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Expression of estrogen receptor (ER) -α and -βtranscripts in the neonatal and adult rat cerebral cortex, cerebellum, and olfactory bulb 被引量:1
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作者 GuoXZ SuJD 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第4期321-324,共4页
In the present study expression of estrogen receptor subtype -α(ERα) and -β (ERβ) in the cerebral cortex, cerebellum, and olfactory bulb was investigated and compared between neonatal (1~3-days-old) and adult (25... In the present study expression of estrogen receptor subtype -α(ERα) and -β (ERβ) in the cerebral cortex, cerebellum, and olfactory bulb was investigated and compared between neonatal (1~3-days-old) and adult (250~350g) rats, using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT- PCR). No ERα transcripts were detectable in the adult cerebellum and olfactory bulb, whereas very weak expression of ERα was present in the adult cerebral cortex. No significant difference in ERβ transcripts was detectable between the neonatal and adult rats. While transcripts for both ER subtypes were co-expressed in these brain areas of neonatal rats, although ERα expression was significantly weaker than ERβ. Even in the cerebral cortex known to contain both ER subtypes in adult rats, ERα transcripts in neonatal rats were much higher than in adult. These observations provide evidence for the existence of different expression patterns of ERcα/ERβ transcripts in these three brain areas between the neonatal and adult rats, suggesting that each ER subtype may play a distinct role in the regulation of differentiation, development, and functions of the brain by estrogen. 展开更多
关键词 初生 成年 大脑皮层 小脑 雌激素受体 嗅球 RT-PCR
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新生SD大鼠大脑皮质神经元的原代培养及鉴定 被引量:1
2
作者 王京 卢思彤 +3 位作者 吴印林 刘玉东 邹维艳 孙美群 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第15期2344-2349,共6页
