液相色谱-质谱结合网络药理学及实验验证新疆樱桃李花色苷改善动脉粥样硬化的作用机制

目的:研究新疆樱桃李花色苷(XJP-ACY)抗动脉粥样硬化(AS)作用的活性成分及作用机制。方法:通过液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定的新疆樱桃李花色苷主要成分,从XJP-ACY主要成分和AS角度,应用网络药理学方法,筛选其潜在活性成分潜在靶点,构建“成分-疾病-靶点”网络,并预测XJP-ACY抗AS作用信号通路。观察XJP-ACY对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导EA.hy926内皮细胞损伤模型作用,分析内皮细胞活力、测定抗氧化酶活力,细胞凋亡以及内皮细胞黏附等的影响。蛋白质印迹检测相关蛋白表达,初步验证网络药理学的预测结果。结果:从新疆樱桃李花色苷中鉴定成分4个,预测得到其潜在抗AS作用靶点21个;聚类分析得到2个基因簇和2个核心基因,核心基因为FGF2、ADRA2C。基因本体(GO)分析结果表明筛选得到的靶点主要涉及炎症反应、MAPK的正调控等生物过程。京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析得到28条信号通路,涉及PI3K-AKT信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、C型凝集素受体信号通路等相关通路。细胞实验表明,ox-LDL诱导EA.hy926建立内皮细胞损伤模型:100μmol/L ox-LDL作用24 h,为适合本研究的最优条件。XJP-ACY可提高ox-LDL诱导的EA.hy926细胞存活率,增加一氧化氮(NO)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量和内皮素-1(ET-1)表达水平,降低细胞活性氧(ROS)水平,抑制细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,减少炎症介质分泌;XJP-ACY可抑制ox-LDL诱导的EA.hy926细胞凋亡,其机制与其提高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达相关。结论:本研究初步阐释XJP-ACY治疗AS多成分、多靶点、多途径的作用特点在于参与抑制炎症反应、促进细胞凋亡。

新疆野生樱桃李(Prunus cerasifera)茎段与叶片培养及其植株再生

以新疆野生樱桃李为材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂种类、浓度及配比、蔗糖浓度等多种因素对茎段腋芽萌发与生长、增殖以及叶片不定芽再生的影响,建立了其叶片再生体系。结果表明,1)植物生长调节剂组合IAA0.4mg/L+6-BA0.8mg/L较适合于樱桃李茎段腋芽的萌发与生长培养;2)正交试验筛选出不定芽的最佳增殖培养基为3/4MS+IAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L;3)ZT诱导不定芽再生的效果好于6-BA,ZT1.5mg/L+IBA0.05mg/L为诱导不定芽再生的最适植物生长调节剂组合;4)暗培养为叶片不定芽再生的必要条件,在最适不定芽再生的培养基上,暗培养14d的不定芽再生效果最好;5)樱桃李不定梢的最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.4mg/L。

NaCl胁迫对紫叶李(Prunus cerasifera var. atropurea)叶片生理生化特性的影响

为研究紫叶李的抗NaCl特性,以盆栽4年生紫叶李为试材,设置土壤的NaCl含量为CK(0.042%),0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,研究NaCl胁迫对紫叶李的膜质过氧化程度、抗氧化酶活性、渗透调节物质含量的影响。结果表明:随着土壤中NaCl含量的增高,细胞膜透性增大,丙二醛(MDA)含量增加,氧自由基的产生速率加快;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性变化趋势一致,均为先上升后下降;脯氨酸含量呈增加趋势,可溶性糖含量先增加后减少,可溶性蛋白含量呈下降趋势,说明脯氨酸和可溶性糖可能是盐胁迫下紫叶李的主要渗透调节物质。结合各项生理指标和盐害表现可以得出,紫叶李抗NaCl胁迫的阈值为0.3%土壤含盐量。

