大鼠体内3种形态西洋参中6种人参皂苷吸收研究

目的比较3种形态西洋参6种人参皂苷在大鼠体内的吸收情况。方法以西洋参传统饮片、粗粉、破壁饮片中的6种人参皂苷(人参皂苷Re、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rb_(3)、Rd)为考察指标。采用高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)法,测定大鼠血清中6种人参皂苷的血药浓度,采用DAS 2.0软件进行拟合,得到药物代谢动力学参数。比较3种形态西洋参6种人参皂苷在大鼠体内的吸收差异。结果与传统饮片和粗粉比较,西洋参破壁饮片6种人参皂苷的峰浓度及药-时曲线下面积更优(P<0.05),且半衰期更长、达峰时间更短、生物利用度更高,综合排序为破壁饮片>粗粉>传统饮片。结论与传统饮片及粗粉比较,等剂量下西洋参破壁饮片中6种人参皂苷在大鼠体内消除速率更慢,相对生物利用度更高。

西洋参-红花有效成分治疗早期糖尿病肾病的网络药理学和实验验证

目的:通过网络药理学、分子对接技术及细胞实验探讨西洋参-红花有效成分治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得西洋参-红花活性成分的干扰靶点,再与GeneCards、TTD等数据库中早期DN基因靶点相映射即为交集靶点。采用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,运用Cytoscape 3.8.2软件筛选出核心靶点;通过DAVID数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,运用Cytoscape 3.8.2软件进行“有效成分-关键靶点-通路-疾病”网络图展示;通过Autodock Tools软件进行分子对接,采用MTT法检测有效成分对脂多糖(LPS)诱导的人肾小球系膜细胞(HMC)活性,利用酶联免疫吸附试验检测有效成分对炎症介质的影响。结果:得到西洋参-红花治疗早期DN的活性成分有24个,对应的药物靶点207个,其中72个和早期DN相关。网络拓扑参数分析得出了肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β等15个关键靶点,KEGG通路分析筛选出晚期糖基化终末产物(AGE)-AGE受体(RAGE)、TNF、低氧诱导因子-1(HIF-1)、IL-17、核因子κB等20个信号通路;分子对接表明IL-6与槲皮素、木犀草素、黄芩素、人参皂苷rh2稳定结合。细胞实验得出西洋参-红花活性成分槲皮素、木犀草素、黄芩素能显著抑制IL-6、TNF-α和IL-1β表达。结论:本研究初步证实西洋参-红花有效成分能有效抑制早期DN炎症,对肾脏具有保护作用,为后期深入研究提供了依据。

人参皂苷Rh_(2)在卵巢颗粒细胞炎性反应中的作用及作用机制网络药理学与分子生物学研究

目的探讨西洋参中人参皂苷Rh(2简称Rh_(2))在脂多糖(LPS)致人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN细胞炎性反应中的作用及作用机制。方法通过网络药理学方法筛选西洋参治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的潜在活性成分及靶点。以200 ng/mL LPS作用KGN细胞6 h诱导炎性反应,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定KGN细胞中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,采用2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)染色法测定活性氧(ROS)的水平;40µmol/L Rh_(2)作用KGN细胞24 h后,采用免疫印迹(Western blot)法测定哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在LPS诱导的KGN细胞中的表达水平。结果网络药理学分析结果显示,共筛选出西洋参的主要化学成分11个、潜在靶点144个、治疗PCOS的靶点13个,其中Rh_(2)与下游靶基因mTOR是西洋参抗PCOS的关键活性成分及潜在作用靶点。分子生物学研究结果显示,Rh_(2)能抑制LPS导致的KGN细胞中ROS和mTOR表达水平的升高,下调IL-1β和TNF-α的表达;低表达(50 nmol/L)mTOR能促进Rh_(2)缓解LPS导致的KGN细胞炎性反应,过表达(3µg)mTOR能逆转此现象。结论Rh_(2)通过调控mTOR的表达水平参与LPS导致的卵巢颗粒细胞炎性反应。

光谱成像技术无损鉴别西洋参饮片的研究

应用电可控液晶光谱成像装置,测定不同市售来源的西洋参饮片,以期为其质量控制提供新的方法。系统光谱分辨率5nm,光谱覆盖范围为405～680nm,空间分辨率50lp·mm-1。从成像光谱立方体中提取特征光谱曲线,构建饮片指纹图谱;采用主成分等聚类分析方法解析其指纹图谱,用于饮片真伪鉴别与质量判定。结果与性状,显微及理化鉴定结果相吻合。表明光谱成像分析技术可用于中药指纹图谱的构建和质量评价,操作方法简便、快速、无损。

