微量DNA提取工作站与Chelex-100法提取指纹脱落细胞DNA效果比较

比较Chelex-100法或自动化工作站提取法对脱落细胞提取DNA的效果。方法 选取3名志愿者制作脱落细胞,用两步擦拭法分别提取脱落细胞检材,使用博坤24道全自动DNA提取工作站和Chelex-100方法分别提取模板DNA,用VeriFilerTM Plus试剂盒进行PCR扩增,扩增产物应用3500型全自动荧光分析仪进行检测、分析,并对分析结果进行比较。结果 两种方法提取的DNA模板经过分型分析,均出现了不同程度的丢峰现象,Chelex-100法的STR基因座检出数平均数为15.3,博坤24道全自动DNA提取工作站检出的STR基因座平均数为19.5。结论 本实验中博坤24道全自动DNA提取工作站提取的脱落细胞DNA检出率高于Chelex-100法。

改良Chelex-100法和CTAB法用于转基因抗草甘膦大豆检测效果的比较

以转基因抗草甘膦大豆为研究材料,分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取基因组DNA,以提取DNA的浓度和纯度,同时以PCR扩增大豆的内源基因(lectin)及外源特异性序列(CaMV35S,nos,Cp4-epsps)的效果对两种方法进行比较和评价。结果表明:虽然改良Chelex-100法DNA提取纯度不高,但是提取效率与常规CTAB法相当,而且改良Chelex-100法能够快速在1 h之内从大豆中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰。因此,改良Chelex-100法可以替代CTAB法提取DNA用于转基因检测,该方法具有经济、简便、快速的特点。

改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。

Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA进行基因型分析的研究

目的 :探讨采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子提取DNA这一方法的有效性和可靠性。 方法 :用棉签刮取 130例个体口腔颊粘膜脱落细胞 ,采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子中提取DNA ,采用SSP PCR及PCR PFLP法对其进行检测 ,观察结果的有效性和可靠性。 结果 :所有样本中都获得成功。电泳结果显示 ,PCR扩增及酶切的靶带清晰 ,无非特异性杂带 ,扩增结果重复性好。 结论 :采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子提取DNA ,方法稳定可靠 ,可以用于基因型检测。

Chelex-100法提取甘薯小象甲DNA及云南地区甘薯小象甲的分子鉴定

甘薯小象甲是国内外重要的检疫性害虫,除本身为害薯块外,引起的伤口还会诱致病菌侵入,使受害薯块发生恶臭和苦味无法食用。准确鉴定云南地区的甘薯小象甲,特别是研究其遗传变异可为检疫提供依据。本研究采集了云南元谋县甘薯小象甲,采用Chelex-100法快速提取甘薯小象甲基因组DNA,分别对雌雄成虫rDNA ITS-1序列进行系统发育分析,首次发现云南元谋县的甘薯小象甲属于东亚分支的东南亚亚支,与我国之前报道的甘薯小象甲属于东亚分支的东北亚亚支不同,说明云南元谋县的甘薯小象甲种群来源与中国广东、福建、浙江和重庆的种群来源不同。

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子(头套)中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。

Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较

目的 -比较Chelex 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法 -分别用Chelex - 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA ,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果 -两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论 -两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex 10 0方法简便、省时 。

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法(M48)和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。

Chelex-100法联合磁珠法检测泥土精斑DNA1例

1案例 某日,某女在一偏僻河道的绿化带内被强奸、抢劫。提取受害人的阴道擦拭物和内裤,PSA试剂条检验,均为阴性,镜检未检出精子。勘验人员遂对现场进行复勘,在现场提取到5.1cm×4.6cm的泥土1块。

一种改进的Chelex-100法提取单头螨DNA

提供了一种改进的Chelex-100法从单头螨中提取DNA,通过充分研磨以及反复冻融从单头螨得到的DNA可直接用于PCR。实验结果表明:与酚-氯仿法相比,此方法提取单头螨的DNA效果理想,操作简单,稳定性好;以3种不同类群螨为验证样,表明Chelex-100法可广泛用于各种螨的单头螨DNA提取;对于70%的酒精和奥氏螨保存液分别保存的个体,以及永久玻片标本,运用此方法均可提取出DNA,其中酒精保存标本提取效果最好;所提取的DNA在-20℃条件下可做长期保存。实验证明,改进的Chelex-100法是一种获取螨类等微小动物基因的较好方法。

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.

