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Prokaryotic Expression and Monoclonal Antibody Preparation of Chicken Major Histocompatibility Complex Class II Molecules
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作者 YE Ping YU Wei-yi 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2010年第6期33-35,共3页
[ Objective] To prepare the monoclonal antibody against chicken major histocompatibility complex class II molecules (MHC II). [ Method ] The prokaryotic expression of the gene fragments of exons 2 -6 encoding alpha ... [ Objective] To prepare the monoclonal antibody against chicken major histocompatibility complex class II molecules (MHC II). [ Method ] The prokaryotic expression of the gene fragments of exons 2 -6 encoding alpha chain of MHC II and exons 3 -6 encoding beta chain of MHC II were performed based on its protein sequences. After BALB/c mice were immunized with the purified fusion proteins, the mouse spleen cells were fused with mouse myeloma cells SP2/0. Then the positive hybridoma cells were screened and detected by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). [ Result] One hybridoma cell strain secreting monoclonal antibody against alpha chain and two strains secreting monoclonal antibody against beta chain were obtained. These three hybridoma cell strains were named as MHC II alpha-4, MHC II betas-2 and MCH II betas-31, respectively. Their titers of ascites in indirect ELISA were 1 : 256 000, 1 : 256 000 and 1 : 1 280 000, respectively. These antibodies could specifically recog- nize MHC II alpha chain or beta chain in western blotting. [ Conclusion] Three obtained hybridoma stains can stably produce the monoclonal antibody against chicken MHC class II molecules. 展开更多
关键词 chicken mhc class II molecules Monoclonal antibody IDENTIFICATION
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淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 戴银 王承志 +6 位作者 沈学怀 赵瑞宏 胡晓苗 侯宏艳 潘孝成 周学利 张丹俊 《动物医学进展》 北大核心 2015年第2期34-38,共5页
典型的主要组织相容性复合体(MHC)是抗原递呈的关键分子,具有重要的免疫功能,与多种疾病密切相关。为深入了解地方品种鸡MHCⅠ类α分子的特征,尤其是抗原结合区域的特点,通过RT-PCR技术获得了29个淮南麻黄鸡完整的α链基因,并进行了... 典型的主要组织相容性复合体(MHC)是抗原递呈的关键分子,具有重要的免疫功能,与多种疾病密切相关。为深入了解地方品种鸡MHCⅠ类α分子的特征,尤其是抗原结合区域的特点,通过RT-PCR技术获得了29个淮南麻黄鸡完整的α链基因,并进行了分析。结果显示,淮南麻黄鸡MHCⅠα分子高度多态,但主要集中在α1和α2区域,该区变异氨基酸位点共68个,其中高度变异22个。淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域氨基酸序列同源性介于79.3%-99.5%之间,仅少部分序列完全一致。鸡氨基酸序列同源性与鸭较高,介于57.6%-64.1%之间;其次为人和鼠。进化分析显示,淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域分属于两个类群,但未显示明显的品种差异。此外,鸡与鸭的亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。研究结果表明,淮南麻黄鸡MHC分子在进化过程中呈现高度的多态性,但受到病原体的选择压力,多态性主要位于抗原肽结合部分的α1和α2区域。 展开更多
关键词 mhc类分子 序列分析 淮南麻黄鸡
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鸡MHCⅠα和β2m的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 戴银 王承志 +4 位作者 刘生杰 沈学怀 赵瑞宏 胡晓苗 张丹俊 《动物医学进展》 北大核心 2016年第5期38-42,共5页