背景:培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准。目的:探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。方法:选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,... 背景:培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准。目的:探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。方法:选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,培养后24,48,72 h,用5μmol/L或10μmol/L阿糖胞苷处理48 h;另取全部大脑皮质细胞,培养后48 h用5μmol/L阿糖胞苷处理48 h。培养至第7天,倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响,免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度。结果与结论:①倒置显微镜:10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组,该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构,神经元胞体丰满并充满折光特性;全皮质组细胞密度低于正常对照组,并可明显观察到非神经元;②CCK-8检测:各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组(P<0.001),10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组(P<0.05),5μmol/L阿糖胞苷24 h组神经元活性低于5μmol/L阿糖胞苷48,72 h组(P<0.01);③免疫荧光染色:各阿糖胞苷组神经元纯度大于正常对照组、全部皮质组(P<0.001),各阿糖胞苷组神经元纯度无差异;④Western blot检测神经元特异性烯醇化酶蛋白表达:各阿糖胞苷组神经元成熟度高于正常对照组(P<0.05),其中以5μmol/L阿糖胞苷48 h组成熟度最高;⑤结果表明:取新生24 h内大鼠大脑皮质表面2.0-3.0 mm处皮质,培养后48 h加入5μmol/L阿糖胞苷处理得到的神经元活性、成熟度和纯度较好。 展开更多
关键词 阿糖胞苷 大脑皮质 神经元 原代培养 神经元活性 大鼠
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新生大鼠大脑皮层神经细胞的体外原代培养 被引量:47
3
作者 洪庆涛 唐一鹏 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期259-262,共4页
本文探讨了新生大鼠出生24h内大脑皮层神经细胞原代培养的方法,建立了稳定的神经细胞培养模型。通过光镜和细胞Nissl染色、AChE染色,对培养各阶段的神经细胞进行了观察,系统地描述了它们的生长发育过程和形态特征。本方... 本文探讨了新生大鼠出生24h内大脑皮层神经细胞原代培养的方法,建立了稳定的神经细胞培养模型。通过光镜和细胞Nissl染色、AChE染色,对培养各阶段的神经细胞进行了观察,系统地描述了它们的生长发育过程和形态特征。本方法扩大了大脑皮层神经细胞培养材料的来源。另外,对培养方法的特点进行了讨论。 展开更多
关键词 大脑皮层 原代培养 新生大鼠
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胚鼠大脑皮质神经元的最佳分离和培养方法的探讨 被引量:15
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作者 李胜富 毛萌 +2 位作者 周晖 李幼平 孙明菡 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2001年第3期422-424,431,F002,共5页
用不同类型酶消化法及单纯机械法分离胚鼠大脑皮质 ,并分别采用两种不同的培养基进行神经元的体外培养以建立胚鼠脑皮质神经元的最佳分离和培养方法。结果表明 :采用 0 .0 5 %胰蛋白酶 +0 .0 5 % II型胶原酶消化 ,以神经元完全培养基作... 用不同类型酶消化法及单纯机械法分离胚鼠大脑皮质 ,并分别采用两种不同的培养基进行神经元的体外培养以建立胚鼠脑皮质神经元的最佳分离和培养方法。结果表明 :采用 0 .0 5 %胰蛋白酶 +0 .0 5 % II型胶原酶消化 ,以神经元完全培养基作为培养基质可获得高纯度。 展开更多
关键词 胚鼠 皮质神经元 分离 原代培养
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皮质神经元B27原代培养及MAP2鉴定 被引量:18
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作者 曹珂 刘检 +1 位作者 苗露阳 张予阳 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期40-43,共4页
