鸡腺苷琥珀酸裂解酶互作蛋白的筛选及其功能分析

通过探究鸡腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase)基因ADSL与其互作基因的调控关系,为进一步研究ADSL在肌肉中高表达的原因和ADSL影响肌肉风味的机制提供参考。本研究构建了鸡(gallus)ADSL基因的重组真核表达载体pEGFP-C1-ADSL,将pEGFP-C1-ADSL和pEGFP-C1质粒分别转染鸡成肌细胞,提取表达成功的细胞总蛋白,利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合质谱分析鉴定与鸡ADSL蛋白互作的细胞蛋白,并对结果进行GO功能注释、KEGG通路和蛋白互作网络分析。通过分析筛选出RPL4、PDLIM5、ACTG1和SRSF10蛋白,检测在ADSL基因过表达和沉默状态下,RPL 4、PDLIM 5、ACTG 1和SRSF 10基因在成肌细胞中的表达情况。结果表明,与ADSL互作的蛋白共94个;生物信息学分析表明,这些蛋白定位于细胞结构体、胞内和含蛋白质的复合物上,它们主要参与细胞进程、生物调节和刺激反应等生物进程。间接免疫荧光结果显示,重组蛋白pEGFP-C1-ADSL主要定位于细胞核和细胞质。ADSL过表达时,成肌细胞内RPL 4基因和PDLIM 5基因的表达下调,ACTG 1和SRSF 10基因的表达上调;当ADSL被沉默后,成肌细胞内RPL 4和ACTG 1基因的表达上调。研究结果丰富了调控风味的ADSL蛋白,为进一步了解ADSL的功能及该基因在肌肉中高表达提供了参考。

低嘌呤鸡骨清汤制备及风味成分分析

为制备低嘌呤、高蛋白且感官品质优良的鸡骨清汤,以鸡骨架为原料,采用热压提取法制备鸡骨清汤。以总嘌呤与蛋白质浓度比值为响应值,感官评分为辅助指标,采用Box-Behnken响应面法得出最佳制备条件;通过游离氨基酸、呈味核苷酸、味精当量、电子舌和感官结果评价该条件下鸡骨清汤的滋味特征;利用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)、顶空固相微萃取-气相色谱-嗅闻技术(headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-olfactory,HS-SPME-GC-O)结合气味活性值(odor active value,OAV)鉴定其关键挥发性风味化合物。结果:鸡骨清汤的最佳制备条件为温度122.3℃、时间149.8 min、料液比0.94,该条件下鸡骨清汤样品中总嘌呤含量为407.03 mg/L,蛋白质含量为3.67 g/100 g,总嘌呤与蛋白质质量浓度比值为110.98。滋味分析结果表明,谷氨酸对鸡骨清汤的鲜味有直接贡献,滋味活性值(taste active value,TAV)为1.96;呈味核苷酸TAV均小于1,对滋味无直接贡献;感官评价分析表明其整体可接受等级为“良好”,适用于后续骨汤产品的生产。HS-SPME-GC-MS分析鉴定出挥发性风味化合物51种,OAV大于1的化合物有23种,包括(E)-2-壬烯醛、(E)-2-辛烯醛、3-(甲硫基)丙醛和1-辛烯-3-醇等。GC-O分析表明己醛、2-甲基-3-呋喃硫醇、3-(甲硫基)丙醛、丁内酯、1-辛烯-3-醇、己酸、(E)-2-庚烯醛、二丙基二硫醚、(E)-2-壬烯醛和α-松油醇气味强度较大,为鸡骨清汤贡献青草香、肉香、土豆香、甜香、蘑菇香、酸味、硫味和油脂香等。结论:研究优化了低嘌呤鸡骨清汤热压提取制备工艺,并对风味进行系统分析,为鸡骨清汤工业化加工提供了新的理论与技术支撑。

基于转录组和蛋白组筛选乌骨鸡肤色性状候选基因

旨在基于转录组和蛋白组的联合分析,筛选影响乌骨鸡肤色性状的候选基因。本研究在HW1系黑羽乌骨鸡群体中选取150日龄的6只白肤个体和6只乌肤个体分为两组(white skin,WS和black skin,BS)作为试验样本,采集胸部皮肤组织,提取RNA和蛋白,进行高通量转录组测序(RNA-Seq)和蛋白组定量分析,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)和差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),并对其进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证、功能富集分析和蛋白互作网络的构建与分析,进一步筛选与乌骨鸡肤色性状相关的候选基因。结果显示,转录组共鉴定到293个DEGs,蛋白组共鉴定到4个DEPs,其中重叠的基因有CRP、DCT、GPNMB。随机选择5个DEGs进行RT-qPCR验证,表达趋势与测序结果一致。富集分析表明,DEGs和DEPs显著富集在71个GO条目和4个KEGG通路中,包括黑素细胞分化、黑素体、黑素体膜和黑素原生成通路。接下来,通过Cytoscape软件的cytoHubba插件捕获到来自DEGs和DEPs构建的蛋白互作网络里的10个Hub基因,这些基因主要显著富集在免疫相关GO条目和通路中。进一步发现Hub基因与黑色素相关基因可构成两个子网络,这两个子网络可通过PTPRC、SOX10、GPNMB、CRP基因连接在一起。本研究最终筛选到11个乌骨鸡肤色性状相关的候选基因(SOX10、EDN3、EDNRB2、MLANA、OCA2、DCT、GPNMB、ASIP、RAB38、PTPRC、CRP),其可能在黑色素合成中起关键作用。总之,该研究可为今后探究乌骨鸡肤色性状的分子调控机制和分子育种改良提供理论依据。

