3′-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护与抗氧化作用的影响

目的:研究3′-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制与抗氧化作用的关系。方法:大鼠大脑中动脉栓塞,制作局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,缺血后10min,于舌下静脉给不同剂量的3′-大豆苷元磺酸钠。再灌注24h后,腹腔静脉取血并分离血清,断头取脑,一组前脑做TTC染色,测定脑梗死体积,另一组左脑制成10%的脑组织匀浆。比色法测血清及脑组织匀浆SOD、LDH的活性及MDA的含量。结果:与模型组相比,各剂量的3′-大豆苷元磺酸钠治疗组脑梗死体积减小;血清及脑组织SOD的活性显著升高、MDA含量均降低;血清LDH活性明显降低,组织LDH活性降低。结论:3′-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤具有一定的保护作用,其保护机制与3′-大豆苷元磺酸钠提高抗氧化作用、增强氧自由基的清除有关。

眼针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ICAM-1表达的影响

目的观察眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞间黏附因子(ICAM-1)表达的影响。方法 64只SD大鼠随机分为4组:正常组(未处理)、假手术组(同模型组,仅鱼线插入深度1 cm)、模型组(应用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,鱼线插入深度1.8～2 cm)和眼针组(模型成功后取肝区、上焦区、下焦区、肾区进行眼针治疗20 min,每日2次),每组16只。于再灌注后3 h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达的变化。结果眼针治疗后可使大鼠神经功能缺损评分明显下降,并显著降低脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达(P<0.01)。结论眼针具有明显地改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与下调脑组织ICAM-1表达有关。

中性鞘磷脂酶-2(Neutral sphingomyelin-2 N-SMase2)对大鼠脑缺血再灌注损伤中IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的影响

目的研究中性鞘磷脂酶-2(Neutral sphingomyelin-2 N-SMase2)对大鼠脑缺血再灌注损伤中IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的影响。方法采用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注(ischemia reperfusion I/R)损伤模型,侧脑室注射N-SMase2激活剂(daunorubicin DNR)或抑制剂GW4869,免疫组织化学技术检测蛋白神经酰胺(Ceramide Cera)和N-SMase2的表达,RT-PCR技术检测IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平。结果与对照组相比,再灌注组(I/R)大鼠脑组织Ceramide和N-SMase2的蛋白表达阳性细胞较对照组增多(P<0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的mRNA表达水平升高(P<0.05),侧脑室注射GW4869可显著降低IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA水平(P<0.05)。结论脑缺血再灌注模型中,N-SMase/Cera通路激活,参与调控神经细胞再灌注损伤,而N-SMase2抑制剂GW4869可明显降低IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的表达。

T细胞死亡偶联基因8在大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤中的表达

目的观察大鼠脑缺血-再灌注后缺血半暗带内T细胞死亡偶联基因8(TDAG8)的表达。方法体重250～280g的SD成年雄性大鼠36只,随机均分为正常组(C组)、假手术组(S组)和脑缺血-再灌注组(IR组)。采用大鼠大脑中动脉内线栓阻断法(MCAO)模型。IR组大鼠缺血2h后再灌注24h。再灌注结束后对大鼠进行神经行为学评分并检测大鼠脑缺血半暗带内的TD-AG8mRNA及TDAG8蛋白表达。结果 IR组脑缺血半暗带内TDAG8mRNA及TDAG8蛋白表达明显高于C组和S组(P<0.01);C组与S组之间差异无统计学意义。结论 TDAG8可能参与了大鼠脑缺血-再灌注损伤过程。