基于AMPK信号通路探究樱桃李多酚提取物对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的作用

目的:探讨樱桃李多酚提取物(PCE)对胰岛素抵抗HepG2(IR-HepG2)细胞糖代谢的影响。方法:利用高糖高胰岛素诱导建立IR-HepG2细胞模型;设立对照组、胰岛素抵抗(IR)模型组、不同浓度的樱桃李多酚提取物处理组和二甲双胍组。分别以50、100、200、400 mg/L的PCE处理细胞24 h,检测其对细胞葡萄糖消耗的影响,同时利用MTT比色法评价细胞活力;采用real-time PCR和Western blot检测糖代谢相关因子mRNA及蛋白的表达。结果:樱桃李多酚提取物能够显著提高IR-HepG2细胞葡萄糖消耗,随其浓度的增加细胞活力呈先上升后下降的趋势;在mRNA及蛋白水平,除显著上调IR-HepG2细胞磷酸化AMP活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表达外,糖原合成和糖异生途径中糖原合成激酶3β(GSK3β)、叉头蛋白O1(FoxO1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表达均显著下调(P<0.05)。结论:樱桃李多酚提取物能够激活IR-HepG2细胞AMPK信号通路,进一步抑制糖异生、糖原合成途径,从而改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状态。

野生樱桃李酵素的主要成分及其抗氧化性能分析

为研究野生樱桃李酵素的主要成分及其抗氧化性能,分别以野生樱桃李果肉和果皮为原料,添加不同比例的糖制备酵素,探究6种酵素在发酵前后的总黄酮、总糖、总酚、总酸、可溶性固形物含量及其DPPH自由基清除能力、·OH清除能力和总抗氧化能力,并对相关性进行分析。结果表明,6种果肉和果皮酵素均表现出明显的抗氧化活性,糖添加量为30%的果肉酵素(R30)和果皮酵素(P30)DPPH自由基清除能力、·OH清除能力和总抗氧化能力最强,且R30的3种抗氧化活性均高于P30;与发酵前相比,R30和P30的总黄酮含量分别降低62.57%和48.28%,总糖、总酚、总酸和可溶性固形物含量分别增加569.81%和502.89%、217.01%和172.25%、134.28%和99.17%、182.53%和202.40%,野生樱桃李酵素的·OH清除能力和总抗氧化能力均与总酚和总酸含量呈极显著正相关(P<0.01)。因此添加适量外源糖有利于改善野生樱桃李酵素品质。

3种彩叶植物的光合特性研究

为科学指导植物造景中彩叶植物的配置,运用美国LI-COR公司制造的LI-6400便携式光合作用测定系统,研究了红檵木、金叶女贞、紫叶李3种彩叶植物的光合特性.结果表明:3种植物的光补偿点分别为39.07,249.66,143.94μmol/(m2.s);光饱和点分别约1 400,1 200,1 800μmol/(m2.s);CO2补偿点分别为20.11,76.48,118.24μmol/mol;CO2饱和点分别约800,600,1 000μmol/mol,说明红檵木对光的适应性很强,是一种较耐荫的强光性植物,而金叶女贞和紫叶李则是强光性植物.

紫叶李叶片色素含量及叶绿素荧光动力学参数对SO2胁迫的响应

以盆栽紫叶李的2年生嫁接苗为试材,采用人工静态熏气装置分析了不同浓度SO2(0～22.8mg.m-3)胁迫条件下(16d)紫叶李叶片光合色素含量及荧光动力学参数的变化情况.研究结果显示:在SO2浓度为5.7mg.m-3的胁迫下,叶绿素a(Chla)、叶绿素b(Chlb)、Chla/Chlb、总叶绿素和类胡萝卜素(Car)含量均比对照增加,在其它浓度处理下均减小,且与对照间差异显著(11.4mg.m-3胁迫下叶绿素a和类胡萝卜素除外).在SO2浓度小于11.4mg.m-3时,紫叶李叶片花青苷和类黄酮含量随着胁迫强度的增强而增加(与对照间差异显著,p<0.01);而在SO2浓度大于11.4mg.m-3时则随着胁迫强度的增强而降低(与对照间差异显著,p<0.01).荧光动力学参数中,PSⅡ原初光能转化效率Fv/Fm随着胁迫强度的增强呈现先增加后降低的变化趋势,PSⅡ潜在活性Fv/Fo、光化学淬灭效率qP随着胁迫强度的增强而减小,而荧光非光化学淬灭效率qN却随着胁迫强度的增强而增加.研究结果表明,紫叶李苗木在低浓度SO2(小于11.4mg.m-3)胁迫下通过自身较强的保护系统使机体免受伤害;而在高浓度SO2(大于11.4mg.m-3)胁迫下通过增加qN耗散过剩的光能和提高ΦPSⅡ消耗多余能量来保护光合器官免受损伤,但叶片的光合色素含量和其它荧光参数均受到不同程度的影响,紫叶李叶片受到伤害与PSⅡ反应中心失活有关.