为制备MHCⅠ基因工程疫苗的基础材料,构建了鸡MHCⅠ分子重组质粒并进行原核表达,进而制备鸡MHCⅠ分子的多克隆抗体。应用PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m基因,构建重组载体pETMHCⅠα和pET-MHCⅠβ2m,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将重组质... 为制备MHCⅠ基因工程疫苗的基础材料,构建了鸡MHCⅠ分子重组质粒并进行原核表达,进而制备鸡MHCⅠ分子的多克隆抗体。应用PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m基因,构建重组载体pETMHCⅠα和pET-MHCⅠβ2m,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将重组质粒在大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达,融合蛋白纯化后,接种昆明小鼠制备多克隆抗体,血清稀释后用免疫印迹法(Western blot)分析。结果表明,鸡MHCⅠα和β2m基因在大肠埃希菌中成功表达,融合蛋白分子质量分别约为52.1ku和33.0ku;制备的鼠抗鸡MHCⅠα和β2m链多克隆抗体,经Western blot检测证实抗体特异性较强,可进一步用于鸡MHCⅠ分子的研究。 展开更多
关键词 mhcI类分子 原核表达 多克隆抗体
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携带非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高 被引量:1
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作者 周智锋 王玲 +4 位作者 林万松 陈淑萍 李洁羽 叶韵斌 郑庆丰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期639-644,共6页
目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管... 目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1+NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(no A5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(no A5.1)组,观察各组患者临床疗效。构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体p TE-1A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测p TE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染p TE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染p TE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量。结果:经过3年的随防,A5.1+NK组患者中位总生存期(medium overall survival,m OS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组为22.4个月,no A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.05)。经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P>0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.01)。转染p TE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3)vs(45.3±11.5)pg/ml,P<0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)%vs(42.5±7.1)%,P<0.05]。结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非A5.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关。 展开更多
关键词 食管癌 A5.1型mhc-类相关分子A MICA等位基因 免疫治疗
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卵巢癌细胞MHC-Ⅰ类抗原表达与肿瘤微环境免疫细胞分布关系 被引量:4
5
作者 朱芝玲 黄敏丽 李大金 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第3期201-203,207,F003,共5页
目的 探讨卵巢癌细胞MHC Ⅰ类分子表达与肿瘤微环境免疫活性细胞分布的关系 ,了解机体肿瘤微环境免疫功能状态。方法 用流式细胞仪检测卵巢癌细胞MHC Ⅰ类分子表达 ,同时用免疫组化方法检测肿瘤微环境中LCA+ 、CD3 + 细胞分布情况。... 目的 探讨卵巢癌细胞MHC Ⅰ类分子表达与肿瘤微环境免疫活性细胞分布的关系 ,了解机体肿瘤微环境免疫功能状态。方法 用流式细胞仪检测卵巢癌细胞MHC Ⅰ类分子表达 ,同时用免疫组化方法检测肿瘤微环境中LCA+ 、CD3 + 细胞分布情况。结果 卵巢癌细胞MHC Ⅰ类分子表达存在不同程度的下降或缺如 ,且与肿瘤微环境中LCA+ 、CD3 + 细胞分布呈正相关 ,前者r=0 .846 ,P =0 .0 0 0 1,后者r =0 .738,P =0 .0 0 0 1。结论 上皮性卵巢癌细胞MHC Ⅰ类抗原分子的表达影响肿瘤微环境中浸润免疫细胞数 ,进而影响肿瘤微环境免疫监视能力。检测MHC Ⅰ类分子表达可为肿瘤浸润淋巴细胞临床过继治疗选择合适病例提供实验依据。 展开更多
关键词 mhc-类分子 卵巢癌 肿瘤浸润 微环境免疫细胞
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白来航鸡MHC-Ⅰ重链基因克隆与序列分析
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作者 宋亚鹏 李新生 +5 位作者 崔保安 陈红英 魏战勇 孙凯 张蕾 阮武营 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期268-272,共5页
