Nitric oxide promotes survival of cerebellar granule neurons cultured in vitro through the Akt pathway

In this study, cerebellar granule neurons were used to examine the role of nitric oxide on cell survival. The N-methyI-D-aspartic acid receptor antagonist, MK-801, and the soluble guanylate cyclase antagonist, 1H-[1, 2, 4]oxadiazolo-[4, 3-a] quinoxalin-1 -one, decreased cell viability, induced caspase-3, and decreased phosphorylated-Akt levels, suggesting that blockade of nitric oxide production promotes apoptosis of differentiating cerebellar granule neurons. After administration of sodium nitroprusside, an endogenous nitric oxide donor, cell viability recovered, caspase-3 expression was decreased, and phosphorylated-Akt levels increased. This study provides direct evidence that nitric oxide can sustain the survival of developing cerebellar granule neurons in vitro through the nitric oxide-Akt pathway. Moreover, endogenous nitric oxide exerts these effects in a cyclic guanosine monophosphate-dependent manner while exogenous nitric oxide does so in a cyclic guanosine monophosphate-independent manner.

疏血通抑制Bim依赖的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】探究疏血通及其主要成分水蛭素对Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响及机制。【方法】体外成熟7 d的CGNs分为存活对照组(用含K+浓度为25 mmol/L的培养基,即25 K组)、凋亡组(用含K+浓度为5 mmol/L的培养基,即5 K组)、以1/50、1/40、1/30、1/20、1/10浓度(稀释50、40、30、20、10倍)疏血通注射液处理组(25 K以及5 K合并疏血通处理组)以及对应不同浓度(2 U/mL、2.5 U/mL、3.34 U/mL、5 U/mL、10 U/mL)水蛭素处理组(25 K以及5 K合并水蛭素处理组),用Hoechst染色法观察并统计凋亡率。在蛋白印迹实验中,在25 K和5 K条件下用1/50、1/10浓度疏血通注射液以及对应2 U/mL、10 U/mL浓度水蛭素处理细胞,用Western blot法检测Cleaved Caspase-3、Bim、VEGF的表达水平。【结果】核染色结果显示,与25 K存活对照组比较,5 K凋亡组凋亡率增加;与25 K存活对照组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率无明显变化;与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率下降,且随着浓度的升高,凋亡率下降越明显。Western blot结果显示,与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通与水蛭素处理细胞后Cleaved Caspase-3、Bim蛋白表达水平均下降,VEGF蛋白表达水平升高。【结论】疏血通及其主要成分水蛭素通过抑制Bim表达,进而抑制线粒体依赖的小脑颗粒神经元凋亡。

新生小鼠小脑颗粒神经元的原代培养与鉴定

目的通过改进已报道的新生小鼠小脑颗粒神经元培养方法,以获得纯度更高,杂质更少,状态更佳的颗粒神经元。方法将小鼠小脑组织剪碎,经木瓜蛋白酶消化后得到单细胞悬液,采用Percoll非连续性密度梯度离心法分离出颗粒神经元前体细胞,种植在基质胶包被过的培养皿中并在培养20 h后给予阿糖胞苷(5μmol/L)处理8h。使用激光共聚焦显微镜及神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP2)对小脑颗粒神经元细胞进行纯度鉴定。结果细胞存活率达98.03%±1.048%;神经元纯度为99.71%±0.2%。结论该方法获取的颗粒神经元存活率和纯度较高,是一种小鼠小脑颗粒神经元体外培养的可靠方法。