紫叶李叶片色素成分分析

紫叶李Prunus cerasifera是常见的园林绿化观叶树种,其叶片在整个生长季节均为紫红色。以紫叶李叶片为试验材料,利用高效液相色谱仪-二极管阵列检测器、紫外-可见分光光度计、薄层色谱分析法对紫叶李叶片的色素种类及含量进行了定性和定量分析。结果表明:紫叶李叶片内含有类胡萝卜素、叶绿素(叶绿素a为主)、矢车菊素、矮牵牛素、矢车菊素半乳糖苷、天竺葵素及其他单体酚(槲皮素、芦丁、二氢杨梅酮等)。其中,矢车菊素半乳糖苷、矢车菊素和叶绿素的共存互作是其叶片呈现紫红色的主要原因,类胡萝卜素、槲皮素、芦丁等辅助色素也起到了辅助成色的作用。

红叶李水浸液对4种草坪植物的化感作用

研究了园林植物红叶李Prunus ceraifera不同器官及根际土壤水浸液对白三叶Trifolium repens,紫花苜蓿Medicago sativa,剪股颖Agrostis tenuis和黑麦草Lolium perenne等种子萌发和幼苗生长的影响,其中种子萌发实验采用培养皿滤纸法,幼苗生长实验采用温室盆栽法。结果表明:在50 g·L-1浸提液质量浓度下,红叶李根、茎、叶水浸液对白三叶种子萌发具有极显著的抑制作用,强弱顺序为叶>根>茎;红叶李落叶和根际土壤水浸液对白三叶种子萌发也具有较强抑制作用;在测试质量浓度范围内,红叶李叶片水浸液对白三叶和紫花苜蓿种子萌发表现为抑制作用,对剪股颖和黑麦草则表现出"低促高抑"效应;红叶李叶片水浸液对白三叶和紫花苜蓿幼苗的生长主要表现为促进作用,对剪股颖和黑麦草则主要表现为抑制作用;4种植物对红叶李化感作用的平均敏感性强弱顺序为剪股颖>黑麦草>白三叶>紫花苜蓿,其中紫花苜蓿的平均敏感指数为正值,其余均为负值。结果为从化感角度提高红叶李的园林配置水平提供了依据。

遮荫对紫叶李幼苗叶片花色素苷含量和光合能量分配的影响

研究了全光照和不同遮荫条件(25%、50%和75%遮荫)下紫叶李Prunus cerasifera Ehrh fatropurpureaJacq花色素苷和叶片光合能量分配的变化。结果表明:遮荫降低了紫叶李幼苗叶片的花色素苷含量,叶绿素含量升高。遮荫程度越大,紫叶李幼苗叶片初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)和非光化学淬灭系数(qN)增加,PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)、光化学淬灭系数(qP)和电子传递速率(RETR)下降,说明紫叶李幼苗具一定喜光性,适于在全光照条件下生长。叶片实际光化学效率(ФPSⅡ)及RETR光响应曲线表明,ФPSⅡ随着光强升高而下降,遮荫程度越大下降幅度越大,而ETR随光强升高而升高,并且遮荫75%处理光饱合点低于对照处理。同时,叶片光化学反应的量子产额(ФPSⅡ)与遮荫程度呈明显负相关,而依赖于类囊体膜两侧质子梯度和叶黄素循环的量子产额(ФNPQ)和失活PSⅡ反应中心的热耗散量子产额(ФNF)随着遮阴程度的增加而增加,遮荫程度达到75%时,失活PSⅡ反应中心显著增加。遮荫通过改变光合色素和花色素苷含量以及叶片光合能量分配进而提高紫叶李幼苗对长期弱光的适应性。

紫叶李果实总多酚的提取工艺及其抗氧化活性研究

为了更好地开发利用紫叶李果实,以总多酚得率为考察指标,通过单因素和正交试验,探讨乙醇体积分数、料液比、提取温度和时间对紫叶李果实总多酚提取效果的影响;并通过DPPH自由基清除试验研究紫叶李果实总多酚的体外抗氧化活性。结果表明,紫叶李果实中总多酚的最佳提取工艺为乙醇体积分数50%、料液比1∶120、提取温度70℃、提取时间90min。在此工艺条件下,总多酚得率为18.13mg/g;紫叶李果实总多酚具有一定的抗氧化活性,且随其浓度增加,抗氧化活性增强。