参照GenBank发表的鸡MHC-Ⅰ重链(BF2)基因序列,设计并合成1对引物,无菌采取纯系来航SPF鸡抗凝静脉血,直接提取总RNA,采用RT-PCR技术,PCR扩增BF2基因,并进行克隆和序列测定。测序结果表明,获得了来航鸡BF2基因,其大小为1 035 bp,包含... 参照GenBank发表的鸡MHC-Ⅰ重链(BF2)基因序列,设计并合成1对引物,无菌采取纯系来航SPF鸡抗凝静脉血,直接提取总RNA,采用RT-PCR技术,PCR扩增BF2基因,并进行克隆和序列测定。测序结果表明,获得了来航鸡BF2基因,其大小为1 035 bp,包含一个完整阅读框,共编码345个氨基酸。与GenBank上鸡BF2基因序列进行比较,其核苷酸同源性在93.0%~97.6%之间,氨基酸同源性在83.2%~97.1%之间。来航鸡与人和其他种动物的MHC-Ⅰ重链基因核苷酸同源性在12.9%~83.6%之间。 展开更多
关键词 白来航鸡 mhc-重链 克隆 序列分析
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鸡MHCⅠ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达
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作者 戴银 单文杰 +6 位作者 胡晓苗 赵瑞宏 侯宏艳 沈学怀 潘孝成 周学利 张丹俊 《安徽农业科学》 CAS 2017年第1期139-142,共4页
[目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHCⅠ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHCⅠ分子单链三聚体。[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(... [目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHCⅠ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHCⅠ分子单链三聚体。[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(aa346-353)与鸡MHCⅠ(B-F)分子二聚体的编码基因共价串联,构建带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体p EGFP-HN_(346-353)-B-Fβ2m-α。[结果]转染真核细胞293T后,荧光显微镜观察可见,重组融合蛋白HN_(346-353)-B-Fβ2m-α分子三聚体主要表达定位于真核细胞的内膜系统。Western Blot结果表明,在预期蛋白分子量大小位置有明显的特异反应带,重组蛋白与其相应抗体可发生特异性结合反应。[结论]重组质粒能够在真核细胞中表达,且融合蛋白具有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 mhc B-F分子 单链三聚体 真核表达
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人食管癌TE-1细胞MHC-Ⅰ相关抗原肽的初步研究
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作者 李纪明 祁元明 +2 位作者 杨莹 常爱武 王桂叶 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期478-481,共4页
目的寻找TE1细胞MHCⅠ类分子提呈的抗原肽。方法用弱酸洗涤法获得TE1细胞表面与MHCⅠ类分子结合的抗原肽,经SepPakC18柱、Centrion3超滤器和RPHPLC去盐纯化后,用负载该抗原肽的树突状细胞刺激生成肿瘤特异性杀伤细胞,以Cr51释放法测定CT... 目的寻找TE1细胞MHCⅠ类分子提呈的抗原肽。方法用弱酸洗涤法获得TE1细胞表面与MHCⅠ类分子结合的抗原肽,经SepPakC18柱、Centrion3超滤器和RPHPLC去盐纯化后,用负载该抗原肽的树突状细胞刺激生成肿瘤特异性杀伤细胞,以Cr51释放法测定CTL的杀伤活性。结果高效液相色谱图显示多个峰;负载抗原肽DC刺激的CTL比未负载抗原肽DC刺激的CTL对TE1细胞杀伤率高,两者差异有统计学意义;负载抗原肽DC刺激的CTL对与抗原肽孵育的T2细胞比对未经与抗原肽孵育的T2细胞杀伤率高,两者差异有统计学意义。结论弱酸洗涤法可从TE1细胞上获得有效的抗原肽;混合抗原肽中有可与HLAA2分子结合并能激发CTL的抗原肽。 展开更多
关键词 食管肿瘤 抗原肽 HLA-A2 高效液相色谱仪 mhc-类分子
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MHC Ⅰ类分子胞内组装、转运及其调控机制的研究进展
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作者 林凯龙 邹丽云 万瑛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期906-909,共4页
MHC Ⅰ类分子是启动机体免疫应答的重要分子。当细胞遭受病毒感染或本身发生癌变,MHCⅠ类分子能结合病毒或癌变细胞蛋白降解形成的多肽,向CD8+T细胞报告病毒或者肿瘤的存在,从而促使其对异常细胞的杀伤。在此过程中,MHCⅠ类分子的胞内... MHC Ⅰ类分子是启动机体免疫应答的重要分子。当细胞遭受病毒感染或本身发生癌变,MHCⅠ类分子能结合病毒或癌变细胞蛋白降解形成的多肽,向CD8+T细胞报告病毒或者肿瘤的存在,从而促使其对异常细胞的杀伤。在此过程中,MHCⅠ类分子的胞内转运途径精密调控着免疫应答的效率,但目前对MHCⅠ类分子在胞内转运途径的机制了解不多。本综述就MHCⅠ类分子在内质网的组装、外运以及内吞后降解或再循环过程中的主要机制做一阐述,并且介绍一些新发现的相关调控分子。 展开更多
关键词 mhc 类分子 组装 顺式转运 内吞 再循环
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鸡主要组织相容性复合体Ⅰβ微球蛋白(β2m)基因的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 戴银 张丹俊 +5 位作者 胡晓苗 赵瑞宏 侯宏艳 潘孝成 周学利 沈学怀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期28-32,共5页
