靶点药物Cetuximab(C225)研究新进展

在许多肿瘤组织中均有表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)的过表达,它的失调与肿瘤对化疗和放疗的耐受以及不良预后相关,为肿瘤的治疗提供了一个理想的分子靶点.Cetuximab(C225)是特异性EGFR单克隆抗体,与化疗或放疗联合应用时具有协同作用,具有毒副作用少、靶向性好等优点.Cetuximab(C225)已被批准用于对伊利替康抵抗的结直肠癌和头颈部鳞癌的治疗,对非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌等具有EGFR高表达肿瘤治疗的临床试验正在进行之中,为肿瘤治疗开辟了一个全新的领域.

偶联EGFR单抗C225的Fe_3O_4/Ag复合纳米颗粒的抗体活性鉴定及其对鼻咽癌细胞增殖的作用

目的:研究多功能纳米材料Fe3O4/Ag/C225在体外的稳定性、靶向性及抗肿瘤疗效。方法:检测复合纳米颗粒Fe3O4/Ag的释药水平;通过MTT比色法初步检测Fe3O4/Ag/C225抑制鼻咽癌肿瘤细胞生长的作用;采用ELISA法检测复合纳米颗粒Fe3O4/Ag/C225上的C225的稳定性。结果:复合纳米颗粒Fe3O4/Ag/C225释药缓慢;偶联在复合纳米颗粒Fe3O4/Ag/C225上C225保持了抗体本身约82%的活性;复合纳米颗粒对鼻咽癌肿瘤细胞抑制作用明显。结论:Fe3O4/Ag/C225在体外稳定性好,偶联C225的复合纳米颗粒保存了抗体活性,对鼻咽癌肿瘤细胞有抑制作用。Fe3O4/Ag/C225有望发展成为分子影像调强放疗的多功能示踪剂。

纳米Fe_3O_4/C225复合物对结直肠癌LoVo细胞放射增敏作用的初步研究

目的：探讨纳米Fe3 O4/C225复合物（简称复合物）对结直肠癌LoVo细胞放射增敏性的影响。方法采用MTT法观察不同浓度复合物（0、3.125、6.25、12.5、25、50、100mg/L）作用24h后的增殖抑制率，根据实验设计分为单纯照射组、C225＋照射组及复合物＋照射组，采用克隆形成实验检测3组经0、2、4、6、8和10Gy X线照射后的存活分数（ SF），流式细胞仪检测3组经4Gy X线照射24h后的细胞周期情况，采用Western blotting检测经4Gy X线照射24h后的表皮生长因子受体（ EGFR）蛋白水平及其相关信号通路中p-P38和p-Akt蛋白水平。结果在3.125～100mg/L范围内，随复合物浓度增加， LoVo细胞的增殖抑制率升高，0、3.125、6.25、12.5、25、50、100mg/L的增殖抑制率依次为0％、（8.950±0.086）％、（14.760±0.011）％、（29.860±0.001）％、（41.750±0.017）％、（59.770±0.010）％和（78.710±0.017）％，组间差异有统计学意义（P＜0.05）；复合物＋照射组的SF、S期细胞比例及p-Akt、EGFR蛋白水平均低于C225＋照射组和单纯照射组，G0/G1期、G2/M期细胞比例及p-P38蛋白水平均高于C225＋照射组和单纯照射组，以上差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论纳米Fe3 O4/C225复合物可抑制LoVo细胞增殖并具有放射增敏作用，可能与G0/G1期阻滞及EGFR相关信号通路受抑制有关。