目的对原代新生鼠皮质神经元原代培养方法进行改进,以获得纯度更高、体外更易存活的神经元进行相关实验研究。方法采用胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮质神经元悬液,进行培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态,利用神经元特异性标志... 目的对原代新生鼠皮质神经元原代培养方法进行改进,以获得纯度更高、体外更易存活的神经元进行相关实验研究。方法采用胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮质神经元悬液,进行培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态,利用神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP2)鉴定培养神经元的纯度。结果神经元细胞存活率高,在体外培养条件下细胞状态良好,生长旺盛。培养第4天,可见多数细胞长出1、2个突起并交织成网。培养第8天细胞胞体较大,能形成典型的神经细胞网络。培养第10天,鉴定神经元纯度质量分数达90%以上。结论该方法简便可行,是体外培养神经元较理想的方法。 展开更多
关键词 大鼠 原代培养 皮质神经元 鉴定
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新生大鼠海马神经元原代无血清培养与鉴定 被引量:17
6
作者 黄立宁 韩建民 +2 位作者 刘雅 刘悦 曹翠丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第1期83-86,共4页
目的建立一种简单、易行的海马神经元无血清体外培养方法以获得高纯度、高活力的海马神经元。方法取新生24 h内SD大鼠,分离海马,经消化后种植于包被有Matrigel基膜的玻片上,24 h后换含有N2、B27的Neuro-basal无血清培养基,于不同时间在... 目的建立一种简单、易行的海马神经元无血清体外培养方法以获得高纯度、高活力的海马神经元。方法取新生24 h内SD大鼠,分离海马,经消化后种植于包被有Matrigel基膜的玻片上,24 h后换含有N2、B27的Neuro-basal无血清培养基,于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态;采用β-tublinⅢ免疫荧光细胞化学技术鉴定海马神经元纯度。结果大部分海马神经元于3~24 h贴壁且可长出细长突起,3 d细胞具有典型神经元的形态特征,5d后神经元突起进一步增多并形成稠密的网络连接,7 d后神经元胞体丰满,趋于成熟。经β-tublinШ免疫荧光技术鉴定纯度为94.2%±3.6%。结论此方法简单有效,可获得高纯度的海马神经元。 展开更多
关键词 海马 神经元 原代培养 新生大鼠
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大鼠脑皮质星形胶质细胞的体外优化培养及鉴定 被引量:6
7
作者 靳辉 冯改丰 +4 位作者 杨蓬勃 贾宁 杨维娜 钱亦华 王唯析 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期849-853,共5页
目的旨在获得高纯度的星形胶质细胞,并对不同培养时期的细胞进行鉴定,为进一步研究奠定基础。方法常规分离新生SD大鼠大脑皮质并制备单细胞悬液,采用差速黏附加摇床震荡法对所获得的细胞进行纯化。倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态,G... 目的旨在获得高纯度的星形胶质细胞,并对不同培养时期的细胞进行鉴定,为进一步研究奠定基础。方法常规分离新生SD大鼠大脑皮质并制备单细胞悬液,采用差速黏附加摇床震荡法对所获得的细胞进行纯化。倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态,GFAP免疫荧光对获得细胞进行鉴定。结果原代培养的皮质细胞从3d开始迅速增殖,9-12d即可铺满瓶底,此时细胞呈明显的分层生长,星形胶质细胞位于底层,形态多样,阳性率为(67.2±7.1)%;经过1次传代后,GFAP阳性率有所提升(84.0±6.0)%,但不能完全去除小胶质细胞及少突胶质细胞,细胞仍呈分层生长;至第3次传代后,获得大量几乎为单一种类的星形胶质细胞,其胞体较大、突起较短粗,一般2-3个,胞核圆形或椭圆形,常偏于一侧,GFAP染色呈强阳性,阳性率可达(97.6±2.4)%。结论通过差速黏附与摇床震荡相结合的方法,获得了高纯度且生长状态良好的星形胶质细胞。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 大脑皮质 细胞培养 大鼠
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一种稳定高效的新生大鼠皮质神经元原代培养方法 被引量:2
8
作者 马万 袁文俊 +3 位作者 焦英甫 王春生 陈桂英 孟尽海 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期510-514,共5页