为深入了解鸡主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex classⅠ,MHCⅠ)β微球蛋白(β2m)分子的特征,研究β2m的免疫作用机理,试验通过RT-PCR技术获得了15条3个地方品种鸡完整的典型的MHCⅠβ2 m基因,将该序列与Gen... 为深入了解鸡主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex classⅠ,MHCⅠ)β微球蛋白(β2m)分子的特征,研究β2m的免疫作用机理,试验通过RT-PCR技术获得了15条3个地方品种鸡完整的典型的MHCⅠβ2 m基因,将该序列与GenBank数据库中登录的鸭、人、鼠、鱼、猴、马和猪7个不同物种的MHCⅠβ2m分子序列进行了比对分析。结果显示,15条鸡β2m氨基酸序列同源性在98.0%~100%之间,大部分序列完全一致。鸡β2m氨基酸序列与鸭同源性最高,为60.6%;最低的则是来源于草鱼的β2m氨基酸序列,仅为33.3%。遗传进化分析进一步证实鸡与鸭的MHCⅠβ2m亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现鸡β2 m基因高度保守,仅个别碱基发生突变。其成熟肽序列的第24和79位为半胱氨酸,在所比对的动物中均未发生突变;同时在成熟肽的第77~83位之间存在免疫球蛋白超基因家族的特征基序"YXCXVXH"。研究结果表明,鸡与其他物种的MHCⅠβ2m分子具有相同的免疫功能基本单位,同时又具备独特的结构特点。 展开更多
关键词 鸡主要组织相容性复合体 β微球蛋白基因 序列分析
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中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞免疫信号分子表达的影响 被引量:3
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作者 马昭 商云霞 +4 位作者 陈洁 刘晓婷 梁小瑞 朱晓庆 谷新利 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第8期2312-2319,共8页
试验旨在探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡免疫调节作用的影响。采用PCR-SSCP方法对500只试验鸡进行MHC B-LβⅡ基因分型,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为200、100、75、50、25、0μg/mL的中... 试验旨在探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡免疫调节作用的影响。采用PCR-SSCP方法对500只试验鸡进行MHC B-LβⅡ基因分型,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为200、100、75、50、25、0μg/mL的中药复方多糖共培养24h,收集细胞,采用ELISA方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养液中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、钙离子(Ca^(2+))、一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著提高不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、cGMP、Ca^(2+)、NO和iNOS的含量(P<0.05)。中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、Ca^(2+)、NO和iNOS的含量最高,BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP的含量最高;中药复方多糖剂量为75μg/mL时,AA基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP的含量最高;中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、cGMP、Ca^(2+)、NO和iNOS的含量最高。本试验结果表明,中药复方多糖能不同程度地提高各MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP、cAMP、NO、Ca^(2+)和iNOS的含量,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。 展开更多
关键词 中药复方多糖 mhc B-LβⅡ基因 鸡淋巴细胞 免疫信号分子
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鸡MHC Ⅱ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
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作者 叶平 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15668-15669,共2页
[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2~6外显子和β链基因第3~6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆... [目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2~6外显子和β链基因第3~6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆和间接ELISA筛选阳性细胞株。[结果]共得到1株分泌鸡MHCⅡα链抗体和2株MHCⅡβ链抗体的杂交瘤细胞,分别命名为MHCⅡα-4、Ⅱβ6-2和Ⅱβ6-31,其腹水效价分别为1∶256000、1∶256000和1∶1280000。Western blotting分析表明其特异性强,能与相应蛋白结合。[结论]成功获得了3株稳定分泌抗鸡MHCⅡ类分子抗体的杂交瘤细胞。 展开更多
关键词 mhcⅡ类分子 单克隆抗体 鉴定
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垂体腺瘤组织中NF-κB、MMP-9、MICA的表达变化及意义 被引量:9
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作者 陈正 常映薇 +3 位作者 李珍珠 孙其凯 王清波 李泽福 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第3期1-4,共4页