C225偶联磁性白蛋白纳米球的制备、表征及联合磁流体热疗体外靶向抗肺癌的研究

目的:制备抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单抗西妥昔(C225)偶联的磁性白蛋白纳米球,对其表征并联合磁流体热疗观察其体外抑制肺癌细胞的效果。方法:化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒,去溶剂化-交联法制备磁性白蛋白纳米球(magnetic albumin nanospheres,MANs),然后用双功能交联剂N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate,SPDP]将C225偶联其上制备C225-MANs。纳米球的形态、平均粒径、zeta电位、抗体结合率、含铁量、细胞靶向性及磁热动力学均被表征。最后采用CCK-8及流式细胞(flow cytometry,FCM)分析检测C225-MANs介导的体外双靶向磁流体热治疗肺腺癌细胞GLC-82的效果。结果:透射电镜显示制备的C225-MANs为球形,Fe3O4纳米粒被封装其内,Fe含量约2.0 mg/mL;平均水合粒径约为140 nm,带负电;在输出电流20 A、输出频率200 kHz的交变磁场作用下,不同Fe含量的C225-MANs能在60 min内升温到39.3℃～52.0℃,且加热30 min后温度能保持恒定。FCM荧光检测显示抗体结合率为79.74%。免疫荧光实验和细胞MRI成像证实C225-MANs能够靶向GLC-82细胞。CCK-8与FCM分析显示双靶向联合治疗组的细胞增殖率明显低于其他治疗组,而凋亡率明显高于其他治疗组(P <0.05)。结论:C225-MANs对肺腺癌细胞GLC-82具有良好的靶向效应,且双靶向磁流体热疗联合分子靶向治疗在体外能有效抑制肺癌细胞。

C225对人鼻咽癌细胞株CNE的生长抑制作用

目的探讨EGFR单抗C225对人鼻咽癌细胞株CNE的生长抑制作用及可能机制。方法以MTT比色法、倒置相差显微镜观察C225对CNE的生长抑制作用，以透射电镜、流式细胞术观察C225对CNE的凋亡诱导效应。结果MTT、法显示，C225对CNE具有明显的生长抑制作用，并随药物浓度的增加而逐渐增强，48hIC20--30为10μg／mL；以此浓度C225处理CNE，倒景相差显微镜观察发现，细胞变圆、脱壁，部分死亡、漂浮；透射电镜可见典型的凋亡超微结构改变；流式细胞术检测显示其24、48h凋亡率分别为（14．30±0．78）％、（15．30±0．95）％，显著高于对照组的（2．90±0．95）％和（4．70±0．60）％（P〈0．05）。结论C225对CNE细胞有明显的生长抑制作用，这可能其与诱导CNE凋亡有关。

C225的生物学特性及在头颈部肿瘤中的应用

C225是一种EGFR为靶点的人鼠嵌合型IgG1单克隆抗体,与放疗和/或化疗联合应用时具有协同作用,可以增加患者的放化疗疗效。目前,C225已用于结直肠癌和头颈部肿瘤的治疗,并取得了非常好的疗效。

C225对不同照射模式CNE-2裸鼠移植瘤Bax、Bcl-2表达的影响研究

目的研究西妥昔单抗(C225)对不同照射模式人鼻咽低分化鳞癌细胞(CNE-2)裸鼠移植瘤细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响。方法成功构建48只CNE-2裸鼠移植瘤模型,待成瘤后随机分为空白对照组、急速照射组、模拟IMRT组、C225组、急速照射+C225组、模拟IMRT+C225组,运用RT-PCR法检测Bax、Bcl-2的转录水平。结果 Bax转录水平:空白对照组、急速照射组、模拟IMRT组、C225组、急速+C225组和模拟IM-RT+C225组转录水平分别为0.452、0.662、0.558、0.542、0.621、0.555,放疗后Bax表达上调,急速照射组表达高于模拟IMRT组(P=0.005);使用C225后Bax表达上调(P=0.015);急速与急速+C225组、模拟IMRT组与模拟IMRT+C225组差异均无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2转录水平:空白对照组、急速照射组、模拟IMRT组、C225组、急速+C225组和模拟IMRT+C225组转录水平分别为0.629、0.685、0.654、0.625、0.658、0.648,各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论模拟IMRT照射时间延长,影响Bax的表达;C225可能具有一定促凋亡作用;放疗联合C225同单独使用放疗相比Bax表达无明显差异;照射及应用C225后Bcl-2表达的相对稳定,不受照射方式及C225的影响。