紫叶李叶中花青素含量动态变化的研究

采集不同时期、不同部位紫叶李(Prunus cerasifera)叶,以酸性甲醇(含1%盐酸,体积比)浸提,以高效液相色谱法测定提取液中的花青素含量并进行统计分析。结果表明,同一部位叶花青素含量随着温度的变化而发生显著的变化;同一时期花青素含量表现为上部位叶中含量高于下部位叶,温度、光照是影响花青素合成的重要因素。

新疆野生樱桃李及栽培品种果肉中17种元素含量ICP-MS法测定(英文)

比较紫色,红色和黄色三种新疆野生樱桃李及栽培品种果肉中无机元素的含量,样品采用微波消解方法进行前处理,ICP-MS法检测其中K,Ca,Mg,Na,Fe,Mn,Cu,Zn,Be,Li,Se,Sr,Cr,Pb,Cd,As,Hg等17种元素。该检测方法快速简便,精密度高且具有较高的灵敏度,17种元素的加标回收率在93.5%~110.4%。分析结果表明紫色,红色和黄色三种新疆野生樱桃李及栽培品种果肉中的17种元素含量均较为接近,均含有极为丰富的K元素,含量高达1‰左右,Ca,Mg,Na,Fe,Mn均为含量较高的金属元素且含量依次降低,Cu,Zn,Li,Se,Sr,Cr也有一定含量,Pb,Cd,As,Hg等有害元素含量极低或未检出。实验结果为研究新疆野生樱桃李与栽培品种果肉中微量元素含量提供参考数据。

紫叶李果实的化学成分研究

采用硅胶、ODS和Sephadex LH-20柱色谱等方法对紫叶李果实95%乙醇提取物进行提取分离纯化，运用IR、UV、1H NMR、13C NMR、HMBC、HSQC等波谱学技术鉴定5个化合物：3-O-乙酰基原儿茶酸（1）、2（R）-羟基丁二酸-1-甲酯（2）、3,3′,4,4′-四羟基联苯（3）、β-胡萝卜苷（4）和槲皮素（5）。化合物1～4是首次从该植物中分离得到，其中化合物1为新天然产物，并且首次报道化合物1的1H NMR，13C NMR数据。对已分离的5个化合物进行了DPPH自由基清除实验，结果显示化合物3、5具有潜在的抗氧化活性。

红叶李组织培养快繁技术

通过培养红叶李的不同外植体,建立适宜的组织培养条件和快繁技术,为红叶李的组培繁殖提供技术参考。采用MS为基本培养基,添加不同浓度的激素,以茎尖、腋芽、茎段和叶片作为外植体进行培养。结果表明:茎尖和腋芽既能诱导芽的生长又能诱导愈伤组织,且诱导效果较好,而茎段仅能诱导产生愈伤组织,叶片的诱导效果不明显。BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.5-2.0 mg/L组合的诱导效果最佳,单芽在BA 1.0 mg/L+IBA 0.5～2.0 mg/L培养基中继代培养都能诱导产生丛芽,诱导率达70%。

紫叶李果实总黄酮对大鼠酒精性肝损伤的保护作用机制研究

目的:研究紫叶李果实总黄酮(PCE)对酒精性肝损伤(ALD)大鼠的保护作用机制,为将其开发为治疗ALD的新药提供实验依据。方法:将40只大鼠随机分为正常组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、水飞蓟宾组[阳性对照,30 mg/(kg·d)]和PCE高、低剂量组[80、40 mg/(kg·d)],每组8只。每天上午ig给药(10 mL/kg)1次,持续6周;给药同时,除正常组外其余各组大鼠每天下午ig50%乙醇(10 mL/kg)1次诱导ALD模型。给药结束后,测定大鼠心、肝、脾等脏器指数和皮下脂肪、棕色脂肪、腹腔脂肪指数;测定谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)以及总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等血清生化指标水平;测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、TC、TG以及粪便中TC、TG等生化指标水平;观察大鼠肝、肾组织病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝、脾、肾指数和皮下脂肪、腹腔脂肪指数升高(P<0.05或P<0.01),脑指数和棕色脂肪指数降低(P<0.05);血清中HDL水平和HDL/TC比值降低,其余血清指标均升高(P<0.05或P<0.01);肝组织中SOD、GSH-Px水平降低,其余肝组织生化指标均升高(P<0.01);粪便中TC、TG水平升高(P<0.01);肝、肾均发生明显病变。与模型组比较,水飞蓟宾组和PCE高剂量组大鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01);PCE低剂量组大鼠血清中ALT、AST和肝组织中MDA水平显著降低(P<0.01),肝组织中SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.05);各给药组肝、肾病变程度及肝中脂质聚积减轻。结论:PCE可能通过抗氧化、促进肝细胞再生、调节脂质代谢等方面发挥其改善ALD的作用。