冠心舒通对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察冠心舒通对脑缺血再灌注(I/R)大鼠学习记忆能力及脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,以探究冠心舒通对I/R损伤脑组织的保护机制。方法:以健康Wistar大鼠为研究对象,随机分为假手术组、脑I/R模型组、冠心舒通高剂量(1 g/kg)组和低剂量(0.5 g/kg)组,每组各15只。采用大鼠左侧颈总动脉结扎方法建立I/R模型,造模前每组分别每日灌胃给予生理盐水、生理盐水、冠心舒通高剂量和冠心舒通低剂量,连续7 d;术后每天上午灌胃给予生理盐水、生理盐水、冠心舒通高剂量和冠心舒通低剂量,3 d后水迷宫训练同时继续给药,连续7 d,第8天进行Morris水迷宫测试;测试结束后处死大鼠取血液及脑组织,采用ELISA检测大鼠血清中Bcl-2和Bax的蛋白变化水平,采用HE染色观察大鼠脑组织的病理改变;采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织中Bcl-2和Bax蛋白变化水平。结果:与假手术组比较,冠心舒通高剂量组大鼠测试潜伏期略延长、经过平台次数和平台象限停留时间略减少、血清及脑组织中Bax蛋白水平略升高、Bcl-2蛋白水平略降低但无显著差异(P>0.05),冠心舒通低剂量组大鼠测试潜伏期延长、经过平台次数和平台象限停留时间减少、血清及脑组织中Bax蛋白水平升高、Bcl-2蛋白水平降低有显著差异(P<0.01),I/R模型组大鼠测试潜伏期明显延长、经过平台次数和平台象限停留时间明显减少、血清及脑组织中Bax蛋白水平明显升高、Bcl-2蛋白水平明显降低有显著差异(P<0.01)。结论:冠心舒通能明显提高Wistar大鼠空间记忆能力,并能通过降低Bax蛋白水平和提高Bcl-2蛋白水平,抑制脑I/R损伤后的细胞凋亡,从而对I/R脑组织具有保护作用。

参麦注射液对脑缺血再灌注后肺损伤大鼠血浆ET-1的影响

目的:观察参麦注射液对脑缺血再灌注后肺损伤大鼠血浆ET-1水平的影响。方法:本实验采用40只w istar大鼠,雌雄各半,随机分为4组:正常组(空白组)、缺血再灌注组(模型组)、参麦+缺血再灌注组(参麦组)、丹参+缺血再灌注组(丹参组),观察脑缺血2h,再灌注4h后,各组动物肺组织病理、动脉血气分析及血浆中ET-1含量的变化。结果:模型组肺组织出现明显的病理损伤,参麦组和丹参组肺损伤均明显改善。模型组PO2明显低于空白组,参麦组与丹参组PO2均显著高于模型组。模型组ET-1含量明显高于空白组,参麦组、丹参组明显低于模型组,参麦组与丹参组比较,血浆ET-1含量明显降低,有显著性差异。结论:脑缺血再灌注可导致大鼠急性肺损伤,参麦注射液和丹参注射液均能改善肺损伤,可能与改善血管内皮功能有关,并且以参麦注射液作用较佳。

曲美他嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达的影响

目的观察曲美他嗪(TMZ)对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞Caspase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法成年健康Wistar大鼠45只,随机分为假手术对照组(n=5)、脑缺血再灌注组(n=20)、TMZ预处理组(n=20)。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注模型。采用原位杂交方法检测脑组织Caspase-3 mRNA、Bcl-2m RNA表达的变化。结果Bcl-2 mRNA在缺血再灌注3h表达增强(P<0.05),6h显著增强(P<0.01),24h减弱(P<0.05),48h消失(P>0.05)。TMZ组的Bcl-2 mRNA表达量多于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-3 mRNA在再灌注3h表达增强(P<0.05),6h显著增强(P<0.01),24h更加明显(P<0.01),48h减弱(P<0.05)。TMZ组的Caspase-3 mRNA表达量显著少于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TMZ可能通过诱导Bcl-2的表达和抑制Caspase-3的生成而发挥抗凋亡作用。

BMP-7对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-9表达的影响

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对大鼠脑缺血再灌注损伤后皮质Caspase-9表达的影响,探讨其神经保护机制。方法成年雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、BMP-7治疗组(0.1 mg/kg,0.2 mg/kg),每组10只,模型组和BMP-7治疗组采用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,Longa评分法进行神经功能评分,HE染色观察缺血侧皮质病理学变化,实时定量RT-PCR法检测Caspase-9 mRNA的表达,免疫组织化学法及Western blot法检测Caspase-9蛋白的表达。结果与模型组相比,BMP-7治疗组大鼠神经功能评分明显降低(t=3.79,t=4.43,P<0.01),HE染色显示缺血侧皮质脑组织病理损伤减轻,且以高剂量组较为明显,实时定量PCR显示Caspase-9 mRNA表达明显降低(t=2.56,t=4.52;P<0.05,P<0.01),Western blot检测显示Caspase-9蛋白表达明显减少(t=3.11,t=5.62;P<0.05,P<0.01)。结论 BMP-7能减轻缺血再灌注损伤脑组织损伤程度,其机制可能与下调线粒体凋亡途径中Caspase-9的表达有关,而且保护作用与剂量呈正相关。