Chelex-100法和碱性裂解法提取细菌DNA的比较

目的:通过对两种DNA提取方法的比较,寻找一种灵敏、快速、经济实用的提取方法。方法:采用Chelex-100法和碱性裂解法分别提取不同浓度大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923的DNA,利用通用引物扩增16SrDNA片段检测两种方法的灵敏度。结果:碱性裂解法提取的不同浓度的两种细菌DNA,经PCR扩增均未显出目的条带;Chelex-100法提取不同浓度的两种细菌DNA均扩增出目的条带,PCR检测大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的灵敏度均为1.2×101cfu/ml,电泳结果提示相同浓度的大肠杆菌被提取到的DNA含量比金黄色葡萄球菌的含量高。结论:Chelex-100法操作简便,可用于细菌DNA的快速提取。

Chelex-100法和QIAcube纯化法在接触性检材检验中的比较

在法医DNA检验中，能否提取到足够浓度与纯度的DNA模板，是决定DNA检验成败的关键之一。本研究分别采用Chelex-100法与QIAamp DNA Investiga-tor试剂盒结合QIAcube核酸自动化提取仪（QIAcube纯化法）提取实际检案中的 DNA ，同等条件下进行PCR扩增与电泳，比较分析二者的图谱，报道如下。

Chelex-100法快速提取石蜡组织中EB病毒基因组DNA

目的:以鼻咽癌石蜡组织为材料,用Chelex-100法提取鼻咽癌组织中EB病毒基因组DNA,并以此为模板扩增出EBNA-3C片段,以建立快速提取石蜡组织中EB病毒基因组DNA的方法。方法:应用原位杂交方法检测30例鼻咽癌石蜡切片组织中EB病毒编码的小RNA(EBER)的情况,应用Chelex-100法快速提取鼻咽癌组织中EB病毒基因组DNA,并以此为模板用PCR扩增出EBNA-3C片段。结果:(1)30例鼻咽癌石蜡组织中原位杂交检测EBER全为阳性。(2)用Chelex-100法从30例鼻咽癌石蜡组织中提取了EB病毒基因组DNA并成功扩增出EBNA-3C片段。结论:Chelex-100法是快速提取鼻咽癌石蜡组织中EB病毒基因组DNA的高效方法。

Chelex-100法提取滤纸血痕DNA影响因素的比较

目的改进滤纸血痕DNA提取方法,建立更简便、廉价,适合当前DNA建库需要的提取方法。方法将752份滤纸血痕分成四组,分别按照四种不同的Chelex-100法进行DNA提取并进行比较研究;63份新鲜血痕分别按照两种方法提取并进行对比研究。结果对于陈旧滤纸血痕,四种提取方法的检测成功率无显著差异(P>0.05);对于新鲜血痕,两种提取方法的检测成功率有显著差异(P<0.05)。结论对于建库陈旧滤纸血痕样本的DNA提取可采用不加纯水处理,直接加入Chelex-100的方法进行。

自动化Chelex-100法在接触性检材DNA提取中的应用研究

目的使用Chelex-100方法在核酸载体分离板(96孔)上对接触性生物检材DNA进行载体分离和纯化,并将其与TECAN Freedom EVO150-8自动化工作站进行结合,建立起一种自动化、快速、灵敏、高效的DNA提取方法并探讨其在法医学中的应用价值。方法在核酸载体分离板(96孔)上使用Chelex-100液裂解DNA,通过高速离心实现批量生物检材载体与DNA分离;通过编写EVO150-8自动化工作站应用程序实现批量生物检材的快速提取、PCR构建一体化过程;采用。Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增,扩增产物经3500 xL遗传分析仪电泳,GeneMapperID-X软件分析检测结果。结果在994份生物检材中,成功获得456份检材STR分型,平均检验成功率在45.88%;对92份生物检材DNA提取及PCR构建,仅耗时60 min。结论本研究应用核酸载体分离板(96孔),建立的自动化Chelex-100法快速、高效、灵敏,适用于批量接触性检材的DNA检测。

Chelex-100法快速提取白粉菌基因组DNA及ITS2序列的克隆

[目的]建立快速提取及克隆白粉病菌基因组DNA的方法。[方法]以豌豆白粉菌分生孢子为材料,用Chlex-100法快速提取白粉菌基因组DNA,并以此为模板对内转录间隔区Ⅱ(ITS2)序列进行了巢式PCR扩增、克隆、测序及分析。[结果]Chlex-100法可高效的提取白粉病菌基因组DNA,适用于PCR扩增及相关分析。[结论]为快速有效地对白粉病资源进行大规模分子分类鉴定奠定了基础。

Chelex-100法快速提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA

目的探索一种快速、高效提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA的方法。方法采用Chelex-100法提取14株革兰氏阳性杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增16SrRNA基因及4个单拷贝管家基因以评价提取核酸的质量。结果 Chelex-100法能够在20min内从革兰氏阳性杆菌中提取出基因组DNA,所提取的DNA可直接用于PCR扩增。所有菌株的16SrRNA基因及棒状乳杆菌的4个单拷贝管家基因均扩增成功,PCR产物经电泳检测目的条带清晰特异,与预期目的片段长度相符。结论 Chelex-100法具有快速、高效、安全、经济的特点,采用这种方法提取的革兰氏阳性杆菌的基因组DNA可直接作为PCR扩增的模板。