菜籽蛋白水解物体外和细胞内抗氧化性评价及氨基酸分析研究

以"双低"油菜籽秦优7号为原料,碱溶酸沉法获得菜籽分离蛋白后进一步用Alcalase2.4L酶解得到菜籽蛋白水解物(rapeseed protein hydrolysates,RPHs);采用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱(Sephacryl S-100HR)对RPHs进行分离纯化,得到3个组分;采用抗氧化能力指数(oxygen radical absortion capacity,ORAC)方法以及细胞抗氧化活性(cellular antioxidant capacity,CAA)的方法分析筛选得到抗氧化性最好的组分3。结果表明组分3的ORAC值为(1610.38±112.51)μmol TE/g;CAA值为(124.66±2.18)μmol QE/g,EC50值为(57.84±3.38)μg/mL;在此基础之上,对组分3进行氨基酸分析以及电泳分析,表明其抗氧化性与分子质量分布及氨基酸组成可能存在一定关系。

菜籽多肽体外和细胞内抗氧化性评价及氨基酸分析

本研究以Alcalase 2.4L酶解"双低"油菜籽宁杂19号得到的菜籽蛋白酶解物(rapeseed protein hydrolysate,RPH)为原料。通过超滤和凝胶色谱分离其活性肽组分,对酶解液及各分离组分进行抗氧化活性研究,并对抗氧化能力最高的组分进行氨基酸分析。结果表明:通过超滤将RPH分离成4组不同分子质量范围的多肽组分,其中RPH-P4(分子质量<3 k D)具有最高的抗氧化活性;RPH-P4经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到3个洗脱峰,收集并测定其活性,研究发现RPH-P4-S3抗氧化能力远高于其他2个组分(P<0.05),氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)、细胞抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)、细胞内CAA实验的EC50值分别为(1 951.90±20.35)μmol TE/g、(143.38±4.11)μmol QE/g、(45.63±3.67)μg/m L;对RPH-P4-S3进行了氨基酸分析,发现其抗氧化性氨基酸含量达到72.90%,必需氨基酸含量为53.52%。研究认为,菜籽蛋白Alcalase 2.4L酶解物分离组分RPH-P4-S3具有较高的抗氧化活性及营养价值,可以作为功能性成分用于抗氧化相关的功能食品和保健品的开发。

基于体外模拟消化的黑脉羊肚菌多酚细胞抗氧化及抗增殖活性

以黑脉羊肚菌多酚提取物为研究对象,通过体外模拟消化实验,研究消化过程中消化液多酚含量及氧自由基吸收能力的变化;研究体外模拟胃、肠消化对人肝癌细胞(HepG2细胞)和人结肠癌细胞(Caco-2细胞)的毒性及抗增殖活性的影响;并以HepG2细胞为模型对细胞抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)进行评价。结果表明:体外模拟消化后,黑脉羊肚菌多酚释放及氧自由基吸收能力均有提高,模拟胃、肠消化过程中多酚释放分别在1 h和0.5 h达到最高并保持稳定。细胞实验表明,在不产生细胞毒性的范围内,胃0h、胃液1 h、肠液0.5 h对HepG2的抑制率分别为41%、45%、91%;对Caco-2细胞的抑制率分别为73%、96%、90%。CAA结果显示,胃消化处理的样品表现出促氧化的作用,肠消化处理的样品表现出抗氧化的作用,肠液0.5 h的CAA值为(70.506±0.011)μmol QE/100 g(以干质量计)。由此可见,体外模拟消化处理黑脉羊肚菌具有一定的抗氧化及抗增殖活性,为羊肚菌功能活性的开发提供了理论依据。

外源硅对锈菌诱导下豇豆叶片不同细胞器中抗氧化特征的影响

以长豇豆高抗锈病材料‘ZN016’和高感品种‘之豇282’为材料,通过基质栽培,研究锈菌胁迫下外源硅对长豇豆叶片细胞质、线粒体和叶绿体抗氧化酶活性与抗氧化物质含量的影响。结果表明:锈菌胁迫下,外源硅可显著提高豇豆细胞质、线粒体和叶绿体中过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性以及线粒体内的超氧化物歧化酶(SOD)活性;同时显著提高细胞质内的多酚含量和感病品种线粒体中抗坏血酸(AsA)的含量;外源硅可显著降低感病品种细胞质和叶绿体中的丙二醛(MDA)含量。推测锈菌胁迫下外源硅可能通过提高豇豆叶片细胞质和叶绿体的抗氧化能力,从而避免活性氧对细胞质膜和叶绿体膜系统的伤害,维持其正常的生理功能。