虎纹蜘蛛毒素-I对全脑缺血再灌注大鼠海马神经元Fas凋亡通路的抑制作用

目的:探讨虎纹蜘蛛毒素-I(HWTX-I)与由Fas分子启动的死亡信号转导通路之间的关系及可能的神经保护作用分子机制。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及用药组三组,每组16只,采用改良的Pulsinelli"四血管阻断法"并结合蛛网膜下腔置管术构建全脑缺血再灌注损伤大鼠模型。免疫组织化学法检测海马组织CA1区Fas、FasL、FADD蛋白水平表达,RT-PCR法检测海马组织死亡信号转导通路相关因子Fas、FasL、FADD核酸水平表达。结果:免疫组化法检测结果显示,生理盐水组、用药组Fas、FasL和FADD蛋白表达高于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),用药组Fas、FasL和FADD蛋白表达低于生理盐水组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);RT-PCR检测结果显示,假手术组Fas、FasL、FADDmRNA表达低于生理盐水组和用药组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),用药组Fas、FasL、FADDmRNA表达均低于生理盐水组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:HWTX-I蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织具有一定的神经保护作用,其机制可能是通过抑制Fas分子启动的死亡信号转导通路激活而发挥作用。

超负荷血糖条件下大鼠脑缺血再灌注损伤及其MMP-2及MMP-9的表达

目的探讨超负荷血糖对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-2及MMP-9的表达影响。方法用Wistar大鼠腹腔内注射链脲佐菌素,建立超负荷糖尿病大鼠模型,之后做大脑中动脉脑缺血再灌注模型。然后对大鼠进行脑梗死体积计算,并采用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测超负荷血糖大鼠和正常大鼠脑缺血3h再灌注6h、12h、24h、48h、96h、7d时MMP-9及MMP-9的表达,并与假手术正常对照组比较。结果超负荷血糖组梗死面积明显大于非超负荷血糖组;同时,前者MMP-2及MMP-9的表达明显高于后者。结论超负荷血糖加重了大鼠脑缺血再灌注损伤,超负荷血糖诱发的MMP-2及MMP-9的表达异常促进了脑缺血再灌注损伤的炎症机制,可能是其加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。

三七总皂苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤TGF-β1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织TGF-β1表达的影响,探讨PNS的脑保护机制。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注损伤模型,将30只成年雄性Sprague-Darley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PNS治疗组,每组10只,各组分别于再灌注24h后做神经功能缺陷评估,并断头取脑,用免疫组织化学法和半定量RT-PCR法检测各组缺血区脑组织TGF-β1表达的变化。结果:与缺血再灌注组相比,PNS治疗组术后大鼠神经功能缺陷评分显著降低,脑组织中TGF-β1的表达水平明显增高。结论:三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠有保护作用,其作用机制可能与促进TGF-β1的表达有关。

