌HO8910细胞体外生长的抑制作用

目的:观察中药白英提取物对体外培养卵巢癌HO8910细胞的作用。方法:体外培养卵巢癌HO8910细胞,实验分正常对照组、顺铂组及白英乙醇提取物组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察HO8910细胞凋亡及形态变化。结果:与正常对照组比较,白英提取物组对HO8910细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),且呈明显的时效和量效关系;低剂量STE可增强顺铂(DDP)对HO8910细胞的抑制作用并使细胞凋亡显著增多,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等。结论:白英提取物能剂量依赖性地抑制HO8910细胞增殖和诱导细胞凋亡。

细胞内活性氧在甲基乙二醛促人腹膜间皮细胞分泌血管内皮生长因子中的作用

目的:观察葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响及细胞内活性氧(ROS)在其中的作用。方法:分别用不同浓度的MGO及抗氧化剂N-酰-L-半胱氨酸(NAC)作用于细胞,用RT-PCR和ELISA方法测定HPMC中VEGF的表达;再以氧化敏感的荧光染料2、7-二氢二氯荧光素(DCFH)染色,流式细胞仪测定细胞内ROS强度。结果:MGO能使细胞内ROS水平明显升高,呈浓度依赖效应;MGO同时以时效和量效方式促进HPMC中VEGF的表达;而NAC能够明显抑制MGO导致的细胞内ROS升高,同时抑制HPMC中VEGF的分泌。结论:MGO可能部分通过诱导细胞内ROS,促进HPMC表达VEGF,从而引起腹膜新生血管的增加,最终导致腹膜失超滤现象。

肾癌组织PDGFR及c-Fos的表达研究

目的 探讨PDGFR及蛋白c Fos的表达与肾细胞癌 (RCC)发生的关系。方法 应用免疫组化SP法检测 12例正常肾组织、14例癌旁肾组织、4 6例肾细胞癌组织中PDGFR和c Fos蛋白的表达 ,并结合肾癌的分级、分期和随访结果进行分析。结果 PDGFR及c Fos在RCC组织中的表达阳性率分别为 73.91%及 5 2 .17% ,明显高于正常组织及癌旁组织 ,有显著性差异。PDGFR在透明细胞癌中的表达阳性率明显高于颗粒细胞癌 ,有显著性差异。PDGFR及c Fos在RCC组织血管中的表达明显增强。PDGFR的表达与RCC的分级相关。结论 PDGFR及c Fos的过度表达与RCC的发生密切相关 ,并与肿瘤血管形成相关。PDGFR的表达与RCC的恶性程度相关。

HGF对糖尿病及心血管并发症的治疗作用

糖尿病以慢性高血糖为主要共同特征,高血糖是心血管疾病进展的独立的危险因素。糖尿病人群中动脉粥样硬化性疾病的患病率高、发病年龄较轻、病情进展快、多脏器同时受累较多。高血糖致血管内皮受损是动脉粥样硬化的重要原因之一;因而增加胰岛β细胞数量、改善胰岛β细胞功能,降低血糖;保护血管内皮细胞;可抑制动脉粥样硬化的进展,减少糖尿病心血管并发症。而肝细胞生长因子(HGF)是由间质细胞产生的多效性生长因子,能刺激多种类型的细胞分化、增殖、运动、迁移、促进新生血管形成;在糖尿病及心血管并发症的诊断和治疗中具有重要作用。本文就HGF对胰岛β细胞、血管内皮细胞和在心肌梗死中的具体作用及机制综述如下。

