嗜线虫致病杆菌HB310几丁质酶基因chi70的克隆和表达

为了了解嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila几丁质酶的功能,本研究通过PCR技术从X.nematophila HB310菌株中克隆得到了几丁质酶基因chi70,对该基因进行了生物信息学分析。结果表明该基因全长1947 bp,编码648个氨基酸,表达的Chi70蛋白不含信号肽。将chi70基因进行原核表达,获得大量重组Chi70蛋白。采用二硝基水杨酸法(DNS法)测定重组蛋白酶活,结果表明几丁质酶Chi70在pH7.0时活性最高,为8.815 U/mL。采用生测方法测定Chi70对苏云金芽孢杆菌HD-73(Bt HD-73)的增效活性,结果表明单独使用Bt HD-73时对2龄棉铃虫幼虫的LC50为14.80μg/m L,添加Chi70后的Bt HD-73对2龄棉铃虫幼虫的LC50为5.66μg/m L,实验结果说明Chi70对Bt具有明显的增效作用。