目的:建立一种稳定、高效、简单可行的新生大鼠大脑皮质神经元原代培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,分离皮质,采用木瓜蛋白酶消化、实验前多聚赖氨酸铺板、不同机械吹打次数及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基... 目的:建立一种稳定、高效、简单可行的新生大鼠大脑皮质神经元原代培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,分离皮质,采用木瓜蛋白酶消化、实验前多聚赖氨酸铺板、不同机械吹打次数及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基的培养方法,MTT比色法分析检测神经元细胞成活率;于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态;利用神经元特异性标志物微管蛋白相关标志物2(microtubule associated protein 2,MAP2)鉴定神经元纯度。结果:木瓜蛋白酶明显增加原代培养神经元细胞活力(P<0.01),采用适度的机械吹打、实验前多聚赖氨酸铺板及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基,对神经细胞的活力没有明显的影响(P>0.05)。大部分皮质神经元具有典型的神经元形态特征,经MAP2免疫荧光技术鉴定神经元所占比例达95%以上。结论:该方法操作简单高效,方便可行,结果稳定。 展开更多
关键词 大脑皮质 神经元 原代培养 新生大鼠
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大鼠大脑皮层神经干细胞培养方法比较 被引量:7
9
作者 蔡明 陆耀飞 娄淑杰 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期70-74,共5页
目的:比较不同培养基对大脑皮层神经干细胞增殖的影响,以寻找培养神经干细胞的有效方法。方法:体外分离生后24 h SD大鼠大脑皮层细胞,使用DMEM/F12+B27+bFGF、Neurobasal+B27+bFGF和Neuro-basal+B27三种培养条件,分别用悬浮培养法和贴... 目的:比较不同培养基对大脑皮层神经干细胞增殖的影响,以寻找培养神经干细胞的有效方法。方法:体外分离生后24 h SD大鼠大脑皮层细胞,使用DMEM/F12+B27+bFGF、Neurobasal+B27+bFGF和Neuro-basal+B27三种培养条件,分别用悬浮培养法和贴壁培养法对细胞进行培养。免疫细胞化学技术分别以Nestin、β-TubIII和GFAP标记神经干细胞、神经元和星形胶质细胞。结果:在悬浮培养情况下,三种培养条件均诱导所培养的细胞形成神经球,经染色鉴定神经球中的细胞均表达Nestin;其中DMEM/F12+B27+bFGF培养的神经干细胞增殖速度最快(P<0.01),Neurobasal+B27培养的神经干细胞增殖效率最高(P<0.01)。在贴壁培养情况下,经染色鉴定,部分细胞表达β-TubⅢ或GFAP。结论:大脑皮层神经干细胞不适合贴壁培养,DMEM/F12+B27+bFGF条件适合大脑皮层神经干细胞体外增殖。 展开更多
关键词 SD大鼠 大脑皮层 神经干细胞 培养方法
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人巨细胞病毒感染新生乳鼠原代培养脑神经细胞研究 被引量:3
10
作者 王明丽 陈贵海 +5 位作者 唐久来 史百芬 胡勇 汪红俊 李京培 任斌 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期136-142,共7页
为了研究确定人巨细胞病毒(HCMV)体外感染Balb/c新生乳鼠原代培养脑神经细胞及其感染特征,制备和培养了新生乳鼠脑神经细胞并进行病毒感染。感染后每隔2~3天在倒置显微镜下观察活细胞培养物并摄影记录。在感染后第1~... 为了研究确定人巨细胞病毒(HCMV)体外感染Balb/c新生乳鼠原代培养脑神经细胞及其感染特征,制备和培养了新生乳鼠脑神经细胞并进行病毒感染。感染后每隔2~3天在倒置显微镜下观察活细胞培养物并摄影记录。在感染后第1~4周,取样进行苏木素-伊红(HE)染色及尼氏(Nisl)染色。同时,用已知抗HCMV外膜蛋白的单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,和地高辛标记的HCMV寡核苷酸特异性探针进行原位杂交,检测相应病毒核酸及胞内定位。结果在病毒感染后的第2周,受染细胞出现明显病变,表现为颗粒增多,折光性减弱。HE染色可见,受染神经细胞明显肿胀,胞浆及胞核均为嗜酸性,并可见到嗜酸性包涵体。Nissl氏染色发现,胞核旁的尼氏小体变小,成粉末状,甚至消失。免疫细胞化学染色显示,受染神经细胞呈阳性反应。原位杂交结果证实,病毒核酸存在于受染细胞的胞浆及核内。这表明,HCMV能感染体外原代培养的新生乳鼠脑神经细胞,且病理特征与在人胚脑神经细胞观察到的基本模式一致。这种体外培养的细胞模型,可用于HCMV致中枢神经系统感染的研究。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 HCMV 脑神经细胞 原代培养 CNS
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大鼠大脑皮质神经元的分离及培养 被引量:2