缺氧对肺腺癌细胞生长特性及血管形成的影响

目的 探讨缺氧对肺腺癌肿瘤生长及血管形成的影响。方法 人肺腺癌细胞株A549暴露于常氧(空气,5%CO2)、缺氧(1%O2,5%CO2,94%N2)、无氧(95%N2,5%CO2)环境48h后,将细胞接种于裸鼠皮下,观察其生长情况。通过免疫组化染色计数微血管密度,测定移植瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平。结果 移植10天后,缺氧组肿瘤体积显著大于常氧组。移植25天后缺氧组肿瘤体积、重量、微血管密度以及瘤组织中VEGF、bFGF水平均显著高于常氧组,而无氧组显著低于常氧组。结论 适度缺氧可以刺激肺癌细胞VEGF、bFGF等生长因子的表达,促进移植瘤血管形成,提高肿瘤的生长能力;而严重缺氧损伤癌细胞,影响生长因子合成表达,阻碍血管形成,抑制肿瘤的生长。

人表皮细胞培养方法的研究

将手术中所取的薄皮，制成单细胞悬液，培养出表皮细胞膜片。这为解决严重烧伤病人皮源缺乏问题提供了一条途径，多次传代培养的表皮细胞抗原性下降或消失，又可作异体移植。

肺癌患者血清血管内皮生长因子的检测及其临床意义

目的 探讨肺癌患者血清血管内皮生长因子 (serumvascularendothelialgrowthfactor,sVEGF)水平与不同组织学类型和临床分期的关系 ,观察其化疗前后的变化 ,评价其临床意义。方法 用酶联免疫法 (ELISA)检测 1 89例初诊肺癌病人的sVEGF水平 ;分别给含顺铂的联合化疗方案 4个周期后 ,检测 86例非小细胞肺癌 (non smallcelllungcancer,NSCLC)、2 2例小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)的sVEGF。结果 NSCLCⅠ、Ⅱ期患者sVEGF水平显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者 (P <0 .0 1 ) ,鳞癌sVEGF水平与腺癌及SCLC相比有显著统计学差异 (P <0 .0 5 ) ;所有缓解病例化疗后sVEGF水平均显著下降 (P <0 .0 5 ) ,其中以达到完全缓解组最明显。

TGF-β_1对人牙髓细胞内钙影响的激光共聚焦显微镜动态观察

目的 :探讨 TGF- β1 信号转导过程与人牙髓细胞内钙〔( Ca2 +) i〕的关系。方法 :体外培养人牙髓细胞经钙荧光指示剂 Fluo- 3负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定 TGF- β1 影响前后的人牙髓细胞内钙随时间变化情况。结果 :TGF- β1 ( 0 .1ng/ L)使人牙髓细胞内钙先升高后降低 ,最后维持在比加药前稍高的静息钙水平上。结论 :通过 TGF-β可引起牙髓细胞内 Ca2 +水平的显著变化 ,证明 Ca2 +参与了人牙髓细胞 TGF-β1

核因子κB与子宫内膜异位症

子宫内膜异位症是育龄妇女的常见病患,以慢性盆腔疼痛、痛经、不孕为主要症状,发病率逐年上升,但其发病机制至今尚未完全阐明,炎症反应、免疫异常是其发病的病理基础;粘附、侵袭、血管形成是其发生、发展的基本环节。核因子κB作为信号传导途径的枢纽,其活化参与调节多种靶基因的表达,广泛参与机体炎症、免疫、凋亡及细胞生长分化过程,与子宫内膜异位症的发生、发展密切相关。

丝裂原活化蛋白激酶在染料木黄酮抑制血管内皮细胞中的作用

目的探讨染料木黄酮(genistein,Gen)抑制血管内皮细胞的分子机制。方法人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)经血管内皮生长因子(VEGF)预处理后,给予1、10、100μmol/Gen,利用酶链免疫吸附测定(ELISA)法检测基质金属蛋白酶-2/-9(matrix metalloproteinase-2/-9,MMP-2/9)及其抑制剂基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-)2/9的表达,蛋白免疫印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达,胶原蛋白酶分析试剂盒检测溶胶原和明胶分解活性。结果 VEGF能促进HUVECs MMP-2/9的分泌和活性,上调氨基端激酶(JNK)和p38表达。Gen能降低MMP-2/9的分泌和活性,下调JNK和p38表达。结论 Gen可通过抑制MAPK活性,减少MMPs的生成,从而阻断VEGF诱导的内皮细胞活化。

