血管内皮抑素对化疗期间再增殖小鼠H22肿瘤缺氧诱导因子1α和基质细胞衍生因子1及其CXC类趋化因子受体4表达的影响

目的 观察化疗期间再增殖小鼠H22肿瘤缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和基质细胞衍生因子1（SDF-1）及其CXC类趋化因子受体（CXCR）4表达的变化及血管内皮抑素对其表达的影响,探讨肿瘤组织再增殖期间新生血管生成的机制.方法 将成瘤小鼠完全随机分成对照组、化疗组、血管内皮抑素组和联合组,每组10只.对照组仅给予0.9％氯化钠注射液1ml/只腹腔注射;化疗组予顺铂腹腔注射,注射剂量为8 mg;血管内皮抑素组采用右腋皮下注射血管内皮抑素150 μg;联合组血管内皮抑素和顺铂,用法分别同血管内皮抑素组与化疗组.4组注射时间均为第2天起隔日用药1次,连续28 d.观察其生存期和体内抑瘤作用;并用噻唑蓝（MTT法）（血管内皮抑素浓度50、100、150 μg/ml）和流式细胞仪对血管内皮抑素作用的H22肝癌细胞生长和凋亡进行观察和检测;蛋白质印迹法检测化疗期间不同时间点肿瘤组织HIF-1α、SDF-1和CXCR4的表达,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl和Bax表达,以及相关信号通路蛋白总JNK、磷酸化JNK水平;酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）的含量.结果 血管内皮抑素能延长荷瘤小鼠的生存期,与对照组比较,差异有统计学意义[（27.6±2.6）d比（16.6±1.6）d,P＜0.05],并且其对体外培养的H22细胞有直接杀伤作用,抑瘤率出现对浓度和时间的依赖性.血管内皮抑素可以抑制坏死区域肿瘤细胞HIF-1α、SDF-1的表达;肿瘤组织CXCR4表达无明显改变.血管内皮抑素促进细胞凋亡,抗凋亡分子Bcl-2,Bcl-xl表达明显下调;ELISA检测结果显示血管内皮抑素能明显抑制VEGF的表达,与对照组比较,差异有统计学意义[14 d：（217±25）比（258±27）;21 d：（236±29）比（389±57）,P＜0.05].血管内皮抑素组JNK信号通路明显活化.结论 肿瘤组织在化疗期间可产生HIF-1α,HIF-1α诱导间质组织分泌SDF-1,HIF-1 α和SDF-1促进VEGF的表达上调,从而诱发肿瘤内新生血管的生成.血管内皮抑素有效抑制肿瘤细胞在化疗期间的HIF-1α和SDF-1表达及肿瘤血管生成.

LncRNA Xist通过调控SDF-1/CXCR4轴促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖与迁移

[目的]探讨lncRNAXist在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和迁移中的作用及其可能机制。[方法]取3周龄的雌性SD大鼠的股骨和胫骨,分离BMSC细胞,体外培养并鉴定。设计并筛选对lncRNAXist沉默效率高的siRNA;利用Lipo2000分别将si-Xist和si-NC转染入实验组(si-Xist组)和对照组(si-NC组)BMSC中。CCK-8实验检测各组BMSC增殖能力。划痕及Transwell迁移实验检测各组BMSC横向和纵向迁移能力。qPCR验证lncRNAXist的沉默效率及检测各组BMSC中SDF-1和CXCR4mRNA水平的相对表达量;westernblot检测各组BMSC中CXCR4蛋白水平的相对表达量。[结果]B MSC第3代细胞呈梭状、漩涡状生长,流式细胞术示CD11b(-)、CD34(-)、CD45(-)、CD44(+)、CD90(+)、CD105(+)。使用siRNA干扰BMSC中lncRNAXist的表达,三条siRNA沉默效率分别为67.92%、68.72%、98.32%。CCK-8实验证明,12h时两组间OD450差异无统计学意义(P>0.05),而在24h和48h时,si-Xist组OD450均低于si-NC组(P<0.001、P<0.01)。划痕实验显示,si-Xist组伤口愈合百分比低于si-NC组(P<0.05);Transwell迁移实验显示,si-Xist组6h迁移细胞数低于si-NC组(P<0.001)。qPCR实验证明,在mRNA水平,si-Xist组CXCR4相对表达量低于si-NC组(P<0.05),而SDF-1在两组间差异无统计学意义(P>0.05);Westernblot实验证实,在蛋白水平,si-Xist组CXCR4相对表达量低于si-NC组(P<0.05)。[结论]L ncRNAXist通过调控CXCR4的表达,提高大鼠BMSC的增殖、迁移能力。

