不同性别东乡绿壳蛋鸡血液全基因组甲基化差异分析

通过对不同性别东乡绿壳蛋鸡的全基因组甲基化的差异分析,检测差异甲基化区域(DMR),分析KEGG通路,为东乡绿壳蛋鸡表观遗传学研究提供参考。试验选取6只120日龄的东乡绿壳蛋鸡,分为公鸡组(LE_COCK)和母鸡组(LE_HEN),每组3只鸡,采集血液提取DNA进行全基因组亚硫酸氢盐测序(WGBS)分析。结果表明:东乡绿壳蛋鸡全基因组上的mC率母鸡和公鸡分别为2.27%和2.03%,母鸡比公鸡高0.24个百分点(P>0.05);CG岛是发生甲基化的主要序列类型,母鸡比公鸡高4.33个百分点(P>0.05);CHG和CHH甲基化类型低于0.11%;CHG甲基化位点的第2位偏向于A;CHH甲基化位点的第2位偏向于A,第3位偏向于T;在CG类型序列中,内含子和3’UTR区域的甲基化水平均高于15%;5’UTR和外显子区域甲基化水平不足10%;16,25号常染色体和一条性染色体甲基化水平较高。东乡绿壳蛋母鸡甲基化水平更高的DMR相关基因在黏附斑,ECM受体互作通路,肌动蛋白细胞骨架的调控,MAPK信号通路等信号通路富集。东乡绿壳蛋公鸡甲基化水平更高的DMR相关基因主要在类固醇生物合成,Notch信号通路,泛素介导的蛋白降解等信号通路富集。研究表明不同性别东乡绿壳蛋鸡具有不同的DMR甲基化特征,母鸡骨骼肌生长发育通路DMR相关基因甲基化水平高于公鸡,而卵泡形成和雌激素相关通路的DMR相关基因甲基化水平低于公鸡。

3种禽血抗凝剂效果及其对DNA提取质量的影响

通过3种不同血液抗凝剂对禽血抗凝,提取新鲜的和经冷冻保存一段时间后的抗凝血DNA,运用紫外分光法、凝胶电泳和PCR扩增技术检测提取的DNA样品质量,探讨不同抗凝剂的抗凝效果及其对提取DNA质量的影响。结果表明:3种抗凝血提取的DNA纯度和浓度相近。新鲜抗凝血比冷冻保存一段时间后的抗凝血提取的DNA质量好。ACD抗凝血在冷冻一段时间后出现凝血块,EDTA抗凝血液放置时间过长也影响抗凝效果,但两者在加入裂解液后则可长时间保存。75%乙醇抗凝剂抗凝效果较好,可长时间保存,适合远距离采血。由3种抗凝禽血提取的DNA分子片段完整,能满足常规分子生物学试验研究。

从鸡血中提取高质量DNA的研究

经研究改进，建立了一种从鸡血中提取高质量ＤＮＡ的有效方法，电泳检测，ＤＮＡ带型整齐集中，无拖尾现象，证明ＤＮＡ分子片段完整，长度大于２３ｋｂ。紫外分光光度计检测，所提取ＤＮＡ的ＯＤ２６０与ＯＤ２８０比值达１．７５±０．０６，证明所提ＤＮＡ质量好，纯度高。

细胞膜渗透性实验的改进及鸡血液DNA的提取

以成年鸡血为材料,分析了不同浓度NaCl、NH4Ac、乙醇、葡萄糖条件下鸡红细胞的渗透性;采用盐析法和碘化钾(KI)法提取鸡血细胞DNA,用二苯胺法和紫外分光法鉴定DNA提取效果。结果表明,在低渗、等渗、高渗溶质中,乙醇渗入细胞的速度都是最快的;用二苯胺法检测从鸡血液中提取的DNA,发现盐析法提取的DNA颜色反应较碘化钾法深;盐析法和碘化钾法提取DNA的光吸收值比率分别为1.6～2.0和1.8～2.0,产量分别为0.7×10-6～0.9×10-6 g/L和0.4×10-6～0.6×10-6 g/L。

DNA粗提取与鉴定的简易方法

介绍一种在中学可行的DNA提取与鉴定的简易方法 ,该法可以不使用离心机和一些特殊的昂贵的药品。