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姜黄素提高白血病KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性及其分子机制探讨 被引量:5
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作者 陈伟 刘玉莹 +1 位作者 杜苑苑 王玲 《新医学》 2011年第10期655-660,共6页
目的:研究姜黄素作用前后白血病KG1a细胞对同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤的敏感性变化,并初步探讨其分子机制。方法:以对同种异体NK细胞杀伤高度敏感的白血病K562细胞为对照,乳酸脱氢酶释放法检测KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性... 目的:研究姜黄素作用前后白血病KG1a细胞对同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤的敏感性变化,并初步探讨其分子机制。方法:以对同种异体NK细胞杀伤高度敏感的白血病K562细胞为对照,乳酸脱氢酶释放法检测KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达,逆转录PCR法检测细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因mRNA的表达水平。CCK-8法检测姜黄素对KG1a细胞半数抑制量(IC50),以此含量作用KG1a细胞,再次乳酸脱氢酶释放法检测姜黄素作用后的KG1a对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测姜黄素作用后的KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达水平。结果:与K562细胞比较,KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤呈低度敏感,KG1a细胞表面NKG2D各配体蛋白表达阳性率均明显低于K562细胞(P<0.01),HLA-Ⅰ蛋白表达阳性率则明显高于K562细胞(P<0.01);在mRNA水平两种白血病细胞表面均有NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因表达。当效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,姜黄素作用后NK细胞对KG1a细胞杀伤率明显高于作用前(P<0.01);作用后KG1a细胞各NKG2D配体表达率均明显升高(P<0.05或0.01),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素能提高KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与姜黄素提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 白血病kg1a细胞 白血病K562细胞 自然杀伤细胞 NKG2D配体 细胞毒性实验
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免疫磁珠分选白血病KG1a细胞中CD34^+CD38^-干细胞及其特性研究 被引量:2
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作者 王国征 李慧 +3 位作者 吴远彬 李达 贺艳杰 周雪云 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第3期181-184,共4页
目的从白血病KG1a细胞中分选CD34+CD38-干细胞并研究其生物学特性。方法免疫磁珠法分选CD34+CD38-细胞,流式细胞术分析细胞表面膜抗原、细胞周期,甲基纤维素培养体系观察其克隆性;以HL60、K562、CD34+CD38+细胞为对照,甲基偶氮唑蓝法检... 目的从白血病KG1a细胞中分选CD34+CD38-干细胞并研究其生物学特性。方法免疫磁珠法分选CD34+CD38-细胞,流式细胞术分析细胞表面膜抗原、细胞周期,甲基纤维素培养体系观察其克隆性;以HL60、K562、CD34+CD38+细胞为对照,甲基偶氮唑蓝法检测柔红霉素对CD34+CD38-细胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接种,观察体内成瘤能力。结果分选的CD34+CD38-细胞纯度达95%以上,(69.03±3.25)%处于G0期,克隆形成率为(38.64±2.68)%,明显抵抗柔红霉素;不同浓度柔红霉素作用后,CD34+CD38-、CD34+CD38+、HL60、K562细胞的活性差异有统计学意义(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率显著高于CD34+CD38+细胞(P<0.05)。结论免疫磁珠法分选白血病干细胞简单易行,分选的细胞符合白血病干细胞生物学特性。 展开更多
关键词 细胞株kg1a 白血病干细胞 免疫磁珠细胞分选 CD34+CD38-细胞
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甲基转移酶抑制剂对KG1a细胞系的增殖抑制作用 被引量:3