目的观察垂体腺瘤组织中NF-κB、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MHC-Ⅰ类链分子相关抗原A(MICA)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法对垂体腺瘤组织和正常脑组织中的NF-κB蛋白、MMP-9蛋白及MICA蛋白进行检测;采用qRT-PCR法对垂体... 目的观察垂体腺瘤组织中NF-κB、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MHC-Ⅰ类链分子相关抗原A(MICA)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法对垂体腺瘤组织和正常脑组织中的NF-κB蛋白、MMP-9蛋白及MICA蛋白进行检测;采用qRT-PCR法对垂体腺瘤组织及正常脑组织中的NF-κB mRNA、MMP-9 mRNA、MICA mRNA进行检测。结果垂体腺瘤与正常脑组织中NF-κB蛋白阳性表达率分别为100%(40/40)、30%(6/20),MMP-9蛋白阳性表达率分别为100%(40/40)、15%(3/20),MICA蛋白阳性表达率分别为100%(40/40)、0;两组比较,P均<0.01。垂体腺瘤与正常脑组织中NF-κB mRNA相对表达量分别为13.045±6.200、2.040±2.067,MMP-9 mRNA相对表达量分别为28.770±7.661、2.369±1.460,MICA mRNA相对表达量分别为231.817±41.046、5.062±3.849;两组比较,P均<0.05。NF-κB蛋白与MICA蛋白、MMP-9蛋白表达均呈正相关(r分别为0.368、0.345,P均<0.05)。结论 NF-κB、MMP-9及MICA在垂体腺瘤组织中高表达,NF-κB可能通过促进MMP-9及MICA表达而促进垂体腺瘤发生、发展。 展开更多
关键词 垂体瘤 mhc-类链分子相关抗原A 基质金属蛋白酶9 核转录因子-ΚB
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癌胚抗原低亲和力表位改造中的分子对接 被引量:2
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作者 支轶 吴玉章 +3 位作者 万瑛 邹丽云 郭晟 刘娜 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期514-517,共4页
目的通过分子对接方法筛选表位改造后的高亲和力CTL表位。方法在图形工作站上,将癌胚抗原来源的低亲和力表位及其N末端第一位残基以酪氨酸替换后的突变体,分别与MHCⅠ类分子进行对接,对接所得最佳构象进行600ps分子动力学模拟修正。结... 目的通过分子对接方法筛选表位改造后的高亲和力CTL表位。方法在图形工作站上,将癌胚抗原来源的低亲和力表位及其N末端第一位残基以酪氨酸替换后的突变体,分别与MHCⅠ类分子进行对接,对接所得最佳构象进行600ps分子动力学模拟修正。结果改造后的突变体与MHC分子间存在较强的氢键和疏水相互作用,组成肽结合槽口袋A的残基Tyr7、Tyr171和Tyr159与多肽N末端形成稳定的氢键作用网络,并且P1位酪氨酸上的苯环可与Trp167上的苯环发生ππ堆积作用。结论分子对接模型预测的肽MHC复合物作用模式,提示改造后的突变体与MHCⅠ类分子间具有更高的亲和力,与实验结果一致。 展开更多
关键词 mhc类分子 CTL 表位 分子对接 分子动力学
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NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA I类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响 被引量:2
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作者 郭坤元 梅家转 +1 位作者 姚开泰 尹晓林 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第11期1005-1007,共3页
目的:探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细... 目的:探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶1混合培养24h)表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLAI类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:CNE2细胞与NK细胞持续性接触24h,CNE2细胞表面HLAI类分子表达无改变,MI-CA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降.本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点. 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 杀伤细胞 天然 HLA I类分子 mhc I类链相关分子 免疫编辑
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低亲和力CTL表位肽在治疗性肿瘤疫苗中应用的研究 被引量:1
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作者 杨曌 王莉 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第7期1007-1009,共3页
因为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)在肿瘤控制中起着重要作用,所以基于CTL表位(epitope)的治疗性肿瘤多肽疫苗已经成为当前肿瘤综合生物治疗中一个倍受瞩目的策略。传统的免疫治疗策略通常选择与MHC-Ⅰ类分子具有高... 因为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)在肿瘤控制中起着重要作用,所以基于CTL表位(epitope)的治疗性肿瘤多肽疫苗已经成为当前肿瘤综合生物治疗中一个倍受瞩目的策略。传统的免疫治疗策略通常选择与MHC-Ⅰ类分子具有高亲和力的CTL表位肽作为治疗工具,但部分高亲和力的CTL表位肽在体内往往有免疫耐受或者副反应。近来研究表明:低亲和力的CTL表位肽及其改构体能很好地克服这些问题。本文就低亲和力CTL表位肽及其改构体在肿瘤免疫治疗中的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 肿瘤疫苗 CTL表位 mhc-类分子 亲和力