不同浓度白藜芦醇对脑缺血-再灌注大鼠HSP20表达的影响

目的探讨不同浓度白藜芦醇对缺血-再灌注脑损伤大鼠神经功能损伤及热休克蛋白20（HSP20）表达的影响。方法将150只健康的成年雄性SD大鼠随机分成五组：假手术组，模型组（I／R组），小剂量白藜芦醇（2．5mS／kg）组，中剂量白藜芦醇（5mS／kg）组，大剂量白藜芦醇（10mS／kg）组，每组30只，制作脑缺血一再灌注大鼠模型，灌注前20min给予生理盐水或不同浓度白藜芦醇腹腔注射，术后6h、24h、48h、72h、7d时间节点分别评定神经功能缺损评分。应用四氮唑红染色（TFC）脑组织后计算脑梗死病灶体积并比较五组的差异；分别应用免疫组织化学染色和Western blot检测缺血脑组织周边区组织的HSP20表达量并比较五组的差异。结果①各组神经功能缺损评分比较：各模型组大鼠在缺血-再灌注后各时间节点均有神经功能缺损，同时白藜芦醇剂量越大，大鼠的神经功能缺损改善越明显；②各组脑梗死病灶体积比较：不同浓度白藜芦醇干预各组大鼠的脑梗死体积显著减少（P〈0．05），且白藜芦醇剂量越大，大鼠的脑梗死体积减少程度越大，呈显著剂量依赖性；③在各个时间点，各组大鼠缺血周边区脑组织的HSP20阳性细胞数为：大剂量白藜芦醇组〉中剂量白藜芦醇组〉小剂量白藜芦醇组〉模型组〉假手术组（P〈0．05），并且白藜芦醇剂量越大，大鼠的HSP20蛋白表达量越多。结论①缺血一再灌注脑损伤过程中，白藜芦醇能有效地保护大鼠脑神经细胞，减少脑梗死体积，改善神经功能缺损评分，这一作用可能是通过促进HSP20表达来完成的；②白藜芦醇对脑缺血一再灌注损伤的保护作用与剂量相关，并且呈现显著剂量依赖性。

巴曲酶对晚期糖尿病大鼠脑缺血／再灌注损伤神经细胞形态学及脑组织胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的观察巴曲酶对糖尿病大鼠缺血／再灌注（I／R）损伤脑组织神经元形态学改变及胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达的影响。方法40只Wistar大鼠被随机分为8组，每组5只。采用链脲佐菌素55g／kg一次性腹腔注射制备糖尿病模型，采用四动脉夹闭法制备全脑I／R损伤模型。巴曲酶组在四动脉闭塞前腹腔注射巴曲酶5Bu／kg，正常对照组和糖尿病组不给药。分别于制模后24h及48h处死大鼠取脑，部分脑组织进行苏木素-伊红（HE）染色，计算神经元细胞坏死率；部分脑组织用免疫组化染色，观察IGF—1表达。结果非糖尿病脑I／R24h和48h组及糖尿病组神经细胞坏死率和IGF-1阳性细胞表达率均显著高于正常对照组；非糖尿病脑I／R48h神经细胞坏死率和IGF-1阳性细胞表达率高于24h组；糖尿病脑I／R24h和48h组神经细胞坏死率显著高于非糖尿病脑I／R24h和48h组，IGF-1阳性细胞表达率分别低于非糖尿病脑I／R24h和48h组，其中以48h组作用显著；糖尿病脑I／R24h和48h巴曲酶组神经细胞坏死率显著低于糖尿病脑I／R24h和48h组，IGF-1阳性细胞表达率分别高于糖尿病脑I／R24h和48h组（P均〈0．05）。结论糖尿病中晚期脑组织存在一定程度的损伤，且糖尿病脑梗死后细胞坏死增加，IGF-1表达明显降低，脑保护功能下降，可能与糖尿病脑梗死代偿能力差、病情重、预后差有关，而巴曲酶对糖尿病脑梗死组织具有显著的保护作用。

COX-2抑制剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的观察选择性环氧合酶2(cyclooxygenase2,COX2)抑制剂尼美舒利(nimesulide)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺陷、脑梗死体积及前列腺素E2(PGE2)含量的影响。方法用线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,动物分别于缺血前30min、再灌注后6h、12h给予3个不同剂量尼美舒利(3、6和12mg/kg,ip)或等体积的溶媒。于再灌注后6、12、24h进行神经功能评分;采用TTC染色法测定脑梗死体积;应用ELISA法检测PGE2含量。结果尼美舒利呈剂量依赖性减少脑梗死体积并改善功能预后,与溶媒组比较有显著性差异;各尼美舒利治疗组脑梗死后PGE2含量和溶媒组相比显著降低。结论尼美舒利对缺血性脑损伤具有明显的保护作用,其保护作用可能与通过减少花生四烯酸环氧酶途径的代谢产物,从而抑制脑缺血后的炎症反应有关。