H2O2致体外培养动脉内皮细胞损伤及山莨菪碱保护

目的：实验以过氧化氢（H2O2）损伤体外培养动脉内皮细胞（AEC），对过氧化氢介导内皮细胞损伤、凋亡的机制进行探讨，观察山莨菪碱（Ani）是否抑制H2O2介导的AEC损伤、凋亡，并探讨Ani保护损伤、凋亡的机制。方法：体外培养AEC随机分组：对照组（正常培养AEC）；H2O2损伤组（0．5mmol／L H2O2损伤12h）；Ani组（不同浓度Ani：0．05，0．1，0．2mg/mL处理45min后加0．5mmol／L H2O2损伤12h）。结果：1．低浓度H2O2（0．5mmol／L）可以损伤AEC并诱导凋亡。H2O2损伤组台盼蓝着染率及LDH释放率均高于对照组（P〈0．01）；细胞总抗氧化能力（T—AOC）下降（比对照组P〈0．01）；琼脂糖凝胶电泳发现凋亡细胞的梯状电泳条带；细胞荧光染色见凋亡形态特征。2．Ani对H2O2诱导的内皮细胞损伤具保护作用。Ani组与H2O2损伤组比较，台盼蓝着染率及LDH释放率下降；T—AOC上升；在Ani0．2mg／mL组DNA琼脂糖凝胶电泳未见凋亡细胞特征性的梯状电泳条带；荧光染色未见凋亡细胞特征。结论：1．低浓度过氧化氢使AEC总抗氧化能力明显下降，耗竭细胞抗氧化能力，可致AEC的损伤、凋亡。2．山莨菪碱能减少AEC抗氧化能力的消耗，维持抗氧化能力平衡，保护0．5mmol／L H2O2介导的AEC损伤、凋亡。

广枣黄酮清除自由基能力及抗氧化性能的细胞模型法评价

利用制备色谱将广枣黄酮分离成F1和F2两个组分。分别测定广枣黄酮、F1和F2的总抗氧化能力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基(·OH)以及超氧阴离子自由基(O2-·)的能力,并与常见的抗氧化剂VC进行对比。结果表明:广枣黄酮具有良好的抗氧化效果,总黄酮的抗氧化能力介于F1和F2之间;F1对DPPH自由基的清除能力以及F1和F2对·OH的清除能力均高于VC,而在总抗氧化能力以及清除O2-·方面F1和F2的效果均弱于VC。另外,细胞模型法评价结果显示,广枣黄酮可清除小鼠巨噬细胞RAW264.7内的活性氧,表现出明显的抗氧化活性。

婴幼儿配方奶粉对人结肠腺癌系Caco-2细胞和SD大鼠腹腔巨噬细胞自由基水平的影响

为探究婴幼儿配方奶粉对消化道上皮细胞及黏膜免疫系统自由基水平调节能力的影响,随机选取5种市售一段婴幼儿配方奶粉,以SD大鼠腹腔巨噬细胞和人结肠腺癌系Caco-2细胞为检测模型,测定配方奶粉对细胞增值率影响的质量浓度范围,并采用经部分修改的细胞内抗氧化活性测定方法(CAA)评价配方奶粉的胞内抗氧化能力。在无外源性自由基诱导剂作用下,检测配方奶粉对2种细胞胞质及线粒体内活性氧自由基水平的影响。研究结果显示:在质量浓度40~1000μg/mL范围,配方奶粉对细胞增殖均无影响。在2种细胞的CAA模型中,受测的5种配方奶粉均表现出胞内抗氧化活性,然而CAA值存在明显差异。在无外源自由基诱导剂AAPH作用时,3种配方奶粉对胞浆及线粒体内活性氧自由基表现出清除作用,另外2种配方奶粉则上调了自由基水平。

不同品种荔枝果肉细胞抗氧化及抗增殖活性评价

为明确荔枝果肉的生物抗氧化和抗肿瘤保健功能,采用HepG2人肝癌细胞模型对我国南方地区主要种植的10种代表性荔枝品种果肉的细胞抗氧化活性(CAA值)和抗肿瘤细胞增殖活性进行了评价。结果表明,10种荔枝品种中,妃子笑荔枝果肉具有最大的CAA值,淮枝则最小;妃子笑抗HepG2肿瘤细胞增殖活性最强,糯米糍则最弱。荔枝果肉的CAA值与总多酚含量、总黄酮含量、多酚化学抗氧化能力指数(ORAC值)之间都有极显著的正相关性(p<0.01),且与黄酮含量之间正相关性最大,说明荔枝果肉中起生物抗氧化作用的主要成分是黄酮类化合物;但荔枝果肉对HepG2肿瘤细胞的抗增殖活性与总多酚含量、总黄酮含量、ORAC和CAA值之间均呈现较弱的负相关性(p>0.05),提示某些特殊酚类单体或其协同作用在抗肿瘤细胞增殖过程中发挥主要作用。

绿茶与红茶浸提液功能性成分含量和抗氧化能力的差异研究

作为全球公认的三大无酒精饮料之一,茶及其制品具有丰富的营养价值和独特的保健功效。本实验以自制的绿茶和红茶为原料,采用1,1-二苯基-2-三硝基法(DPPH)、氧自由基吸收能力法(ORAC)和细胞抗氧化法(CAA)对两种茶浸提液的抗氧化能力进行测定和比较,并研究了两种茶浸提液中各类功能性成分含量的差异。实验结果表明:两种自制茶浸提液均具有较高的抗氧化活性,但是其抗氧化能力随茶浸提液发酵程度的加深而降低(DPPH法IC50值:绿茶14.58μg DM/mL<红茶24.14μg DM/mL;ORAC值:绿茶5313.92±318.75μmol TE/g DM>红茶3684.14±233.59μmol TE/g DM;CAA值:绿茶26.23±0.43μmol QE/100 mg DM>红茶16.41±0.17μmol QE/100 mg DM);随着发酵程度的加深,茶浸提液干物质总量降低,尤以茶多酚含量降低最为显著;茶多酚是影响茶浸提液抗氧化能力的主要功能性成分。