单克隆抗体C225对乳腺癌干细胞的抑制作用

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体西妥昔单抗(C225)对乳腺癌细胞系MCF-7中乳腺癌干细胞的抑制作用。方法MTT法检测C225对MCF-7细胞增殖的影响。将MCF-7进行微球体培养,根据培养液中是否加入表皮生长因子(EGF)和C225分为对照组、C225组、EGF组、EGF+C225组;培养13d,观察四组微球体形成大小及数量,计算微球体形成率(MFE);流式细胞术检测微球体细胞及常规培养MCF-7中CD44+CD24-细胞比例。结果MCF-7细胞增殖抑制率随C225质量浓度的增加而上升。与对照组比较,C225组微球体体积明显减小,且MFE和微球体中CD44+CD24-细胞比例明显降低,分别为(0.61±0.04)%vs(1.44±0.09)%(P<0.01)和(3.50±0.29)%vs(9.07±0.52)%(P<0.01)。与EGF组比较,EGF+C225组微球体体积明显减小,且MFE和微球体中CD44+CD24-细胞比例明显降低,分别为(0.68±0.04)%vs(1.61±0.05)%(P<0.01)和(4.00±0.58)%vs(10.47±0.79)%(P<0.01)。常规培养MCF-7中CD44+CD24-细胞比例为(2.03±0.15)%,与EGF组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。EGF组与对照组微球体形成大小、MFE以及微球体中CD44+CD24-细胞比例的比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论C225对MCF-7中CD44+CD24-细胞有明显抑制作用。

单抗C225致人肺鳞癌H-520细胞生长抑制和凋亡增加的研究

目的:观察表皮生长因子受体单克隆抗体C225对人肺鳞癌细胞系(H-520)生长、凋亡和周期分布的影响。方法:流式细胞检测H-520细胞EGFR表达比例,将鼠抗人EGFR一抗和FITC标记的羊抗鼠二抗加入细胞悬液中,孵育、漂洗重悬细胞后流式检测。MTT法测定C225抑制H-520细胞生长最佳浓度和最佳时间,将不同浓度C225加入指数生长的细胞培养液中,继续培养一定时间(48h),检测细胞生长抑制率。流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期。结果:H-520细胞中EGFR表达比例高达82.25%。C225抑制H-520细胞生长的最佳浓度是40nmol/L,最佳作用时间是72h。细胞凋亡实验结果显示,H-520细胞自然凋亡率为5.56%±0.62%,C225可使其凋亡百分率上升到13.75%±0.83%(P<0.05)。细胞周期分布显示40nmol/L C225可使细胞阻滞于G0+G1期,S期细胞比例下降。结论:C225对H-520细胞生长抑制作用,可能与细胞G0+G1期阻滞后凋亡有关。

C225单用及与DDP联用对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨C225单用及与顺铂(DDP)联用对于人子宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制。方法将40只子宫颈癌HeLa细胞株裸鼠移植瘤模型随机分为实验对照组、C225组、DDP组和C225+DDP组,每组10只。各组裸鼠分别经腹腔注射生理盐水、C225(1mg/只·次)、DDP(5mg/kg·次)、和C225+DDP(C2251mg/只·次,DDP5mg/kg·次)每周2次,共4周。治疗期间定期测量肿瘤大小,观察裸鼠全身状况,实验结束时,将移植瘤完整取出,称取瘤重,计算抑瘤率,并用免疫组织化学技术检测各组肿瘤组织中PCNA、VEGF的表达。结果C225组、DDP组、C225+DDP组肿瘤的平均体积均显著小于实验对照组(P=0.008,P=0.001,P=0.000);C225+DDP组的肿瘤体积亦显著小于DDP组与C225组(P=0.025,P=0.014);各组平均瘤重分别为2.67±0.18g、1.84±0.37g、1.57±0.18g、1.2±0.09g,C225组、DDP组、C225+DDP组与实验对照组之间具有显著性差异(P=0.015,P=0.001,P=0.000),抑瘤率分别为31.09%、41.2%、55.06%。免疫组化结果显示,PCNA阳性表达率在C225组、DDP组与C225+DDP组较实验对照组显著降低(P=0.033,P=0.011,P=0.003);VEGF的表达率经C225与DDP单用及联合治疗后较实验对照组显著降低(P=0.033,P=0.033,P=0.003)。结论C225与DDP均可抑制人子宫颈癌HeLa细胞株裸鼠移植瘤生长,两药联合应用的抑瘤效果优于两药单用;C225单用及与DDP联用后可显著抑制PCNA与VEGF的表达水平。