肺癌中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶融合基因及表皮生长因子受体基因突变分析

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况,从而指导有效的个体化靶向治疗。方法采用扩增阻滞突变系统(ARMS)-聚合酶链反应(PCR),检测200例NSCLC患者EML4-ALK融合基因和EGFR基因表达情况。结果 200例NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因扩增阳性为16例(8%),EGFR基因突变为64例(32%),18外显子(G719X)突变1例,19外显子突变32例,20外显子突变4例,21外显子突变25例,19外显子和20外显子联合突变1例20外显子和21外显子联合突变1例。本组EML4-ALK融合基因阳性患者中均无EGFR基因突变发生。结论NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因和EGFR基因突变检测对有效的个体化靶向治疗至关重要。

miR-202通过靶向EGFR抑制A549细胞的增殖和侵袭

目的探索miR-202对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法实验分为5组,包括miR-NC组,shNC组,miR-202组,shEGFR组和miR-202+EGFR组。五组细胞分别转染miR-NC,sh-NC,miR-202 mimics,shEGFR和miR202+pcDNA3.1-EGFR。采用双荧光酶报告基因法验证miR-202对EGFR的靶向性。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法用于检测A549细胞中mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测细胞周期。细胞克隆形成和Transwell法用于检测细胞的增殖和侵袭能力。结果双荧光素酶报告基因实验证实miR-202与EGFR的3’-UTR片段结合。miR-202组的miR-202的表达显著高于miR-NC组(P<0.05)。转染miR-202 mimics或shEGFR可以显著下调EGFR的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),而转染pcDNA3.1-EGFR可以上调因转染miR-202 mimics而下调的EGFR mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。过表达miR-202或者敲低EGFR可以使A549的细胞周期停滞在G0/G1期(P<0.05),同时抑制A549细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。通过转染pcDNA3.1-EGFR可以逆转过表达miR-202对A549细胞增殖和侵袭的抑制(P<0.05)。过表达miR-202通过靶向EGFR显著下调p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT和p-ERK1/2/ERK1/2等蛋白表达的比值(P<0.05)。结论miR-202靶向EGFR抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路,影响A549细胞的增殖和侵袭,可能成为非小细胞肺癌临床治疗的新靶点。

口腔肿瘤中血管内皮细胞生长因子表达的研究

目的 研究口腔肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况,探讨其与肿瘤性质及恶性进展的关系。方法 采用免疫组化SABC法检测86例口腔肿瘤组织中VEG蛋白的表达情况。结果 本组VEGF的总表达率为33%(28/86),鳞癌中VEGF的表达率显著高于乳头状瘤和腮腺混合瘤(P<0.001)。VEGF表达与肿瘤分化程度呈负相关(列联系数r=-0.40,P<0.05);与淋巴结转移呈正相关(列联系数r=0.39,P<0.05)。结论 口腔恶性肿瘤较良性肿瘤组织中VEGF的表达率显著增高,VEGF表达可能有助于口腔良恶性肿瘤的鉴别。鳞癌组织中VEGF表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有关,VEGF表达的增加促进了口腔鳞癌的恶性进展。

PTTG和bFGF在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中垂体肿瘤转化基因（PTTG）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达和意义。方法采用免疫组化SABC法检测PTTG和bFGF在61例非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中的表达。结果61例非小细胞肺癌组织中PTTG和bFGF的阳性表达率分别为68．85％（42／61）和73．77％（45／61），显著高于正常肺组织中的表达（分别为10％和15％，P〈0．05），PTTG和bFGF的表达与肿瘤细胞的分化程度和有无淋巴结转移、TNM分期显著相关，与患者年龄、性别和肿瘤组织类型无相关性；PTTG和bFGF的表达呈正相关（P〈0．05）。结论非小细胞肺癌存在PTTG和bFGF蛋白高表达，提示PTTG可能通过激活bFGF表达促进微血管的形成，在肺癌发生发展中起重要作用．PTTG基因有望成为肺癌新的肿瘤分子标记和基因治疗的靶点．