双标线性校正法应用于西洋参破壁饮片的指纹图谱研究

目的:建立西洋参破壁粉碎前后高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,并采用双标线性校正法进行定性。方法:采用高效液相色谱-电雾式检测器法(HPLC-CAD),以西洋参破壁饮片与传统饮片为研究对象,使用相似度分析进行质量评价。另以人参皂苷Re和人参皂苷Rb2为双标化合物,使用DRSOrigin软件进行双标线性校正,预测特征峰的保留时间,并比较其与相对保留时间法的差别,以辅助色谱峰定性分析。结果:所选10批西洋参破壁饮片与传统饮片指纹图谱相似度均在0.939以上,共确定17个共有峰,并建立了以人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rb_(3)、Rd及拟人参皂苷F_(11)为特征峰的对照特征图谱。双标线性校正法预测保留时间的精度优于相对保留时间法。结论:所建立的方法简便、准确,可为该品种的质量评价与控制提供有力的技术支持。同时,可为其他破壁饮片质量标准研究提供参考。

冻干与生晒西洋参饮片差异皂苷含量及促斑马鱼血管生成活性比较

目的:分析和测定冻干与生晒西洋参饮片中的差异成分,并比较二者促血管生成活性的差异。方法:基于超高效液相色谱法(UPLC)建立冻干和生晒西洋参饮片的指纹图谱,结合主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLSDA)等化学计量学方法确定2种饮片的差异皂苷成分,采用UPLC测定其中6种代表性成分在冻干与生晒西洋参饮片中的含量;选取受精24 h的转基因斑马鱼品系Tg(fli1a∶EGFP)胚胎,分别使用不同剂量的冻干与生晒西洋参70%甲醇提取物(10、30 mg·L^(-1))干预正常斑马鱼和血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ(PTK787)诱导的节间血管(ISV)损伤斑马鱼模型,观察斑马鱼肠下静脉(SIV)和ISV发育情况,测定SIV直径、平均交叉数和平均发芽数,计算ISV血管指数,比较2种饮片的促血管生成活性。结果:冻干与生晒西洋参饮片指纹图谱相似度均>0.950,分别确定了17个共有峰,指认了其中6个共有峰分别为峰6(人参皂苷Rg_(1))、峰7(人参皂苷Re)、峰8(人参皂苷Rb_(1))、峰11(人参皂苷Rc)、峰13(人参皂苷Rb_(2))、峰16(人参皂苷Rd);PCA及OPLS-DA筛选出11种差异性皂苷成分,表明2种饮片的成分含量存在一定差异;含量测定结果显示,冻干西洋参饮片中人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rb_(2)含量高于生晒西洋参饮片,而人参皂苷Rc、Rd含量低于生晒西洋参饮片(P<0.05,P<0.01)。在对正常斑马鱼胚胎促血管生成作用研究中,与空白组比较,冻干及生晒西洋参高剂量组SIV血管直径、平均发芽率及平均交叉率均显著升高(P<0.01),且冻干西洋参组血管直径、平均交叉数及平均发芽数均高于生晒西洋参组(P<0.05)。对ISV损伤的斑马鱼胚胎促血管生成作用研究显示,与空白组比较,模型组斑马鱼ISV发育受到抑制;与模型组比较,冻干及生晒西洋参各剂量组均可促进ISV的生长与萌发,相同剂量下,冻干西洋参组的正常血管数目明显高于生晒西洋参组(P<0.05)。结论:冻干处理西洋参饮片可有效避免其中人参皂苷类成分的流失与二次转化,其促斑马鱼血管生成活性优于生晒西洋参饮片,可为优质西洋参饮片的生产与开发提供参考。

西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷的体外溶出度比较

比较西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷在水中和模拟胃液中溶出度,研究粉体粒径对西洋参溶出度的影响。采用高效液相色谱法测定西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片中5种人参皂苷成分在不同时间点的溶出量,绘制溶出曲线,比较不同形态西洋参皂苷成分的溶出特征。结果表明,在以水为溶出介质的实验中,西洋参破壁饮片中人参皂苷较粗粉、传统饮片具有更快的溶出速度,5 min时溶出度就达到了总质量分数的90%,溶出量比饮片高出14%,比粗粉高出8%;在以模拟胃液为溶出介质的实验中,西洋参破壁饮片中人参皂苷比提取物中人参皂苷溶出速度上稍慢,但最大溶出量比传统饮片提取物高出5%,比粗粉高出14%。该文首次通过体外溶出度研究证明,西洋参破壁饮片化后能够改善其有效成分的溶出效率。