国产重组C225对人结肠癌细胞及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:比较国产重组C225与国外已上市同类药Erbitux是否具有相似或更好的与表皮生长因子受体(EGFR)的竞争结合力及体内外抗肿瘤药效。方法:构建EGFR高表达的人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,观察静脉注射国产重组C225对肿瘤生长的抑制作用,并评价其对肿瘤细胞诱导细胞凋亡和增殖的抑制作用。结果:HT-29结肠癌裸鼠移植瘤模型对单独应用的国产C225或Erbitux敏感性都很差,对单独应用CPT-11的敏感性也较差,但当国产C225和CPT-11联合应用后抗肿瘤作用大大提高,2次实验的相对肿瘤增殖率T/C(%)分别为20.0%(P<0.05)和19.0%(P<0.05)。对人结肠癌HT-29细胞抑制增殖和诱导凋亡作用的影响研究结果显示,国产C225与CPT-11联合疗法的凋亡指数/增生指数比,是单独使用国产C225或单独使用CPT-11的4.3倍以上。结论:在人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型中联合应用国产C225和CPT-11可以抑制EGFR,对肿瘤细胞有很好的诱导凋亡作用和抑制增殖作用,这种联合疗法对于CPT-11耐受的结直肠癌具有很好疗效。

西妥昔单抗增强放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823的作用及其机制

目的观察西妥昔单抗(C225)联合放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823增殖的影响,并探讨其机制。方法 (1)采用MTT法观察C225联合放疗对细胞生长增殖的影响,评价两者联合效应;(2)采用FCM检测C225联合放疗对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;(3)通过Western blot法检测C225联合放疗对EGFR细胞信号蛋白及其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化的影响。结果 (1)当C225联合三种不同剂量放疗时,均可显著抑制细胞的增殖,两者具有协同作用。(2)单用C225可使细胞阻滞于G0/G1期,并减少S期细胞比例。在C225作用后,G0/G1期及S期MGC803细胞比例分别为67.3%及24.8%,BGC823细胞则分别为71.9%及18.8%。单用放疗可使细胞阻滞于G2/M期。在放疗作用于MGC803细胞及BGC823细胞后,G2/M期比例分别为18.2%及19.5%。当C225与放疗联合作用时,G2/M期MGC803细胞及BGC823细胞比例进一步升高,分别为25.7%及26.4%,而S期细胞比例进一步下降,分别为18.6%及13.5%。(3)在C225处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为4.9%及9.9%,放疗处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为11.7%及19.8%,与对照组相比差异均具有统计学意义。当C225与放疗联合作用时,MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为20.1%及47.3%,与单用放疗组相比差异均具有统计学意义。(4)C225与放疗联合应用时,可使细胞EGFR信号蛋白表达下降,并能使其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化活性降低。结论 (1)西妥昔单抗可增强放疗对MGC803和BGC823细胞株的生长抑制作用;(2)其增敏作用的机制可能与抑制EGFR信号转导通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡增加等有关。

西妥昔单抗治疗晚期非小细胞肺癌的研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)生物靶点治疗药物主要是EGFR抑制剂。西妥昔单抗是高特异性EGFR单克隆抗体,是一种不良反应较小,相对安全的药物,其发挥作用的生物学基础与晚期非小细胞肺癌患者中表皮生长因子受体EGFR过表达可能有关,被认为是一种很有前途的新型抗肿瘤药物,用于晚期非小细胞肺癌药物治疗取得了一定的疗效。

肿瘤生物治疗的新热点——细胞、分子靶向性药物的发展

随着分子生物技术的高速发展和对发病机制从细胞、分子水平的进一步认识 ,肿瘤生物治疗已进入了一个全新的时代。本文重点介绍了肿瘤治疗领域中近年来发展的信号转导抑制剂———阻断人类表皮生长因子受体 2 (HER 2 )的Herceptin ,阻断HER 1的ZD1839,OSI 774和C2 2 5。同时也介绍了分子靶向性药物STI5