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抗原处理相关转运体(TAP)的结构和功能研究进展 被引量:1
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作者 张晓娜 韩凌霞 《实验动物科学》 2014年第3期56-59,共4页
抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)转运体超家族的B亚家族,是由主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)上2个紧密连锁的基因TAP1和TAP2编码蛋白组成的异二聚体,位于内质网和顺式高尔基膜上,... 抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)转运体超家族的B亚家族,是由主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)上2个紧密连锁的基因TAP1和TAP2编码蛋白组成的异二聚体,位于内质网和顺式高尔基膜上,功能是将抗原肽从细胞质转运进入内质网池,组装到MHC I类分子上构成复合体。TAP蛋白的缺乏和突变会影响抗原肽的提呈,最终损害免疫应答功能。 展开更多
关键词 抗原处理相关转运体 抗原呈递 mhc 类分子
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肿瘤的G-CSF基因治疗及肿瘤原位细胞生物学特性
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作者 孙延平 曹雪涛 +3 位作者 王全兴 王元和 施靖华 高瀚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期123-126,共4页
目的:研究瘤体内注射脂质体包裹的G-CSF基因的抗肿瘤作用及其可能机制。方法:将脂质体包裹的G-CSF基因直接注射至小鼠结肠癌瘤体内,观察G-CSF基因治疗的抗肿瘤效果及肿瘤细胞性状的变化。结果:瘤体内注射脂质体包裹... 目的:研究瘤体内注射脂质体包裹的G-CSF基因的抗肿瘤作用及其可能机制。方法:将脂质体包裹的G-CSF基因直接注射至小鼠结肠癌瘤体内,观察G-CSF基因治疗的抗肿瘤效果及肿瘤细胞性状的变化。结果:瘤体内注射脂质体包裹的G-CSF基因后,可明显抑制结肠癌小鼠肿瘤的生长,显著延长存活期;配合大剂量化疗后效果更显著,有30%的小鼠存活90d以上。从瘤体内分离的肿瘤细胞,经G418(600μg/ml)抗性筛选后,产生抗G418的抗性克隆,并分泌人G-CSF(hG-CSF);经Northern-blot鉴定显示,该肿瘤细胞可表达G-CSFmRNA;肿瘤细胞表面表达ICAM-1分子、MHCⅠ类抗原(H-2Kd)均明显高于对照组。结论:瘤体内注射脂质体包裹的G-CSF基因后,可在肿瘤原位将G-CSF基因转染肿瘤细胞并有效表达,提高肿瘤细胞的免疫原性。 展开更多
关键词 基因治疗 结肠肿瘤 脂质体 G-CSF
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主要组织相容性复合体I类分子抗原肽
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作者 吕小文 吕飞杰 王静 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第6期633-637,共5页
被主要组织相容性复合体(MHC)I类分子呈递在细胞表面的抗原肽大部分来源于细胞内新合成蛋白质的降解产物,抗原肽直接体现细胞内功能蛋白质的部分变化,蛋白酶体、氨肽酶和抗原转运体(TAP)参与调控抗原肽的生成。在MHC的组装、折叠过程中... 被主要组织相容性复合体(MHC)I类分子呈递在细胞表面的抗原肽大部分来源于细胞内新合成蛋白质的降解产物,抗原肽直接体现细胞内功能蛋白质的部分变化,蛋白酶体、氨肽酶和抗原转运体(TAP)参与调控抗原肽的生成。在MHC的组装、折叠过程中,抗原肽促进各亚基的结合和折叠进程;而在起始细胞的免疫应答过程中,抗原肽不仅诱导T细胞抗原受体的特异结合,更为重要的是延长MHC同T细胞抗原受体特异结合的作用时间。 展开更多
关键词 mhc 类分子 抗原肽 蛋白酶体
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蛋白酶体抑制剂Bortezomib对NK细胞杀伤肝癌细胞活性的影响 被引量:2
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作者 魏莉 王亚东 郭明洲 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第10期948-951,共4页
目的探讨小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezom ib对肝癌细胞MHCⅠ类分子(M ICA)的表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法应用流式细胞仪和半定量RT-PCR检测肝癌细胞经小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezom ib处理后M ICA表达水平。应用细胞毒实验和胞内... 目的探讨小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezom ib对肝癌细胞MHCⅠ类分子(M ICA)的表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法应用流式细胞仪和半定量RT-PCR检测肝癌细胞经小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezom ib处理后M ICA表达水平。应用细胞毒实验和胞内染色检测NK细胞功能。结果肝癌细胞株或新鲜肝癌细胞经小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezom ib处理后M ICA表达增加,进而促进经NKG2D途径介导的NK细胞杀伤活性。结论联合小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezom ib和NK细胞为基础的免疫治疗有助于提高原发性肝细胞癌的综合治疗效果。 展开更多
关键词 mhc类分子(MICA) NKG2D配体 蛋白酶体抑制剂Bortezomib 原发性肝细胞癌
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