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牛分枝杆菌cfp10-esat6-cfp7融合基因的原核表达及抗原反应性分析
被引量:
2
1
作者
张健宁
方诗文
+6 位作者
刘思怡
包艳红
姚宇
黄永顺
王春芳
姜秀云
马红霞
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第22期71-76,共6页
为了增强单个蛋白在牛结核病诊断中的敏感性和抗感染中的免疫原性,试验采用重叠延伸PCR将牛分枝杆菌cfp10基因与esat6基因融合,得到cfp10-esat6融合基因,再行重叠延伸PCR将cfp10-esat6融合基因与cfp7基因融合,得到融合基因cfp10-esat6-c...
为了增强单个蛋白在牛结核病诊断中的敏感性和抗感染中的免疫原性,试验采用重叠延伸PCR将牛分枝杆菌cfp10基因与esat6基因融合,得到cfp10-esat6融合基因,再行重叠延伸PCR将cfp10-esat6融合基因与cfp7基因融合,得到融合基因cfp10-esat6-cfp7,并克隆至T-Vector pMD19中,构建重组质粒pMD-cfp10-esat6-cfp7。对pMD-cfp10-esat6-cfp7和pET-28a(+)进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将纯化的cfp10-esat6-cfp7连接到pET-28a(+)中,获得表达质粒pET-cfp10-esat6-cfp7,通过IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达质粒在E.coli BL21(DE3)中的表达情况。对表达的融合蛋白进行镍柱纯化,通过Western-blot和间接ELISA分析其抗原反应性。结果表明:获得了融合基因cfp10-esat6-cfp7,表达了约36.3 ku的融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7。融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阳性血清反应的OD492值均在0.6以上,而融合蛋白CFP10-ESAT6与阳性血清反应的OD492值在0.1~0.3之间;融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阴性血清的OD492值也明显高于CFP10-ESAT6,其与牛结核阳性血清呈现良好的反应性。说明CFP10-ESAT6-CFP7融合蛋白具有作为牛结核病诊断抗原用于新型疫苗研究的潜在价值。
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关键词
牛分枝杆菌
cfp10基因
esat6基因
cfp7
基因
融合基因
原核表达
原文传递
题名
牛分枝杆菌cfp10-esat6-cfp7融合基因的原核表达及抗原反应性分析
被引量:
2
1
作者
张健宁
方诗文
刘思怡
包艳红
姚宇
黄永顺
王春芳
姜秀云
马红霞
机构
吉林农业大学生命科学学院
吉林农业大学动物科技学院
长春科技学院
吉林省新兽药研发与创制重点实验室
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第22期71-76,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31572555)
吉林省科技发展计划项目(20170101025JC)
吉林省教育厅科学技术研究项目(201441,JJKH20170315KJ)。
文摘
为了增强单个蛋白在牛结核病诊断中的敏感性和抗感染中的免疫原性,试验采用重叠延伸PCR将牛分枝杆菌cfp10基因与esat6基因融合,得到cfp10-esat6融合基因,再行重叠延伸PCR将cfp10-esat6融合基因与cfp7基因融合,得到融合基因cfp10-esat6-cfp7,并克隆至T-Vector pMD19中,构建重组质粒pMD-cfp10-esat6-cfp7。对pMD-cfp10-esat6-cfp7和pET-28a(+)进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将纯化的cfp10-esat6-cfp7连接到pET-28a(+)中,获得表达质粒pET-cfp10-esat6-cfp7,通过IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达质粒在E.coli BL21(DE3)中的表达情况。对表达的融合蛋白进行镍柱纯化,通过Western-blot和间接ELISA分析其抗原反应性。结果表明:获得了融合基因cfp10-esat6-cfp7,表达了约36.3 ku的融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7。融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阳性血清反应的OD492值均在0.6以上,而融合蛋白CFP10-ESAT6与阳性血清反应的OD492值在0.1~0.3之间;融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阴性血清的OD492值也明显高于CFP10-ESAT6,其与牛结核阳性血清呈现良好的反应性。说明CFP10-ESAT6-CFP7融合蛋白具有作为牛结核病诊断抗原用于新型疫苗研究的潜在价值。
关键词
牛分枝杆菌
cfp10基因
esat6基因
cfp7
基因
融合基因
原核表达
Keywords
Mycobacterium bovis
cfp10
gene
esat6
gene
cfp7 gene
fusion
gene
prokaryotic expression
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛分枝杆菌cfp10-esat6-cfp7融合基因的原核表达及抗原反应性分析
张健宁
方诗文
刘思怡
包艳红
姚宇
黄永顺
王春芳
姜秀云
马红霞
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
2
原文传递
已选择
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参考文献
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