类球红菌自诱导物合成酶基因cerI的克隆及其原核表达

根据类球红菌(Rhodobacter sphaeroides2.4.1)自诱导物合成酶基因cerI的序列,设计并合成了1对特异性引物,在引物的5′和3′分别加入含有HindIII和XhoI限制性酶切位点的序列,以类球红细菌Rhodobactersphaeroides基因组为模板扩增了cerI基因序列。将PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α。鉴定成功获得目的片段,经HindIII和XhoI双酶切后与载体pET-28a(+)连接,构建原核表达质粒pET-28a(+)-cerI,并将其转化宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导其表达。SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-28a(+)-cerI可成功地在大肠杆菌中表达cerI蛋白。