人脐带血间充质干细胞在缺氧缺血性脑病新生鼠脑内的定植

目的探讨脐带血间充质干细胞（MSCs）培养及其在缺氧缺血性脑病（HIE）新生鼠脑内的定植。方法用出生7 d的新生SD大鼠制作HIE模型,同时在当天分别用2种方法（定向注射和尾静脉注射方式）接受经Hoechst 33258标记24 h的MSCs移植,15~30 d观察MSCs存活情况。结果用改良Rice法可制备7日龄新生鼠单侧脑损伤为主的HIE模型;经定向注射和尾静脉注射移植的MSCs能在HIE脑内定植,分布在患侧大脑皮层、海马等部位,并主要以额叶为多,和宿主脑组织融合在一起。结论在体外培养条件下,人脐血MSCs可以生长,当MSCs移植到HIE模型鼠后,细胞能和脑实质融合在一起,并更多地向脑损伤部位迁移聚集。

骨髓基质细胞不同时间点移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠行为的影响

目的观察骨髓基质细胞（BMSCs）在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后不同时间点移植对其远期行为学的影响,探讨最佳移植时间窗。方法7日龄新生SD大鼠结扎左颈总动脉制作HIBD模型,模型成功后随机分为HIBD组、24 h移植组、72 h移植组及7 d移植组,另10只正常新生鼠为正常对照组。移植组大鼠分别在HIBD后24 h、72 h及7 d,在大鼠脑立体定位仪下,将体外培养3~5代的SD大鼠BMSCs脑内移植于左侧海马,分别在日龄32 d、40 d、42 d时进行T迷宫强迫改变、放射形迷宫觅水及感觉运动功能测试。行为学测试完后处死大鼠,取脑组织片行尼氏染色,计数左侧海马CA1区单位面积神经元数。结果HIBD组大鼠各项测试结果均明显差于正常组,差异有显著性（P〈0.05）,24 h、72 h及7 d移植组T迷宫强迫改变正确率及放射形迷宫觅水实验结果较H IBD组有明显改善,差异有显著性（P〈0.05）,其中24 h移植组放射形迷宫觅水实验结果较72 h及7 d移植组有明显改善（P〈0.05）。24 h移植组感觉运动功能测试中足错误和肢体放置测试结果较HIBD组有改善（P〈0.05）。尼氏染色结果显示HIBD组大鼠左侧海马CA1区单位面积神经元数（57.60±13.60）明显低于对照组（111.76±21.07）,差异有显著性（P〈0.01）;24 h、72 h及7 d移植组大鼠左侧海马CA1区单位面积神经元数[分别为（98.16±17.06）,（83.68±16.30）,（81.64±14.34）]均较HIBD组高,其差异有显著意义（P〈0.01）,其中24 h移植组大鼠左侧海马CA1区单位面积神经元数较72 h及7 d移植组高,差异有显著性（P〈0.01）。结论新生大鼠HIBD后24 h、72 h及7 d移植均能改善远期行为学结果,以HIBD后24 h移植疗效最好。

常氧与低氧环境下白细胞介素-1β体外诱导鼠胚中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化

目的：探讨白细胞介素-1＆beta;（IL-1＆beta;）在低氧环境下体外诱导中脑源性神经干细胞的分化。方法：分离孕12d胎鼠中脑组织，制成单细胞悬液，先在无血清培养条件下做原代和传代培养；对原代和传代培养分化细胞分别行免疫细胞化学显色鉴定。鉴定后，传代培养的中脑源性神经干细胞按组接种于含10% FBS的DMEM/F12培养基和含10%FBS的DMEM/F12＋IL-1＆beta;培养基；分别置于常氧（21% O2）和低氧（3% O2）环境下诱导分化，诱导9～11 d后行小鼠抗大鼠TH免疫细胞化学显色，并行流式细胞术检测酪氨酸羟化酶（TH）及烯醇化酶（NSE）阳性细胞率。结果：各实验组中，常氧组（对照组）、常氧＋IL-1＆beta;组、低氧组、低氧＋IL-1＆beta;组TH阳性神经元分别为3.63＆plusmn;0.76、 11.76＆plusmn;0.54、 15.83＆plusmn;1.15、 23.87＆plusmn;1.83；NSE阳性神经元分别为19.82＆plusmn;0.65、 29.33＆plusmn;0.84、 41.62＆plusmn;1.51和60.35＆plusmn;1.56。各组与对照组比较，差异均有统计学意义。结论：孕12d胚鼠腹侧中脑组织可以在体外培养传代、并能诱导分化成多巴胺能神经元；在低氧环境或低氧＋IL-1＆beta;诱导下，分化率均高于常氧组，其表型更成熟。说明在低氧或低氧＋IL-1＆beta;诱导下，可明显促进中脑源性干细胞分化为形态及功能成熟的多巴胺能神经元。