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作者 陈华 武淑兰 +3 位作者 朱强 石永进 徐国宾 王建中 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期289-293,共5页
为探讨甲基转移酶抑制剂通过干扰DNA甲基化发挥抗白血病作用的可能性,采用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和细胞分化剂CDAⅡ体外处理因高甲基化致p15基因表达失活的髓系白血病细胞系KG1a,经细胞形态学,甲基化特异... 为探讨甲基转移酶抑制剂通过干扰DNA甲基化发挥抗白血病作用的可能性,采用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和细胞分化剂CDAⅡ体外处理因高甲基化致p15基因表达失活的髓系白血病细胞系KG1a,经细胞形态学,甲基化特异性PCR(MSP)技术,^3H标记同位素微量分析法,限制性内切酶,流式细胞术及间接免疫荧光等技术对加药前后培养细胞的生物学特征进行观察分析。结果发现,两种药物对KG1a细胞均有时间和(或)浓度依赖性的增殖抑制作用,5-Aza-CdR和CDAⅡ对细胞分别表现了诱导凋亡和诱导分化的可能以及G2和G0/G1期阻滞,与此同时DNA甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度下降,p15蛋白表达部分恢复,结论:通过抑制甲基转移酶活性,干扰DNA甲基化以发挥抗白血病作用的途径是可能的,值得进一步探讨。 展开更多
关键词 甲基转移酶抑制剂 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 细胞分化剂Ⅱ kg1a白血病细胞系 细胞增殖抑制 DNA甲基化 白血病
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血小板第四因子对CD34^+白血病细胞系KG1a粘附功能的影响
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作者 张晶 马月霞 韩忠朝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期160-164,共5页
目的研究血小板第四因子(PF4)对CD34+白血病细胞系KG1a细胞与人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞之间粘附性及对多种粘附分子表达的影响。方法采用粘附实验、粘附阻断实验、MTT染色、半定量RT-PCR、免疫标记流式细胞仪测定等方法。结果穴1雪... 目的研究血小板第四因子(PF4)对CD34+白血病细胞系KG1a细胞与人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞之间粘附性及对多种粘附分子表达的影响。方法采用粘附实验、粘附阻断实验、MTT染色、半定量RT-PCR、免疫标记流式细胞仪测定等方法。结果穴1雪PF4可以增加KG1a细胞与ECV-304细胞之间的粘附作用。PF4与KG1a及ECV-304细胞同时孵育或与KG1a或ECV-304细胞单独孵育,均使KG1a细胞粘附能力增加。穴2雪抗粘附分子CD49d、CD106、CD54单克隆抗体可显著减少PF4对KG1a粘附的增加作用,而抗粘附分子CD62L、CD62E、CD62P单抗则对PF4的这种增加粘附的作用没有影响。穴3雪在PF4作用的3h内,半定量RT-PCR检测粘附分子CD49d、CD106、CD54mRNA表达水平有不同程度的上调。(4)PF4作用2h后,流式细胞仪分析显示KG1a细胞上的CD49d、ECV-304细胞上的CD54蛋白表达水平显著增加。结论PF4通过上调粘附分子的表达促进KG1a细胞的粘附功能。 展开更多
关键词 血小板第四因子 kg1a细胞系 ECV-304细胞系 粘附 CD34^+白血病细胞系 影响
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人白血病细胞系KG1a中P2X_7受体的表达和功能研究
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作者 张秀军 孟丽君 《唐山师范学院学报》 2005年第5期33-36,53,共5页
用半定量RT-PCR和流式细胞术,研究了白血病细胞系KG1a中P2X7受体在基因和蛋白水平的表达。用荧光分光光度计,测定了用激动剂三磷酸腺苷(ATP)和苯甲酰苯甲酸ATP(BzATP)刺激前后细胞内钙离子浓度的变化,证明P2X7受体的功能。结果表明:KG1... 用半定量RT-PCR和流式细胞术,研究了白血病细胞系KG1a中P2X7受体在基因和蛋白水平的表达。用荧光分光光度计,测定了用激动剂三磷酸腺苷(ATP)和苯甲酰苯甲酸ATP(BzATP)刺激前后细胞内钙离子浓度的变化,证明P2X7受体的功能。结果表明:KG1a细胞表达P2X7受体,且在激动剂的刺激下能引起KG1a细胞通过P2X_7受体的胞外钙内流;去除胞外钙离子时,激动剂不能引起胞内钙浓度的升高;提示KG1a细胞表达P2X7受体的基因和功能蛋白,激活该受体引起胞外钙离子的内流。 展开更多
关键词 P2X7 kg1a细胞系 离子通道
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荧光素酶标记的KG1a细胞构建急性髓系白血病小鼠模型及其鉴定