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作者 霍桂桃 尹晓敏 +2 位作者 周向梅 马李颖 赵德明 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期1-4,共4页
为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯... 为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯化神经元,甲苯胺蓝染色法及抗NSE单克隆抗体对纯化后的神经元进行鉴定。结果表明,培养的神经元生长良好,形态正常,纯度高达90%以上。采用本方法培养的神经元可作为深入研究中枢系统疾病的细胞模型材料。 展开更多
关键词 大鼠 大脑皮质 神经元 培养 胰蛋白酶
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一种简便的皮层神经元原代培养方法的建立及其培养结果分析 被引量:3
12
作者 唐仕军 赵冬 +4 位作者 朱立仓 李晓天 朱文学 杨鹏 王业忠 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第48期19-22,126,共5页
目的建立一种简便的皮层神经元原代培养方法,并鉴定其培养效果。方法取出生24 h内的SD大鼠大脑皮层组织,采用胰酶消化法获取神经元细胞悬液,用10%FBS+DMEM高糖培养基接种在经多聚赖氨酸包被的培养板中,4 h后全量换用Neurobasal+2%B27+0.... 目的建立一种简便的皮层神经元原代培养方法,并鉴定其培养效果。方法取出生24 h内的SD大鼠大脑皮层组织,采用胰酶消化法获取神经元细胞悬液,用10%FBS+DMEM高糖培养基接种在经多聚赖氨酸包被的培养板中,4 h后全量换用Neurobasal+2%B27+0.5 mmol/L谷氨酰胺培养液。培养后采用倒置相差显微镜观察神经元形态变化,连续观察8天。神经元培养7~8天进行免疫荧光染色,于激光共聚焦显微镜下对神经元进行鉴定,计算神经元密度和纯度。结果皮层神经元接种时体积小,透亮,呈圆形,单个散在分布。接种后有少量细胞开始贴壁,2 h左右贴壁较多,少量细胞伸出短小的突起;4 h左右已基本贴壁,大量细胞伸出突起,周围光晕明显;培养3天时神经元突起明显伸长,相互交织,细胞透亮,立体感强,呈圆形、椭圆形、梭形;培养5~6天时神经元体积增大,突起交织成网状;培养7~8天时,神经元细胞体饱满,细胞质透亮,细胞核大而明显,细胞体周围折光性强,立体感好,突起交织成致密的网络结构。经免疫荧光染色后鉴定,分离培养的是神经元,密度1.5×106个/m L,纯度>90%。结论成功建立了一种操作简便的皮层神经元培养方法,该方法培养的神经元纯度高、密度大,可为今后的相关学科研究提供良好的细胞模型。 展开更多
关键词 皮层神经元 原代培养 Neurobasal B27 细胞模型 新生大鼠
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人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ_(25-35)致原代大鼠皮层神经元凋亡 被引量:10
13
作者 吴佳莹 沈圆圆 +5 位作者 朱闻杰 程梅园 王志强 刘琰 朱丹雁 楼宜嘉 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期393-401,共9页
目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入A... 目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25-3510μmol/L模拟阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)脑组织局部微环境。孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系。采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(ΔΨm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡。Rg1预处理能对抗Aβ25-35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20μmol/L)活性最强。Aβ25-35处理24 h能降低神经元的线粒体ΔΨm,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspase 3和caspase 9,从而引起神经元凋亡。而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗。结论:Rg1在1μmol/L至20μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联。 展开更多
关键词 大脑皮质/病理学 神经元/药物作用 细胞凋亡/药物作用 人参皂苷/药理学 人参皂苷RG1 原代皮层神经元 神经保护 Β淀粉样肽 细胞凋亡 线粒体