负载肿瘤干细胞膜微粒的DC-CIK/CTL细胞协同西妥昔单抗对结直肠癌细胞的杀伤作用及其机制

目的:探讨负载结直肠癌干细胞膜微粒(membrane microparticles,MMPs)DC-CIK与西妥昔单抗(Cetuximab,C225)对EGFR靶向药耐药结直肠癌细胞的靶向协同杀伤作用及其机制。方法:PCR法检测结直肠癌SW480、SW620、HCT116株细胞k-RAS突变状态,无血清悬浮细胞培养法富集SW480、HCT116肿瘤干细胞,RT-PCR检测干细胞标志物Sox-2和Oct-4。提取外周血单个核细胞培养DC与CIK,将结直肠癌干细胞MMPs负载DC后再与CIK共孵育。形态观察及MTT法分别检测DC-CIK/CTL细胞及其培养上清、C225单独和合并处理对SW480、SW620、HCT116及其干细胞的杀伤效应;RT-PCR检测DC-CIK/CTL细胞培养上清、C225单独和合并作用对SW480、SW620、HCT116细胞凋亡相关基因Fas和上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关E-钙黏蛋白和波形蛋白基因的表达,划痕实验测定DC-CIK/CTL细胞培养上清、C225单独及联合作用对结直肠癌细胞侵袭行为影响。结果:SW480、SW620和HCT116细胞均为k-RAS突变型;富集培养获得的结直肠癌干细胞样细胞高表达Sox-2和Oct-4 mRNA。MMPs负载DC-CIK/CTL细胞及其分泌上清与C225对结直肠癌细胞的抑制有协同作用。C225与MMPs负载DC-CIK/CTL上清联合组相对于两者单独作用组能提高Fas与E-钙黏蛋白基因的表达;联合组的迁移率比两者单独作用组小。结论:负载结直肠癌干细胞MMPs的DC-CIK/CTL细胞对EGFR靶向药耐药结直肠癌细胞有体外特异靶向杀伤效应,且与C225显著协同,其发生机制与逆转细胞EMT和诱导细胞凋亡有关。

西妥昔单抗联合奥沙利铂治疗头颈部鳞癌HN5裸鼠移植瘤的实验研究

目的：观察阻断EGFR的西妥昔单克隆抗体（cetuximab，C225）是否能提高奥沙利铂（OXA）对头颈部鳞癌细胞株HN5移植瘤的抗瘤效应。方法：建立裸鼠移植瘤模型50只，当裸鼠右大腿的肿瘤直径达到8．0mm（7．6～8．3mm）时开始实验。实验共分5组（每组10只），分别为对照组、单用C225组、单用OXA组、C225＋OXA（6h）组和C225＋OXA（24h）组。观察指标为肿瘤生长延迟时间（肿瘤从8．0mm生长至12．0mm所需时间）和肿瘤治愈的情况。结果：除C225＋OXA（6h）组中有1只荷瘤裸鼠在治疗过程中死亡外，其余荷瘤裸鼠有8只肿瘤消失，其中单用C225组和单用OXA组各1只，C225＋OXA（6h）组有4只，C225＋OXA（24h）组有2只。余下41只的裸鼠肿瘤生长情况为：单用C225组和单用OXA组的绝对延迟时间分别为（21．4±8．2）天和（2．7±2．4）天，而C225＋OXA（6h）组和C225＋OXA（24h）组的绝对延迟时间则分别为（32．5±8．1）天和（30．0±10．4）天，其标准化的延迟时间分别为（11．1±8．1）天和（8．6±10．4）天，增益因子分别为4．11和3．19。结论：C225能提高OXA对头颈部鳞癌细胞株HN5移植瘤的抗瘤效应。

西妥昔单抗对耐多西他赛肺腺癌细胞株放化疗敏感性的调变作用

目的:研究西妥昔单抗(Cetuximab,C225)对耐多西他赛(Docetaxel)肺腺癌细胞株SPC-A-1/docetaxel放化疗敏感性的调变作用。方法:克隆形成实验观察C225对SPC-A-1/docetaxel细胞株放疗敏感性的影响;MTT比色法观察C225单独应用以及不同次序联合多西他赛对SPC-A-1/docetaxel细胞株的生长抑制作用;流式细胞术检测C225对SPC-A-1/docetaxel细胞凋亡及细胞生长周期的影响。结果:C225联合放疗可以显著减少SPC-A-1/docetaxel细胞的克隆形成数目,其D_0值以及单纯放疗的D_0值分别为1.73 Gy和2.39 Gy,增敏比为1.38。C225单药即使在高达1 000μg/ml的质量浓度下作用48 h对SPC-A-1/docetaxel细胞无细胞毒和生长抑制作用;在使用多西他赛之后使用C225,多西他赛的IC_(50)值为85.2μg/ml,较单独使用多西他赛时的IC_(50)值128.7μg/ml显著降低。C225单独应用可以诱导SPC-A-1/docetaxel细胞凋亡,并具有时间效应。C225处理(24h)前后G_1期细胞比例分别为(43.80±4.46)%及(60.50±6.57)%(P<0.05)。结论:C225增加了SPC-A-1/do- cetaxel细胞株对放化疗的敏感性,其机制可能与其诱导凋亡及G_1期细胞周期阻滞有关。