紫叶李叶片总RNA提取方法的改进与比较

从紫叶李叶片中提取高质量RNA是研究叶色相关基因表达调控的必要前提。实验室常用的RNA提取方法和RNA提取试剂盒有很多种,每种方法只适合某些组织材料。对彩叶植物来说,组织中的次生代谢物含量很高,叶片中的花色素苷、多糖更是高质量核酸提取过程中难以去除的干扰成分。本文利用CTAB法、SDS法以及Trizol法从富含花青素类物质的彩叶植物紫叶李叶片中提取总RNA。电泳检测显示:CTAB法提取的总RNA其28S、18S条带清晰,紫外光谱分析A260/A280比值为1.93,A260/A230比值为2.04,RNA产量可达141μg·g-1·FW-1;而且通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合反转录PCR的要求,而且能去除色素分子的干扰。SDS法提取的总RNA产量较低,且纯度不高。而Trizol法很难从紫叶李中提出完整的RNA。因此CTAB法是一种从富含花青苷的紫叶李叶片中有效提取高质量总RNA的方法。

紫叶李提取物的抗氧化活性及稳定性研究

用30%乙醇提取紫叶李中的抗氧化物质,用化学发光法测定其抗氧化活性,并研究了光、热、pH等因素对抗氧化物质的影响。结果表明:紫叶李提取物对碱性连苯三酚体系产生的超氧阴离子自由基(O-2·)以及母体系产生的羟基自由基(·OH)有很好的清除作用,且耐热、耐光性好,在酸性介质中可稳定存在。

四种李属彩叶树种枝叶花色苷分布的解剖研究

对紫叶桃(Prunus persicaf.atropurpurea)、美人梅(Prunus mume ‘Meirenmdi')、紫叶矮樱(Prunus×cistena ‘Pissardii')、紫叶李(Prunus cerasifera ‘Pissardii')等四种核果类紫叶树种一年生枝条、叶柄、叶片中花色苷的分布状况进行了切片研究,并对这几种树种的外观形态区别做了比较描述。结果发现四种植物的花色苷在枝干、叶柄中各组织的分布位置从枝条梢部到基部色素含量递减,除紫叶矮樱外,其他树种枝条次生木质部均无花色苷分布,不同树种各部位的色素分布及组成各异。花色苷在叶片中的分布范围与花色苷含量呈正相关。从四种彩叶植物色彩的年变化来看,花色苷在枝叶组织中分布越广泛,彩叶植物叶色季节间变化越小,受环境等变化的影响也越小。

新疆野生樱桃李果皮中花色苷提取工艺优化及成分鉴定

目的优化新疆野生樱桃李果皮中花色苷的提取工艺并鉴定其中主要花色苷成分。方法采用单因素实验和L9(34)正交试验优化花色苷的提取工艺,并用色价法、示差法测定其含量。通过液相色谱-电喷雾-质谱(liquid chromatography electrospray ionization-mass spectrometry, LC-ESI-MS)方法初步鉴定提取物中花色苷的主要成分。结果野生樱桃李果皮花色苷的最优提取条件为:溶剂1%HCl-甲醇,固液比1:5,温度55℃,时间80 min,紫皮野生樱桃李总花色苷含量480.81 mg/100 g。野生樱桃李果皮主要花色苷为矢车菊-3-半乳糖苷、矢车菊-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-芸香糖苷、矢车菊-3-木糖苷。结论本研究为新疆野生樱桃李果皮中花色苷类化合物的提取和成分鉴定提供重要实验数据。