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大鼠皮质神经元的体外培养和纯化 被引量:7
14
作者 陈丽敏 陈晓春 +1 位作者 林挺岩 朱元贵 《福建医科大学学报》 2002年第3期239-241,F002,共4页
目的 探讨大鼠皮质神经元分离纯化的有效方法。 方法 取胎鼠大脑皮质组织 ,分别在不同的培养液中进行原代培养 ,利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察 ;并以免疫细胞化学技术对神经元进行染色。 结果 在相差显微镜下可见加用 N2... 目的 探讨大鼠皮质神经元分离纯化的有效方法。 方法 取胎鼠大脑皮质组织 ,分别在不同的培养液中进行原代培养 ,利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察 ;并以免疫细胞化学技术对神经元进行染色。 结果 在相差显微镜下可见加用 N2 添加剂和胎牛血清培养的神经元生长良好 ,胞体形态多样 ,突起数目多 ,长度长 ,与邻近神经元的胞体或突起形成接触 ,而胶质细胞则大量死亡 ,神经元纯化率达 94 %以上 ;未加用 N2 添加剂培养的神经元胶质细胞大量存在 ,神经元纯化率达 5 0 %左右。 结论  N2 展开更多
关键词 神经元 细胞培养 大脑皮质 大鼠 免疫细胞化学
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SD大鼠脑皮层星形胶质细胞的原代培养及纯化方法改良 被引量:4
15
作者 王雪莹 黄绍平 +1 位作者 陈小聪 姜永生 《陕西医学杂志》 CAS 2009年第9期1107-1110,共4页
目的:探讨大鼠大脑皮层星形胶质细胞的培养方法,以获得纯度高的细胞进一步对其进行体外实验研究。方法:在Mc-Carthy方法基础上改用出生后1d的SD大鼠的大脑皮层,结合机械分离和胰酶消化后制备单细胞悬液接种,差速贴壁1h,培养14d以后上摇... 目的:探讨大鼠大脑皮层星形胶质细胞的培养方法,以获得纯度高的细胞进一步对其进行体外实验研究。方法:在Mc-Carthy方法基础上改用出生后1d的SD大鼠的大脑皮层,结合机械分离和胰酶消化后制备单细胞悬液接种,差速贴壁1h,培养14d以后上摇床以去除混杂细胞,细胞融合后传代,每次传代前都经历胰酶冲洗和差速贴壁,传3代后利用GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。结果:经过原代传代及纯化,大脑皮层星形胶质细胞体外培养成功,并有较高的纯度。GFAP-FITC免疫荧光染色阳性。结论:经过合理取材、改良纯化方法后,可以更为简便得到纯度很高的星形胶质细胞。 展开更多
关键词 星形细胞 细胞培养 大脑皮层 体外发生 模型 动物 大鼠
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大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养及其促神经突起生长作用研究 被引量:30
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作者 薛庆善 郭畹华 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第2期151-155,共5页
取生后1周以内SD大鼠大脑皮质,用胰蛋白酶消化结合机械吹打使细胞分散,制成较大量的初细胞悬液。将初细胞悬液先行粘附处理30min以排除其中的成纤维细胞,再制成较小量的次细胞悬液。将之接种到预先涂有鼠尾胶原的培养瓶中,... 取生后1周以内SD大鼠大脑皮质,用胰蛋白酶消化结合机械吹打使细胞分散,制成较大量的初细胞悬液。将初细胞悬液先行粘附处理30min以排除其中的成纤维细胞,再制成较小量的次细胞悬液。将之接种到预先涂有鼠尾胶原的培养瓶中,令其贴壁3~5h,细胞密度约1×105个/cm2。补加培养液,继续培养。培养液为含20%小牛血清的DMEM/F12混合培养液。俟细胞铺满瓶底后传代。届时细胞悬液亦行30min的粘附处理。以0.5×105个/cm2的细胞密度种植于培养瓶中。传代后先培养48h;换成无血清培养液再培养48h并收集条件培养液。对部分传代细胞进行胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学杂色鉴定,证明传代后的细胞中星形胶质细胞比例达94.71%。取条件培养液及单纯DMEM/F12培养液各1份,分别与2份有血清培养液混合,制成实验组与对照组两种培养液,以悬滴法培养鸡胚背根节。48h后,比较两组背根节神经突起的平均长度。经统计学分析揭示,实验组背根节神经突起平均长度显著大于对照组者,说明星形胶质细胞具有明显的促神经突起生长作用。 展开更多
关键词 大脑皮质 星形胶质细胞 细胞培养
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新生大鼠大脑皮层神经元原代培养与鉴定 被引量:3
17
作者 孙美群 陈前芬 汪洪涛 《蚌埠医学院学报》 CAS 2008年第1期19-21,共3页