CXCR4和CXCR7在甲状腺癌中的表达及病理意义

研究甲状腺癌组织中趋化因子4受体(CXCR4)和趋化因子7受体(CXCR7)的表达情况及临床病理意义。应用免疫组织化学PV-6000法及Western blot法检测CXCR4与CXCR7在甲状腺癌中的表达。二者在甲状腺癌与甲状腺良性疾病组织的差异均具有统计学意义(P<0.05),在甲状腺癌中表达仅与淋巴结转移有关(P<0.05),CXCR4与CXCR7之间呈正相关。Western blot结果提示二者在甲状腺癌中的表达率高于癌旁及甲状腺腺瘤。CXCR4和CXCR7的表达水平与淋巴结转移相关,可作为甲状腺癌预后的判断指标。

HPV介导DNA甲基化对口咽癌患者预后的影响

目的利用生物信息学方法探讨HPV在口咽癌发生发展中的作用及其机制。方法将甲基化微阵列数据及转录组数据结合患者临床信息联合分析,解析口咽癌中HPV诱导的甲基化驱动基因及其生物学功能。结果富集分析显示HPV^(+)口咽癌患者的免疫活动明显激活,抗肿瘤T细胞免疫功能尤为活跃,这可能为HPV^(+)口咽癌患者更好的临床预后提供了一个合理的解释;CCR7和CXCR3可能是具有重大预后价值的HPV相关甲基化驱动基因。结论本研究揭示了HPV诱导的新型抗肿瘤免疫机制,为HPV^(+)与HPV^(-)口咽癌患者的预后差异提供了可能的依据,并提出HPV相关甲基化驱动基因可能是预测口咽癌患者临床预后的有效指标。

α亚族趋化因子受体3在人舌鳞癌细胞株的表达及其配体干扰素诱导蛋白-10对CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α亚族趋化因子受体3(CXC-chemokine receptor 3,CXCR3)在不同人舌鳞癌细胞株的表达以及其配体干扰素诱导蛋白-10(interferon induced protein 10,IP-10)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)IP-10的相应受体CXCR3的表达进行检测。CAL-27细胞被分为3个实验组和1个对照组,3个实验组根据IP-10的刺激浓度,分为10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组,对照组不予刺激。12 h、24 h、48 h时检测4组细胞的增殖;24 h时用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CXCR3在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色。和对照组相比,12 h、24 h时,3种浓度的IP-10均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);在48 h时,只有40 ng/mL的IP-10能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),10 ng/mL、20 ng/mL的IP-10对CAL-27细胞的增殖无促进作用(P>0.05)。在24 h时,对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组和40 ng/mL组的细胞凋亡率分别为(0.053 3±0.472 6)%、(3.236 7±0.940 0)%、(4.516 7±1.115 4)%和(3.363 3±0.571 2)%,3种浓度IP-10均能够促进CAL-27细胞的凋亡(P<0.05),但3个实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;IP-10既能促进CAL-27细胞的增殖,又能促进其凋亡。随着时间的延长,IP-10的促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由IP-10的促凋亡作用的逐步发挥所引起的。

CXC趋化因子配体12／CXC趋化因子受体4生物轴在吉西他滨影响胆管癌细胞上皮-间充质转化及侵袭转移能力中的作用

目的探讨CXC趋化因子配体12（CXCL12）／CXC趋化因子受体4（CXCR4）生物轴在吉西他滨（GEM）对胆管癌细胞上皮-间充质转化（EMT）及侵袭转移影响中的作用机制。方法利用基质细胞源性因子-1α（SDF-α，100ng／m1）激活高表达CXCR4的胆管癌细胞的CXCL12／CXCR4生物轴建立体外模型，将胆管癌RBE细胞随机分为正常对照组和吉西他滨组。应用噻唑蓝（MTT）的方法检测增殖率，应用Transwell小室观察细胞的侵袭转移。应用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot检测不同浓度GEM对CXCR4mRNA及蛋白表达的影响，应用Westernblot检测侵袭转移相关因子血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、基质金属蛋白酶（MMP）-9，以及EMT相关N-钙黏蛋白（N-cadherin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达变化。结果吉西他滨组细胞生存率分别为76．65％、71．40％、52．25％，生存率明显下降；吉西他滨组[（282．00±3．45）个／视野]细胞侵袭转移大于对照组[（168．00±2．49）个／视野]；吉西他滨组CXCR4蛋白（0．965±0.163、1．895±0．191、3．975±0．120、3．355±0．163、3．572±0．198、6．154±0．113）及mRNA（1．021±0．210、2．442±0．556、2．774±0．146、2．961±0．275、3．279±0．228、5．010±0．826）随浓度提高表达上调；吉西他滨组与对照组比较，CXCR4、VEGF-C、MMP-9（1．565±0．148比1．014±0．156、3．250±0．212比1．025±0.318、1．980±0.212比1．025±0.318）表达上调，EMT相关N-cadherin蛋白（2．102±O254比1．025±0．318）表达上调，E-eadherin蛋白（0．430±0．154比1．025±0．318）表达下调。结论吉西他滨能够显著抑制胆管癌RBE细胞的生长，促进EMT的发生，促进侵袭转移，其机制可能是通过激活CXCL12／CXCR4轴及下游相关因子实现的。