miR-124靶向调控CMTM6增强CIK对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的研究细胞因子诱导杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸(miRNA,miR)-124在此过程中的调节作用及可能机制。方法收集2017年3月~2019年10月鄂州市中心医院神经外科收治的30例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6(chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontaining family member 6,CMTM6)mRNA表达量及相关性。诱导培养CIK细胞后,分别与胶质瘤细胞C6和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor及阴性对照序列,通过CCK-8实验检测CIK细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124与CMTM6基因的靶向关系,qRT-PCR和Western blot检测胶质瘤细胞中mi R-124,CMTM6 mRNA及蛋白表达。结果与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086)显著降低,CMTM6 mRNA表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089)显著升高,差异有统计学意义(t=39.051,26.337,均P<0.001),二者呈负相关(r^(2)=0.262)。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic转染及其与CIK细胞共培养对C6(72.84%±3.81%vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18%vs 74.59%±3.47%),U87细胞(71.93%±3.94%vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24%vs 76.28%±3.64%)增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义(q=16.340,15.486,14.087,13.886,均P<0.001)。双荧光素酶报告实验显示,miR-124和CMTM6具有明显的靶向关系。Western blot结果显示,与转染阴性对照+CIK组比较miR-124 mimic与CIK细胞共培养的C6,U87细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068)显著降低,转染miR-124 inhibitor与CIK细胞共培养的C6,U87细胞CMTM6蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068)显著增加,差异均有统计学意义(q=13.817,10.839,7.327,17.558,均P<0.001)。结论CIK细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124可通过靶向抑制CMTM6增强CIK细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。

趋化素样因子超家族6和程序性死亡受体-配体1在脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

目的探讨趋化素样因子超家族6(CMTM6)、程序性死亡受体-配体1(PD-L1)与脑胶质瘤病人预后状况的关系。方法选择2016年1月至2017年1月解放军总医院三中心收治的脑胶质瘤病人95例(观察组)和颅脑外伤病人89例(对照组)。采用免疫组化法检测脑胶质瘤组织和正常脑组织的CMTM6、PD-L1蛋白表达。比较两组CMTM6、PD-L1蛋白表达的差异。采用电话、门诊结合微信随访获取术后5年生存相关数据。分析CMTM6、PD-L1与脑胶质瘤病人预后状况的关系。结果观察组CMTM6、PD-L1阳性表达率为85.11%、54.74%,明显高于对照组的26.97%、13.48%(P<0.05)。高病理级别胶质瘤组织的阳性表达率为95.24%、73.81%,明显高于低病理级别的71.70%、39.62%(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,CMTM6阳性表达组的4、5年累积总生存率较CMTM6阴性表达组的降低(P<0.05)。PD-L1阳性表达组的2、3、4、5年累积总生存率及无病生存率较PD-L1阴性表达组明显降低(P<0.05)。结论CMTM6、PD-L1与脑胶质瘤病人病理学分级具有紧密的关系,且两者阳性表达往往提示预后状况不良。

趋化素样因子超家族6在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的:探讨趋化素样因子超家族6(chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domain-containing family member 6,CMTM6)在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法:选用购自芯超公司的136例乳腺癌组织芯片,其中包括42例配对的癌及癌旁组织,用免疫组织化学染色法检测乳腺癌及癌旁组织中CMTM6的表达水平。用配对χ~2检验比较CMTM6在乳腺癌及癌旁组织中的表达差异,用χ~2检验分析乳腺癌组织中CMTM6表达水平与患者临床病理特征的关系,用Kaplan-Meier及Log rank分析CMTM6表达水平与患者生存期的关系,拟合Cox模型评价不同指标对患者预后的影响程度。结果:CMTM6在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。CMTM6的表达与乳腺癌病理分型和HER2阳性相关(P<0.05)。CMTM6高表达组患者的生存期较CMTM6低表达组显著缩短(P<0.05)。乳腺癌病理分型(HR=10.374,95%CI:3.529~30.497,P<0.01)、TNM分期(HR=4.599,95%CI:1.784~11.856,P<0.01)、三阴性乳腺癌(HR=3.370,95%CI:1.055~10.761,P<0.05)和CMTM6高表达(HR=0.195,95%CI:0.073~0.518,P<0.01)均可作为评判乳腺癌患者预后的独立危险因素。结论:CMTM6在乳腺癌组织中高表达,其可作为乳腺癌患者预后评估的危险因素。

CMTM6基因对肝内胆管癌侵袭转移的影响

目的 探讨CMTM6基因对肝内胆管癌细胞(ICC)侵袭转移的影响。方法 通过慢病毒转染构建敲低含家族成员6的趋化因子样奇迹跨膜结构域(CMTM6)基因的ICC RBE细胞(RBE-CMTM6-KD)及相应对照细胞(RBE-Con),实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot分别在RNA及蛋白层面验证两种细胞CMTM6的表达水平,平板克隆形成、Transwell、CCK-8及划痕实验分别检测两种细胞生长曲线及细胞存活状况,两种细胞构建裸鼠皮下成瘤并模拟肺转移观察CMTM6对肿瘤生长及转移能力的影响,免疫组织化学技术检测人ICC组织芯片中癌旁组织及不同分化程度ICC组织中CMTM6的表达强度,并分析CMTM6不同表达强度ICC患者的预后。结果 Western blot结果显示,RBE-CMTM6-KD中CMTM6、Snail蛋白表达水平低于RBE-Con, β-catenin表达水平高于RBE-Con(P<0.05)。qPCR结果显示,RBE-CMTM6-KD中CMTM6 mRNA表达水平低于RBE-Con(P<0.05)。与RBE-Con比较,24、48 h RBE-CMTM6-KD细胞存活率更低,增殖能力、侵袭迁移能力减弱(P<0.05)。RBE-KD-CMTM6构建的裸鼠皮下成瘤最终质量低于RBE-Con[(26.4±0.7)mg vs.(173.9±12.8)mg],差异有统计学意义(P<0.05)。第11、14、17、20天,RBE-CMTM6-KD构建的裸鼠肿瘤体积小于RBE-Con(P<0.05)。第7、14天,RBE-KD-CMTM6构建的裸鼠肺部转移瘤的转移能力低于RBE-Con(P<0.05)。CMTM6在癌旁正常胆管组织中几乎不表达,在ICC组织表达水平明显高于癌旁正常胆管组织,且在低分化ICC组织中表达水平高于高分化ICC组织。与CMTM6低表达患者比较,CMTM6高表达患者OS明显缩短(P<0.05)。结论 成功建立了CMTM6敲低的ICC细胞模型,CMTM6能促进ICC生长并增强侵袭转移能力,CMTM6高表达水平与ICC预后呈负相关。

CMTM6在消化道肿瘤中的研究进展

CKLF样MARVEL跨膜结构域成员(CMTM)家族是一种新基因家族,CMTM6是其中重要一员。程序性死亡配体1(PD-L1)是一种免疫检查点抑制分子,其可参与介导肿瘤细胞的免疫逃逸。研究表明,CMTM6与PD-L1结合后,可稳定细胞表面PD-L1的表达,从而实现肿瘤细胞的免疫逃逸,提示CMTM6可能在调节肿瘤细胞免疫抑制方面起着一定的作用,继而为肿瘤的免疫治疗提供了新的思路。本篇综述对CMTM6及其在消化系统肿瘤中的研究进展进行作一介绍。