目的:建立一种较理想的新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法。方法:新生大鼠大脑皮层通过胰酶消化获取单细胞悬液,用台盼蓝染色鉴定活性后种板培养;培养第3-4天加入阿糖胞苷纯化神经元;最后用甲苯胺蓝染色检测尼氏体进行鉴定。结果:... 目的:建立一种较理想的新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法。方法:新生大鼠大脑皮层通过胰酶消化获取单细胞悬液,用台盼蓝染色鉴定活性后种板培养;培养第3-4天加入阿糖胞苷纯化神经元;最后用甲苯胺蓝染色检测尼氏体进行鉴定。结果:实验获取细胞存活率高;在体外培养条件下细胞生长旺盛,培养第6-7天,细胞胞体较大,突起粗,分支多,突起交织成网,并能形成典型的神经细胞网络;培养第10-14天,检查有尼氏体细胞占90%以上。结论:该培养技术是大鼠皮层神经元体外培养的一种较理想的方法。 展开更多
关键词 细胞 培养的 神经元 大脑皮层 大鼠
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大鼠大脑皮质星形胶质细胞条件培养液促进小脑皮质神经元的生长 被引量:10
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作者 薛庆善 郭畹华 《细胞生物学杂志》 CSCD 1997年第1期23-26,51,共4页
本研究从大鼠大脑皮质分离、纯化星形胶质细胞,再经培养后收集星形胶质细胞的无血清条件培养液。用盖玻片培养法与快速自动比色微量分析法研究了星形胶质细胞条件培养液对小脑皮质神经元生存以及神经元活力的影响。发现星形胶质细胞条... 本研究从大鼠大脑皮质分离、纯化星形胶质细胞,再经培养后收集星形胶质细胞的无血清条件培养液。用盖玻片培养法与快速自动比色微量分析法研究了星形胶质细胞条件培养液对小脑皮质神经元生存以及神经元活力的影响。发现星形胶质细胞条件培养液能够明显提高小脑皮质神经元的体外存活率,增强神经元的活力。表明星形胶质细胞具有神经营养性作用。 展开更多
关键词 大脑皮质 星形胶质细胞 培养液 神经元 小脑皮质
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新生大鼠大脑皮层和海马神经元体外培养方法及改进 被引量:1
19
作者 付丽娟 苗巍 +1 位作者 常彦忠 张宏丽 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期116-119,共4页
探索用24h内新生SD大鼠进行神经元体外培养的方法.取新生SD大鼠的大脑皮层和海马,胰酶消化5~10min后,放入含100g/L血清的DMEM/F12培养基中培养.24h后,更换含B27无血清培养基.以后每隔1d,半换液.结果显示绝大部分神经元于第2... 探索用24h内新生SD大鼠进行神经元体外培养的方法.取新生SD大鼠的大脑皮层和海马,胰酶消化5~10min后,放入含100g/L血清的DMEM/F12培养基中培养.24h后,更换含B27无血清培养基.以后每隔1d,半换液.结果显示绝大部分神经元于第2天长出突起,第3天神经元间形成复杂的联系,第7天神经元发育基本成熟.经神经元特异性烯醇酶(NSE)鉴定,培养细胞均为神经元,纯度可达90%以上,可以用于实验。 展开更多
关键词 新生大鼠 神经元 原代培养
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胎鼠大脑皮层神经干细胞的分离培养、分化及鉴定 被引量:2
20
作者 胡晓霞 朱筑霞 +1 位作者 陈刚 谭新杰 《贵阳医学院学报》 CAS 2008年第4期347-350,共4页
目的:建立胎鼠大脑皮层神经干细胞体外分离、培养、分化及鉴定的方法,探讨神经干细胞的基本生物学特性。方法:取孕14 d胎鼠大脑皮层,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞... 目的:建立胎鼠大脑皮层神经干细胞体外分离、培养、分化及鉴定的方法,探讨神经干细胞的基本生物学特性。方法:取孕14 d胎鼠大脑皮层,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果:从胎鼠大脑皮层分离的细胞呈神经巢蛋白(Nestin)免疫阳性并能在体外传代培养,血清诱导分化后的细胞可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白,诱导分化成的神经元能表达突触的特异性标志Synatophymin。结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物Nestin,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,属于中枢神经系统的神经干细胞。 展开更多
关键词 干细胞 大脑皮质 细胞培养 细胞分化 胚胎 大鼠 Sprague-Dawley
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