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作者 张维娅 曾高淳 +7 位作者 陈晓梅 耿素霞 王玉连 罗琼 罗柳萍 赖沛龙 翁建宇 杜欣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1429-1435,共7页
目的:利用荧光素酶标记的KG1a急性髓系细胞株构建能够在活体水平观察肿瘤负荷的急性髓系白血病小鼠模型。方法:经慢病毒及嘌呤霉素筛选构建能稳定表达荧光素酶的KG1a细胞(KG1a-Luc细胞);将18只8-12周龄的雄性NOD-SCID-IL2rg^(-/-)小鼠... 目的:利用荧光素酶标记的KG1a急性髓系细胞株构建能够在活体水平观察肿瘤负荷的急性髓系白血病小鼠模型。方法:经慢病毒及嘌呤霉素筛选构建能稳定表达荧光素酶的KG1a细胞(KG1a-Luc细胞);将18只8-12周龄的雄性NOD-SCID-IL2rg^(-/-)小鼠随机均分为2组,模型组小鼠每只尾静脉注射200μl含有5×10^(6)KG1a-Luc细胞的PBS,对照组小鼠每只尾静脉注射200μl PBS;通过生物发光成像技术于活体水平监测小鼠肿瘤负荷;尾静脉采血后,经流式细胞术检测小鼠外周血中肿瘤细胞占比;颈椎脱臼法处死小鼠后,取小鼠骨髓及脾脏制备涂片,取肝脏制备石蜡切片,染色后镜下观察肿瘤浸润情况;记录并比较2组小鼠生存时间。结果:经过慢病毒转染、嘌呤霉素筛选后能够得到稳定表达荧光素酶的KG1a细胞;d 17使用生物发光成像技术显示模型组小鼠出现明显荧光;各模型组小鼠的外周血中均能检出KG1a-Luc肿瘤细胞群,平均比率为(16.27±6.66)%;形态学及病理学检查显示,骨髓、脾脏及肝脏均有KG1a-Luc细胞浸润;与对照组相比,模型组小鼠的生存时间显著缩短,其中位生存时间为30.5 d(95%CI:0.008-0.260)。结论:NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠经尾静脉注射5×10^(6)KG1a-Luc细胞后能够成功稳定建立在活体水平观察肿瘤负荷急性髓系白血病小鼠模型。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 kg1a细胞 荧光素酶 动物模型 活体荧光成像
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NKG2D配体在NK细胞杀伤三氧化二砷诱导的KG1a细胞中的作用
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作者 王艳婕 曹威 +2 位作者 周彦生 杨瑞 牛新清(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期268-272,共5页
目的:探讨低浓度的三氧化二砷(ATO)作用急性髓系白血病KG1a细胞株后,对KG1a细胞增殖的影响及与NK细胞联合杀伤肿瘤细胞可能的作用机制。方法:XTT法检测不同浓度ATO对KG1a细胞24 h、48 h的细胞生长抑制作用;LDH检测试剂盒检测定NK细胞对K... 目的:探讨低浓度的三氧化二砷(ATO)作用急性髓系白血病KG1a细胞株后,对KG1a细胞增殖的影响及与NK细胞联合杀伤肿瘤细胞可能的作用机制。方法:XTT法检测不同浓度ATO对KG1a细胞24 h、48 h的细胞生长抑制作用;LDH检测试剂盒检测定NK细胞对KG1a细胞的杀伤作用;甲基纤维素集落形成实验检测不同实验处理组的集落数;流式细胞术检测低浓度的ATO作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体的表达水平。结果:一定浓度范围内ATO对KG1a细胞的增殖抑制作用呈时间浓度依赖性;对比单用ATO处理KG1a细胞组,联合NK细胞后集落形成数明显降低(P<0.05)。对比NKG2D单克隆抗体预处理后的NK细胞联合ATO处理组,NK细胞联用ATO处理组的细胞杀伤率更高、集落形成数明显降低(P<0.05);ATO作用后能够上调KG1a细胞表面NKG2D配体ULBP1的表达(P<0.05)。结论:低浓度的ATO联合NK细胞能抑制KG1a细胞的增殖,其机制可能与低浓度的ATO诱导KG1a细胞表面NKG2D配体ULBP1的表达从而增加NK细胞对KG1a细胞的杀伤作用有关。 展开更多
关键词 三氧化二砷 NK细胞 kg1a细胞株 NKG2D配体
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蝎毒多肽对白血病细胞株KG1a干细胞活性的影响 被引量:10
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作者 杨向东 李红玉 +5 位作者 李德冠 史哲新 杨文华 颜田赅 闫理想 王兴丽 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1278-1281,共4页