钾通道开放剂预处理对兔离体基底动脉缺氧-复氧损伤的保护作用

目的:观察ATP敏感性钾通道开放剂吡那地尔(pinacidil)和钙激活钾通道开放剂NS1619对基底动脉缺氧复氧(H/R)损伤的保护能力。方法:采用离体血管环灌流的方法,比较对照组、缺氧复氧组、吡那地尔预处理组和NS1619预处理组4组血管环对缩血管物质U46619(前列腺素A_2模拟物)及内皮依赖性扩血管物质乙酰胆碱(ACh)以及非内皮依赖性扩血管物质硝普钠(SNP)的反应。结果:①H/R组与对照组比较,兔基底动脉对U46619的反应明显增强,对SNP的反应未见差异,而对ACh的反应明显减弱;②经吡那地尔和NS1619分别预处理后,可以预防离休兔基底动脉在缺氧复氧后对ACh舒张作用的减弱和对U46619收缩反应的增强。结论:吡那地尔和NS1619分别预处理后可以保护基底动脉内皮细胞免受后继H/R的损伤。

动物细胞低氧培养相关调控因子研究进展

近年来低氧细胞培养逐渐成为研究热点,低氧条件下可提高细胞体外扩增的生长动力学、细胞的增殖率及干细胞分化等功能。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是应答低氧应激的关键因子,也是介导低氧信号的转导中枢,与其相关的血管内皮生长因(vascular endothelia growthfactor,VEGF)、低氧促有丝分裂因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)等是其重要的靶基因,它们之间的相互作用对低氧条件下细胞的发生、发展有重要作用。笔者对低氧培养细胞的研究现状及低氧相关细胞因子的调控机制及作用进行概述,以期为探索细胞低氧机理提供理论依据,为低氧适应性及高原疾病治疗提供更多的研究思路。

VEGF、HIF-1α、COX-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor^(-1)α,HIF^(-1)α)及环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与临床病理的关系。方法采用免疫组织化学方法检测89例NSCLC组织和17例正常肺组织(对照组)VEGF、HIF^(-1)α及COX-2的表达情况,并分析其临床病理意义。结果 VEGF、HIF^(-1)α、COX-2在NSCLC中的阳性表达率分别为71.9%、47.2%、57.3%,分别显著高于对照组阳性表达率29.4%(P=0.001)、17.6%(P=0.024)、23.5%(P=0.011)。有淋巴结转移的患者较无淋巴结转移的患者VEGF、HIF^(-1)α和COX-2的表达阳性率高(P<0.05);在TNM分期中,Ⅲ+Ⅳ期的患者较Ⅰ+Ⅱ期患者VEGF、HIF^(-1)α表达阳性率高(P<0.05)。结论VEGF、HIF^(-1)α及COX-2在NSCLC组织中的表达显著增高,提示三者在NSCLC的发生中发挥重要作用。

人脐带间充质干细胞联用神经节苷酯GM1治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)移植及联用神经节苷酯GM1治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的效果。方法 RICE法制备七日龄新生大鼠HIBD模型,随机分为hUCMSCs移植组(n=15)、hUCMSCs+GM1组(n=15),72h后经颈静脉移植等量的hUCMSCs,hUCMSCs+GM1组再腹腔注射GM1,两组均在移植后第31、32、33、34、35天用Morris水迷宫对两组大鼠行为学测试,比较两组大鼠脑功能恢复情况。免疫荧光染色观察DiI标记的hUCMSCs移植后在两组大鼠脑中的分布情况;神经元前体细胞标记DCX特异性染色观察hUCMSCs移植后分化成神经元前体细胞的情况。结果 Morris水迷宫测试:hUCMSCs+GM1组逃避潜伏期明显短于hUCMSCs移植组,差异具有统计学意义(P<0.05)。移植后hUCMSCs能迁徙到脑组织中,并分布于缺血区的小血管旁,能分化成神经元前体细胞。hUCMSCs+GM1组大鼠脑片干细胞分布明显多于hUCMSCs移植组(P<0.05)。结论 hUCMSCs移植对HIBD新生大鼠脑功能有修复作用,联用GM1,有协同作用。