溶血磷脂酸损伤小脑颗粒神经元并诱导细胞凋亡

目的 研究溶血磷脂酸 (LPA)对原代培养大鼠小脑颗粒细胞的细胞毒性作用及其损伤机制。方法 将原代培养的大鼠小脑颗粒细胞暴露于不同剂量LPA中 ,测定噻唑蓝 (MTT) ;应用流式细胞仪、透射电镜、激光共聚焦显微镜等技术观察细胞的凋亡率、凋亡细胞的核形态及细胞胞质和线粒体内活性氧自由基 (ROS)的形成。结果 LPA对小脑颗粒细胞的损伤呈剂量依赖效应。经 5 0 μmol/LLPA作用后 ,细胞生存率为正常细胞的 (5 4.8± 11.5 ) % ,细胞凋亡率达 (4 0 .5± 2 .3) % ,细胞染色质发生浓缩和形成凋亡小体 ,细胞胞质和线粒体内ROS形成增加 ,而经四甲基吡嗪 (TMP)预处理 ,细胞生存率升至 (84.7± 8.8) % ,细胞凋亡率减至 (16 .7± 5 .8) % ,细胞核形态无明显改变 ,细胞胞质和线粒体内ROS形成被抑制。结论 LPA具有神经毒性作用。通过增加线粒体内ROS形成 ,继而诱导神经元凋亡可能是其损伤机制之一。

过氧化氢诱发小脑皮质神经元凋亡

采用分离细胞培养的新生SD大鼠小脑皮质神经元，用Ara－c抑制非神经元细胞生长，研究了过氧化氢能否诱导种经元凋亡．用荧光染料Hoechst33258染色鉴别凋亡神经元，可见凋亡神经元的细胞核体积缩小至正常神经元的40％～50％，核形不规则，核内染色质块状深染．少量神经元可见到不规则的核碎片及凋亡小体。结果表明：（1）小剂量过氧化氢（50μmol／L）作用12h，可见1％～3％神经元凋亡，与对照组比较，无明显差异；24、36h凋亡神经元比对照组显著增多；48h凋亡神经元数量达高峰。（2）大剂量过氧化氢（70μmol/L）作用12h，凋亡神经元的出现明显增多，作用24、36h凋亡神经元增加均比小剂量组更显著，出现高峰更早、更高．（3）对照组随培养时间延长凋亡细胞的数量增长速度比较缓慢．以上结果提示过氧化氢能诱发小脑皮质神经元凋亡，尤以大剂量过氧化氢的诱发作用为更强．

IGF-1经PI3K/Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡

目的 观察胰岛素样生长因子 1 (insulin likegrowfactor 1, IGF 1)对苯妥英(100μmol·L-1 )处理的大鼠小脑颗粒神经元 (cerebellargranularneurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法 体外培养 8的小脑颗粒神经元,同时给予 100μmol·L-1苯妥英和μmol·L-1 IGF 1, 48h后行凋亡分析,观察IGF 1对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的保护作用;采用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002(50μmol·L-1 )预先与小脑颗粒神经元孵育 30min,再加 1μmol·L-1 IGF 1和 100μmol·L-1苯妥英共孵育 48h,测定神经元存活率,观察IGF 1与PI3KAkt通路的关系;Westernblot法检测苯妥因处理不同时间小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平及总Akt的表达量,并观察IGF 1对磷酸化Akt水平的影响,进一步探讨IGF 1的作用是否经PI3K/Akt通路。结果 ①1μmol·L-1 IGF 1可明显抑制 100μmol·L-1苯妥英引起的小脑颗粒神经元的凋亡明显提高小脑颗粒神经元的存活率,使其凋亡特征消失。②PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002可取消IGF 1的保护作用。③苯妥英使小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平明显降低,但不影响总Akt表达量。④IGF 1可明显恢复被苯妥英抑制的磷酸化Akt的水平。结论 IGF 1保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡。

咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制

目的 观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法 体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果 ① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论 一定浓度的咖啡因可保护苯?

胶质细胞成熟因子支持原代培养的小脑皮质神经元的生存

胶质细胞成熟因子(GMF)是从成年牛脑中提取的一种酸性蛋白质,它能可逆地促进成星形胶质细胞形态和化学的分化。我们现在建立富含神经元的生后7天大鼠小脑皮质分离细胞原代培养物,间接免疫荧光染色分类计数证明,该原代培养物中神经元占细胞总数的97%,其中绝大部分是颗粒细胞。加纯化的 GMF 在此培养物,可明显促进神经元的生存;而不加 GMF 的对照培养物,神经元的数目明显减少。纯化 GMF 的这种作用与其剂量有关,最适的刺激剂量浓度为250 ng/ml。虽然对 GMF 影响小脑皮质神经元生存的机制尚不清楚,但实验结果提示,GMF 的功能不只限于对胶质细胞,它在中枢神经系统内,也可能是一种对神经元起神经营养作用的生长因子。