丁苯酞注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的保护作用。方法选取雄性SD大鼠50只,随机分为假手术组(10只)、缺血再灌注组(20只)、丁苯酞注射液组(20只)。制备SD大鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注22 h,丁苯酞注射液组于缺血1 h后予丁苯酞注射液腹腔注射,假手术组和缺血再灌注组予等体积生理盐水。应用TTC染色观察脑梗死体积;免疫组织化学检测方法观察Bcl-2和Bax表达的变化。结果与缺血再灌注组相比,丁苯酞注射液组神经功能缺损程度减轻,梗死灶体积减小,Bcl表达增多,Bax表达减少。结论丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡有保护作用。

血脑屏障与脑缺血再灌注损伤研究进展

脑缺血再灌注损伤主要是指缺血脑组织恢复血液灌注后,脑组织损伤反而加重,表现为其神经损害体征和形态学改变有时会较前更加明显等。血脑屏障是存在于脑组织和血液之间的一个复杂的系统,能控制血脑两侧的物质转运,从而保证中枢神经组织内环境的相对稳定。血脑屏障的损伤在脑缺血再灌注损伤的发生及发展中起重要作用。多种因素参与了血脑屏障结构和功能的改变,而这些变化则是脑缺血再灌注损伤病理变化的重要环节之一。对影响血脑屏障改变的因素及其血脑屏障与脑缺血再灌注损伤之间的关系进行综述,为探讨脑缺血再灌注损伤的有效防治提供依据。

三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞相关调节因子及脑细胞凋亡的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)对脑缺血再灌注损伤(CIRI)脑组织细胞抑凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及中枢神经系统神经干细胞(NSCs)相关调节因子巢蛋白(Nestin)、脑源性神经营养因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)的影响,并探讨其相互关系。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、PNS组3组;采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;缺血30min后腹腔注射三七总皂苷,再灌注1h、3h、5h后取组织标本;免疫组织化学法检测Bcl-2、Nestin、BDNF、EGF蛋白的表达。结果缺血再灌注各时间点,PNS组Bcl-2、Nestin、BDNF、EGF的表达与模型组比较明显增加,与假手术组比较增加显著,模型组Bcl-2、Nestin、BDNF、EGF的表达较PNS组与假手术组明显减少。结论三七总皂苷通过上调Bcl-2的表达而抑制神经细胞凋亡,同时增强Nestin、BDNF、EGF蛋白的表达而促进NSCs增殖,起到抗CIRI的作用。

舒脉宁注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

[目的]探讨舒脉宁注射液(SHUMN)对脑缺血再灌注损伤的保护作用。[方法]采用大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,观察脑缺血前后血浆一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和脑组织钙及含水量的变化。[结果]脑缺血再灌注期血浆NO、ET和脑组织钙及含水量显著升高(P<0.05),使用舒脉宁注射液后,血浆NO、ET和脑组织钙及含水量明显降低。[结论]舒脉宁注射液对脑缺血再灌注损伤确有保护作用。

纳洛酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的:探讨纳洛酮对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:24只Wister大鼠随机分为3组,采用腔内线栓法制备动物模型,检测纳洛酮治疗组及对照组髓过氧化物酶(MPO)含量。结果:大鼠脑缺血再灌注后脑组织MPO含量明显增加(P<0.05),应用纳洛酮后缺血侧脑组织MPO含量显著下降(P<0.05)。结论:纳洛酮可以减轻脑缺血再灌注损伤,纳洛酮具有神经保护作用。

环氧合酶2基因在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤过程中环氧合酶2基因的表达及其意义。方法采用栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。随机分为8组:假手术组,缺血2h组,缺血再灌注3h、6h、12h、24h、48h、72h组,每组10只。评定神经功能损伤,HE染色观察脑组织形态学改变。Northern blot、Western blot和免疫组织化学染色方法检测脑组织环氧合酶2 mRNA和蛋白产物表达。结果神经功能缺损表现随缺血再灌注时间的延长而逐渐加重。缺血2h组环氧合酶2 mRNA和蛋白产物表达比假手术组明显增加(P<0.01),再灌注后表达逐渐增强,再灌注12h环氧合酶2的mRNA表达达高峰(0.92±0.30),再灌注24h环氧合酶2的蛋白产物表达达高峰(0.72±0.18),与其它组比较差异有显著性(P<0.01)。结论环氧合酶2基因在局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达呈动态变化过程,环氧合酶2可能与缺血再灌注后迟发性神经细胞死亡有关。