马齿苋总黄酮对缺血缺氧刺激下血管平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观测马齿苋总黄酮(PTF)对缺血缺氧刺激下血管平滑肌细胞钙超载及蛋白激酶C(PKC)的影响。方法用Fura-2/AM作Ca2+指示剂,检测PTF对正常培养及缺血缺氧作用下家兔主动脉血管平滑肌细胞Ca2+浓度及PKC的活性的改变。结果 PTF对正常培养家兔主动脉血管平滑肌细胞[Ca2+]i浓度无明显影响;PTF(8,16,32,64 mg·L-1)剂量依赖性抑制缺血缺氧缺氧致血管平滑肌细胞[Ca2+]i升高;PTF对正常培养家兔主动脉血管平滑肌细胞胞浆、胞膜PKC活性均升高;PTF处理后胞浆PKC活性下降,胞膜PKC活性上升。结论PTF可能抑制缺氧致血管平滑肌细胞钙超载,调节缺氧条件下血管平滑肌细胞PKC活性。

β-细辛醚对PC12细胞、血管平滑肌细胞、人静脉内皮细胞缺氧损伤的影响

目的:探讨缺氧对脑神经细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的损伤顺序及β-细辛醚干预后对上述损伤的影响。方法:观察β-细辛醚对PC12细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞缺氧损伤形态变化,配合以MTT法和流式细胞分析法对各种细胞缺氧损伤后的存活和凋亡时间及状况进行分析。结果:在缺氧0.5 h时神经细胞凋亡率达到40%,在缺氧1.5 h时血管内皮细胞和血管平滑肌细胞凋亡率达到40%。β-细辛醚0.015 mg/ml组,0.03 mg/ml和0.06 mg/ml组对PC12细胞、血管平滑肌细胞均有保护作用,且呈剂量依赖性;β-细辛醚0.015 mg/ml组对血管内皮细胞无保护作用;0.06 mg/ml和0.03 mg/ml组均有保护作用。结论:一定剂量的β-细辛醚具有保护脑神经细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞免受缺氧损伤,提高细胞存活率的作用。

三七总皂甙对缺氧缺血性脑损伤新生鼠内源性神经干细胞增殖分化的影响

目的:观察三七总皂甙对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生鼠内源性神经干细胞增殖分化的影响,探讨其促进神经发生的作用。方法 :将72只7日龄新生SD乳鼠随机分为假手术组、HIBD组及HIBD的三七总皂甙治疗组,用改良的Rice-Vannucci法制作HIBD模型。注射三七总皂甙干预治疗,用5一溴脱氧尿苷(BrdU)标记处于增殖状态的神经干细胞,免疫单标及双标免疫荧光技术观察三七总皂甙对HIBD海马区BrdU免疫活性及BrdU/NSE(Neuron specific enolase,NSE)、BrdU/GFAP(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)双标免疫活性的影响,并计数分析。结果:HIBD的海马区存在BrdU阳性细胞分布;应用三七总皂甙的HIBD海马区BrdU阳性细胞数及双标阳性细胞明显增多(P<0.01)。结论:三七总皂甙能诱导HIBD新生鼠内源性神经干细胞增殖、分化,提示其具有促进神经发生的能力。

抑制缺氧诱导因子1α对人宫颈癌细胞生长和侵袭的影响研究

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对宫颈癌细胞的生物学行为的影响。方法选用Hela细胞、空载体EGFP-C1转染Hela、EGFP-HIF-1α反义Hela细胞,在37℃,5%CO2,1%O2培养环境中培养细胞对照;通过Western blotting检测各组细胞内HIF-1α蛋白表达,用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率、软琼脂克隆形成方法观察各组细胞的增殖、Transwell侵袭小室方法观察各组细胞的侵袭能力的改变。结果蛋白免疫印迹结果显示,在低氧环境中Hela细胞和仅转染EGFP-C1质粒的Hela细胞中有HIF-1α蛋白的表达条带,而EGFP-HIF-1α反义Hela细胞无表达。并且在低氧环境中EGFP-HIF-1α反义Hela细胞与Hela细胞和仅转染EGFP-C1质粒的Hela细胞相比,其细胞的凋亡率增加、细胞的侵袭能力及细胞集落的形成被抑制,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 HIF-1α能够对宫颈癌Hela细胞的恶性生物学行为产生影响,包括抗凋亡、促增殖、侵袭转移等,且在体外抑制HIF-1α的表达对宫颈癌细胞的凋亡有抑制作用。

低氧环境下胃肠道微环境与帕金森病相关性的研究进展

近年来较多帕金森病患者在得到诊断之前均饱受胃肠道疾病的困扰，临床及神经病理学均表明肠道菌群失调与帕金森病存在密切的相关性。随着高原地区对胃肠道微环境研究的不断深入，发现低氧、低气压、低温、强辐射等低氧环境因素与健康人群的肠道菌群失调有密切的关系，其中低氧是主要的影响因素，低氧环境可能与胃肠道微环境改变有相关性。本文主要对近年来低氧环境下胃肠道微环境与帕金森病的相关性研究进展进行简要综述。