硫酸软骨素蛋白多糖抑制神经元轴突生长体外生物模型的建立

目的利用硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)的生物特性建立抑制神经元生长和轴突再生的体外生物模型。方法将不同浓度CSPG与无生物毒性的德克萨斯红荧光染料混合,取5μl滴在培养板的中心部位,形成边界清楚的红色圆形斑点,称CSPG圆斑(CSPG SPOT)。将神经母细胞瘤SY5Y细胞和小鼠小脑颗粒细胞(CGNs)铺在含有CSPG SPOT的培养板中,48h后观察细胞的生长情况。结果含有1μg/ml和3μg/ml CSPG的SPOT分别使CGNs和神经母细胞瘤SY5Y细胞停止生长、死亡,没有发现细胞的轴突延伸到SPOT上生长。高浓度的CSPG可渗透到SPOT周围区域,使CSPG SPOT周围区域的细胞生长和轴突再生受到抑制。结论该模型可以在体外模拟胶质细胞分泌的CSPG对神经细胞生长的抑制作用,对研究中枢神经系统损伤后神经元的生长和轴突的再生具有广泛的应用前景。

茶碱对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

目的 研究茶碱对复极化浓度钾离子 (5mmol·L-1KCl,又称低钾 )诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。方法 体外培养大鼠小脑颗粒神经元 ,定性定量检测细胞凋亡 :①用FDA (fluoresceindiacetate)染色检测细胞存活率 ,用Hoechst 332 5 8染色 ,分析细胞核的形态变化 ;②琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂 ;③免疫荧光法检测细胞内cAMP水平。结果 茶碱使低钾培养的小脑颗粒神经元的存活率增加 ,使低钾引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失 ;低钾使神经元的DNA电泳图谱出现明显的“梯子状” ,而茶碱使此现象消失 ;敏感性内钙释放阻断剂、L 型钙通道阻断剂及NMDA受体阻断剂均不能抑制茶碱对神经元的保护作用 ;茶碱对细胞内cAMP水平没有明显的影响。结论 茶碱对复极化浓度钾离子诱导的小脑颗粒神经元凋亡具保护作用 ,此作用不依赖胞内钙离子浓度 。

缺血再灌注引起神经元凋亡及褪黑素抗凋亡的机制

目的探讨模拟缺血再灌注引起神经元凋亡的途径和褪黑素(melatonin,MT)抗凋亡的作用机制。方法用原代培养的SD乳鼠小脑颗粒细胞建立以缺氧缺糖模拟缺血再灌注模型,并加不同浓度的MT(10-5、10-7、10-9mol/L)孵育。采用荧光比色法检测其线粒体跨膜电位及细胞内的活性氧;用Westernblot及ELISA分别检测线粒体和胞质中的细胞色素C;比色法检测胞质中Caspase3的活性。结果在模拟缺血再灌注小脑颗粒细胞模型中,细胞内的活性氧在缺氧缺糖后明显增加;线粒体跨膜电位降低并随再灌注时间延长而加重;线粒体释放入胞质的细胞色素C增加,胞质的Caspase3活性增加;MT可显著减少活性氧和抑制线粒体释放细胞色素C,抑制线粒体跨膜电位的降低,并呈一定剂量依赖性。结论①缺血再灌注引起的神经元凋亡部分是通过线粒体凋亡途径;②MT可通过抗氧化作用和阻止线粒体凋亡而抑制模拟缺血再灌注诱导的小脑颗粒细胞凋亡。