通脉睛明汤联合康柏西普玻璃体腔注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿的疗效及对房水VEGF、bFGF、SDF-1的影响

目的:观察通脉睛明汤联合康柏西普玻璃体腔注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿的疗效,及对患者房水血管内皮生长因子(VEGF)、碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、人基质细胞衍生因子-1(SDF-1)水平的影响。方法:125例视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿患者随机分为研究组75例和对照组50例。对照组给予康柏西普眼用注射液0.05 ml玻璃体腔内注射,每月1次,连续用药3个月;研究组在对照组基础上加用通脉睛明汤治疗,每日1剂,bid,共治疗3周。比较两组患者治疗前后房水VEGF、bFGF、SDF-1水平和血清IL-6、IL-8水平,以及眼部最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心凹厚度(CMT)变化情况,观察两组疗效与并发症发生情况。结果:研究组总有效率为98.67%,高于对照组的88.00%(P<0.05)。治疗后,两组患者的房水VEGF、SDF-1水平和血清IL-6、IL-8水平及眼部BCVA、CMT水平均较治疗前显著下降(P<0.05),且研究组上述指标均明显低于对照组(P<0.05)。研究组并发症发生率为4.00%,显著低于对照组的16.00%(P<0.05)。结论:通脉睛明汤联合康柏西普玻璃体腔注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿疗效较好,可降低患者房水VEGF、SDF-1水平和血清IL-6、IL-8水平,且安全性较高,值得临床推广。

绿茶提取物EGCG对实验性口腔鳞癌移植瘤淋巴管形成的影响

目的探讨绿茶提取物EGCG对口腔鳞癌淋巴管形成的影响。方法选取24只5周龄的BALB/c裸鼠,利用人舌癌细胞株Tca8113制备实验性口腔鳞癌移植瘤。随机分成3组,分别喂食含有0(1组)、0.01%(2组)、0.1%(3组)EGCG的自来水。采用免疫组化法检测移植瘤中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达及微淋巴管密度。结果 EGCG能明显抑制移植瘤中VEGF-C的表达,显著减少微淋巴管的密度,并存在浓度依赖性。结论 EGCG能减少实验性口腔鳞癌移植瘤中淋巴管的形成,有望为今后临床应用提供实验研究基础。

EGFR及ADAM9在胰腺癌干细胞与分化细胞中的表达及意义

目的 通过微球体培养富集胰腺癌干细胞,检测其表皮生长因子受体（EGFR）和去整合素-金属蛋白酶9（ADAM9）的表达,并探讨其意义.方法 运用无血清条件培养基悬浮培养胰腺癌PANC1细胞,并连续传代培养.将部分微球体接种于含血清及胶原底物的培养基中进行分化诱导.收集微球体细胞及分化细胞,流式细胞仪检测侧群（SP）细胞比例;实时PCR及蛋白质印迹法检测细胞EGFR、ADAM9 mRNA和蛋白的表达.结果 成功培养出胰腺癌PANC1细胞微球体,并能在体外连续传代.微球体细胞分化诱导后能重新贴壁生长.微球体细胞和分化细胞中SP细胞比例分别为（5.40±0.38）%和（2.80±0.42）%,两者差异具有统计学意义（P＜0.05）.微球体细胞与分化细胞相比,EGFR及ADAM9 mRNA表达分别上调约2.5和3.0倍（P＜0.05）;微球体细胞EGFR及ADAM9蛋白相对表达量分别为0.90±0.09和0.64±0.07,显著高于分化细胞的0.62±0.11和0.48±0.09（P＜0.05）.结论 微球体培养能富集胰腺癌干细胞,ADAM9可能通过EGFR信号通路在胰腺癌的发生、发展中起重要作用.