目的:探讨蝎毒多肽对白血病细胞株KG1a干细胞活性的影响。方法:免疫磁珠法分离出CD34+CD38-的KG1a细胞,按照不同给药方式分空白组、PESV组、DNR组、PESV+DNR组,培养后经WST-8、流式细胞仪分别检测KG1a干细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和细... 目的:探讨蝎毒多肽对白血病细胞株KG1a干细胞活性的影响。方法:免疫磁珠法分离出CD34+CD38-的KG1a细胞,按照不同给药方式分空白组、PESV组、DNR组、PESV+DNR组,培养后经WST-8、流式细胞仪分别检测KG1a干细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和细胞周期,并经RT-PCR检测PTEN基因、Tie-2基因mRNA表达。结果:KG1a干细胞在PESV组、DNR组细胞增殖抑制率(%)与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。诱导细胞凋亡作用强弱:PESV+DNR组>DNR组>PESV组。细胞周期检测结果显示,G0/G1期PESV+DNR组与PESV组、DNR组相比差异有统计学意义(P<0.01)。在G2/M期PESV+DNR组与PESV组、DNR组相比差异有统计学意义(P<0.05)。PESV组、DNR组、PESV+DNR组KG1a干细胞的PTEN基因、tie-2基因表达均上调,PESV+DNR组为高表达。结论:PESV能够抑制KG1a干细胞增殖,但不能增强DNR的抑制作用;PESV对DNR损伤KG1a干细胞有诱导凋亡和分化的作用,其机制可能与上调KG1a干细胞的PTEN基因、tie-2基因表达有关。 展开更多
关键词 白血病干细胞 蝎毒多肽 kg1a细胞 增殖 凋亡 周期 tie-2基因
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Curcumin sensitizes quiescent leukemic cells to antimitotic drug 5-fluorouracil by inducing proliferative responses in them
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作者 Anagha Gardane Mariyah Poonawala Anuradha Vaidya 《Journal of Cancer Metastasis and Treatment》 CAS 2016年第1期245-252,共8页
Long-term quiescence or dormancy is a fundamental feature of cancer stem cells(CSCs)that are genetically identical to the malignant clone but constitute the only cells with tumor propagation potential within the overa... Long-term quiescence or dormancy is a fundamental feature of cancer stem cells(CSCs)that are genetically identical to the malignant clone but constitute the only cells with tumor propagation potential within the overall tumor population.These quiescent cells show significant resistance to radiation and antiproliferative chemotherapy due to distinctive properties that seem to be related to their stem cell-like character.Hence,successful anticancer therapy must consist of approaches that can target not only the differentiated cancer cells,but also the CSCs.Using serum-starved KG1a cell line as an experimental model system of quiescent leukemic cells(QLCs),the present study demonstrates that QLCs exposed to low concentrations of curcumin show high proliferative potential.Furthermore,when subjected to a combination therapy consisting of low concentrations of curcumin and 5-fluorouracil(5-FU),the QLCs displayed a high kill with an increase in the levels of nitric oxide(NO)and reactive oxygen species.These results were further consolidated with the observation of high caspase-3 activity in cells subjected to the combination therapy.This may suggest that low concentrations of curcumin stimulate the QLCs to become mitotically active,thereby sensitizing them to killing by the antimitotic drug,5-FU. 展开更多
关键词 Acute myeloid leukemia kg1a cell line CURCUMIN 5-FLUOROURACIL quiescent leukemic cells
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