LINGO-1-Fc蛋白对低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

髓鞘抑制因子Nogo-A、MAG和OMgp通过共同的受体信号复合物NgR/p75NTR(或者TROY)发挥对中枢神经纤维再生的抑制作用.新近克隆的跨膜蛋白LINGO-1是该信号途径的另一个重要组成成分和调节分子.LINGO-1特异表达于中枢神经系统,神经元上的LINGO-1被证明参与调节中枢神经再生的抑制信号,而少突胶质细胞表达的LINGO-1分子参与负调节少突胶质细胞的髓鞘化过程.为探讨LINGO-1分子在神经元凋亡过程中的作用,利用包含LINGO-1分子胞外段LRR和IgC2结构域的Fc融合蛋白作为功能性拮抗剂,研究LINGO-1对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用.利用成熟的Hoechst标记凋亡细胞的方法,观察到经LINGO-1-Fc蛋白预处理2h能够显著阻止小脑颗粒神经元的凋亡.仅包括LRR结构域的GST-LINGO-1与LINGO-1-Fc蛋白,虽同样具有与颗粒神经元的结合活性,但是GST-LINGO-1不能有效地阻止低钾诱导的细胞凋亡.这些结果提示,LINGO-1-Fc蛋白能够阻止低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡,并且这种作用可能是IgC2结构域依赖的.

小脑颗粒神经元细胞模型材料制备

小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑病发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑病细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理,对小脑颗粒神经元进行了体外分离和培养,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色,表明体外培养的小脑颗粒神经元细胞纯度较高,可以用于细胞作用模型的建立。

LY294002对热预处理抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

【目的】观察磷酸肌醇3位羟基激酶(PI3-K)的特异性阻断剂LY294002对热预处理抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元(CGN)凋亡的影响。探讨磷酸肌醇3位羟基激酶/AKT(PI3-K/AKT)信号转导通路是否参与了热预处理的保护作用及其机制。【方法】以低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡为模型。用相差显微镜观察形态学,DNA琼脂糖凝胶电泳和Hoechst33258核染色分析神经元凋亡,二乙酸荧光素(FDA)染色法检测细胞的存活率。蛋白质印迹(Westernblot)法检测蛋白的表达。【结果】热预处理(44℃,1h)可以保护低钾诱导的CGN的凋亡,使神经元存活率由(33.2±4.1)%上升至(76.1±5.6)%(P <0.01),核染色出现的核固缩和凋亡小体减少,DNA凝胶电泳DNA梯状条带明显减弱。LY294002(20μmol/L)可以明显抑制热预处理的保护作用,使神经元的存活率降至(37.4±3.5)%(P<0.01),核染色出现的核固缩和凋亡小体,DNA凝胶电泳出现梯状条带。热预处理可使HSP70、磷酸化AKT增高。LY294002可以抑制磷酸化AKT(p-AKT)的增加,而对HSP70则无明显影响。【结论】在低钾诱导CGN凋亡的模型中,LY294002可以抑制热预处理的抗凋亡作用,并可抑制p鄄AKT的增加,显示PI3鄄K/AKT信号转导通路参与了热预处理的保护作用,但该抑制作用可能不是通过抑制热休克蛋白(HSP)

“低钾”诱导神经元凋亡过程中ARNT2上调表达的分析

目的 :观察“低钾”诱导大鼠神经元凋亡过程中ARNT2的表达变化 ,探讨ARNT2与神经元凋亡的关系。方法 :建立“低钾”诱导神经元凋亡模型 ,应用RT -PCR分析ARNT2在凋亡过程中mRNA的表达变化 ,Westernblotting分析蛋白质的表达变化 ,间接免疫荧光与激光共聚焦确定亚细胞定位。结果 :“低钾”诱导 30min后大鼠小脑颗粒神经元ARNT2mRNA表达水平即明显上调 ,1h后上调表达最明显 ,并持续至“低钾”诱导后 12h左右 ,ARNT2蛋白质水平的表达变化与mRNA水平的表达变化相似 ,免疫荧光结合激光共聚焦分析显示ARNT2蛋白定位于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内。结论 :ARNT2分布于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内 ,在“低钾”诱导的凋亡过程中ARNT2mRNA与蛋白均上调表达。

诱导型HSP70过表达对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

目的观察腺病毒介导的人诱导型HSP70过表达对低钾诱导的原代培养的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranuleneurons,CGN)凋亡的影响。方法原代培养5d的CGN共感染含人诱导型HSP70和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(AdTR5/HSP70-GFP)和四环素调控的启动子(AdCMV/tTA),或共感染含GFP的腺病毒(AdTR5/GFP)和AdCMV/tTA(对照组)。48h后,采用细胞荧光免疫组织化学法、Westernblot法检测HSP70的表达,或者换成无血清含5mmol·L-1KCl的培养基以诱导神经元凋亡。24h后,采用相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测神经元存活率,Hoechst33258核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析神经元凋亡,以观察HSP70过表达对低钾诱导的CGN凋亡的影响。结果共感染了AdCMV/tTA和AdTR5/HSP70-GFP的CGN过表达了HSP70,抑制了低钾诱导的CGN的凋亡:使神经元存活率由45·5%±5·2%提高至82·3%±5·2%(P<0·01),核固缩减少,DNA的片段化减轻。结论腺病毒介导的人诱导型HSP70的过表达抑制了低钾诱导的CGN凋亡。

银杏叶提取物对星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控

目的研究银杏叶提取物(EGh761)对星形胶质细胞合成一氧化氮(NO)的作用以及对共培养的小脑颗粒神经元的作用。方法以脂多糖(LPS)和IFN-γ诱导体外培养的大鼠星形胶质细胞表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS),产生NO作为病理条件下胶质细胞过度活化的实验模型,应用逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对星形胶质细胞中iNOS基因表达的影响,并探讨这一调控作用的分子机制。结果EGb761能明显降低星形胶质细胞中iNOS mRNA和蛋白质的表达、减少NO 的生成、防止活化的胶质细胞损伤共培养神经元,抑制IκB-α的降解和阻止p65/RelA进入细胞核,提示EGb761对iNOS基因表达的抑制作用依赖于NF-κB信号通路。结论EGb761可能对与胶质细胞过度活化有关的神经系统疾病具有治疗、预防的作用。

p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡(英文)

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)抑制剂SB2 0 35 80对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子 (KCl 2 5mmol·L-1)的培养基中转移至低钾培养基 (KCl5mmol·L-1)中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段 ,SAPK/JNK分析盒测定c JunN 末端蛋白激酶 (JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80通过抑制细胞凋亡 ,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元 ,c Jun表达和磷酸化水平升高了 ,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB2 0 35 80 2 5 μmol·L-1的低钾培养基中 ,c Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB2 0 35 80抑制JNK活性 ,降低c

白介素-6保护小脑颗粒神经元抗谷氨酸的神经毒性作用

目的:探讨白介素-6(IL-6)对谷氨酸诱导的神经元损伤的防治作用及其作用机制。方法:用IL-6慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,然后后用谷氨酸急性刺激小脑颗粒神经元。用噻唑兰(MTT)比色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法分别观察神经元的功能和凋亡的变化;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测神经元内Ca2+浓度的动态变化和IL-6信号转导蛋白gp130 mRNA的表达。结果:IL-6(2.5、5和10 ng/ml)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,可浓度依赖性地改善谷氨酸诱导的神经元活性降低;并可明显减少谷氨酸诱导的神经元凋亡;还可显著抑制谷氨酸激发的神经元内Ca2+超载。此外,经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元表达gp130 mRNA明显低于未经IL-6预处理的神经元。结论:IL-6能保护神经元抵抗由谷氨酸诱导的兴奋毒性作用,IL-6的这种神经保护机制可能与它抑制神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能由gp130细胞内信号转导途径介导。

新生大鼠小脑颗粒神经元原代培养与鉴定

目的:建立一种较为理想的小脑颗粒神经元原代培养方法。方法:取新生5～7天SD大鼠,分离小脑皮质,胰酶消化后差速贴壁,种植在预先涂有左旋多聚赖氨酸的培养板内,第3天加入阿糖胞苷纯化神经元;采用神经元特异性烯醇化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经元。结果:细胞存活率达(98±1.07)%;24 h内基本贴壁;第3天细胞突起增多、变长;培养6～8天,细胞突起交织成网,形成典型的神经细胞网络;神经元特异性烯醇化酶鉴定神经元细胞占90%左右。结论:实验获取神经元纯度较高,是小脑颗粒神经元体外培养的一种较理想的方法。