鸡OATP1B3互作蛋白筛选及其相关基因的转录表达分析

【目的】筛选鉴定鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)的互作蛋白,并探究其对鸡蛋绿壳颜色形成的影响,为提高绿壳蛋鸡群体选育准确性提供参考依据。【方法】以真核表达载体p EGFP-SLCO1B3和空载体pEGFP-C1分别转染绿壳型赤水乌骨母鸡蛋壳腺上皮细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)结合液相色谱与串联质谱联用技术(LC-MS/MS)筛选鸡OATP1B3互作蛋白,经GO功能注释分析、KEGG信号通路富集分析及蛋白相互作用网络分析鉴定出与鸡蛋绿壳性状形成相关的OATP1B3互作蛋白。同时,通过构建SLCO1B3基因沉默及过表达载体分别转染蛋壳腺上皮细胞,检测SLCO1B3基因过表达或沉默时部分OATP1B3互作蛋白基因(FXR1、CTTN、RPL12和RPS17)在蛋壳腺上皮细胞中的表达情况,并根据鸡蛋壳颜色分为白壳、浅绿和深绿3种类型,分析蛋壳颜色△a*值与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因表达的相关性。【结果】共筛选鉴定出37个与鸡OATP1B3相互作用的蛋白,其中FXR1、CTTN、RPL12和RPS17与鸡蛋的绿壳性状有密切关系。SLCO1B3基因过表达能极显著下调蛋壳腺上皮细胞内FXR1基因的表达(P<0.01,下同),显著上调RPL12基因表达(P<0.05,下同),极显著上调RPS17基因表达;当SLCO1B3基因沉默后,蛋壳腺上皮细胞内FXR1和CTTN基因的表达极显著上调,而RPL12基因的表达显著下调。白壳类型赤水乌骨母鸡下丘脑中的FXR1基因相对表达量极显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡,肝脏中的RPL12和RPS17基因相对表达量极显著或显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡;此外,FXR1基因在下丘脑中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关,RPL12基因在蛋壳腺和肝脏中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关。【结论】筛选鉴定出的37个鸡OATP1B3互作蛋白主要定位于细胞质和细胞核,具有蛋白结合能力及结构分子活性,主要参与细胞过程、生物调节和能量代谢。在鸡壳腺上皮细胞内SLCO1B3基因与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因间存在调控关系,其中,FXR1和RPL12基因在鸡蛋绿壳性状的形成过程中发挥着重要作用。

BMP15外显子1SNPs检测及其与邵伯鸡母系产蛋性状的关联性分析

本研究旨在阐明骨形态发生蛋白15(Bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因多态性与邵伯鸡母系产蛋性状之间的关系,为鸡繁殖性状的标记辅助选择提供科学依据。采用PCR-RFLP技术检测261只邵伯鸡母系BMP15的基因多态性,用最小二乘法分析该基因多态性与邵伯鸡母系产蛋性状的关系。发现BMP15基因外显子1序列中存在3个多态位点C397T、A474G和C594T,其中C397T位点C→T的突变使亮氨酸变为苯丙氨酸,经RFLP检测,3个多态位点均发现3种基因型。χ2检验表明,邵伯鸡母系在这3个位点均处于Hardy-Weinberg平衡。用最小二乘法分析这3个位点的多态性与邵伯鸡母系产蛋性状之间的关系,结果发现,C397T位点TT基因型个体的开产日龄显著早于CT型个体(P<0.05),TT型个体的300日龄产蛋数显著高于CT型个体(P<0.05);A474G位点AA、AG和GG型个体间的各性状差异均不显著(P>0.05);C594T位点CC型个体的开产日龄显著早于CT与TT型个体。3个位点的合并基因型TTAATT对开产日龄、开产体质量、开产蛋质量、300日龄平均蛋质量、300日龄产蛋数均有显著影响(P<0.05)。对于邵伯鸡母系而言,TTAATT是最有利基因型,本研究结果初步表明,BMP15基因合并基因型TTAATT可以作为邵伯鸡母系产蛋性状潜在的DNA分子标记。

木瓜蛋白酶在乌鸡肉蛋白质分步酶解中的应用研究

对乌鸡肉蛋白质的分步酶水解工艺及其水解液的澄清方法进行了研究。结果表明：将乌鸡肉破碎、预煮后，用Alcalase和木瓜蛋白酶分步水解鸡肉蛋白质，再经灭酶、硅藻土过滤等处理，可制得香味良好且澄清的乌鸡肉蛋白质水解液。水解产物的水解度和总的氮收率分别为31.99%和77.15%。

鸡骨架蛋白酶解物的电泳分析

用SDS-PAGE和Tricine-PAGE两种电泳方法对不同时间鸡骨架蛋白酶解物进行检测与分析。以鸡骨架肉糜为水解底物,加入1%的Flavourzyme和Protamex(m:m=2:1),在pH值7.0,50℃条件下,水解0、1h、2h、3h、4h。SDS-PAGE和Tricine-PAGE电泳分析结果表明,两种电泳方法分离效果相似,均能比较清楚地反映鸡骨架酶解程度。随着水解时间的延长,低于10KDa的水解肽段不断增加,高于10KDa的蛋白不断减少或逐渐消失,与常规蛋白水解度检测方法(OPA法)的测定结果相符合。利用电泳分析软件,进一步比较图谱中蛋白质的种类、浓度的变化,发现Tricine-PAGE比常规SDS-PAGE能更清楚地分辨水解多肽,可作为一种直观、准确的方法评价鸡骨架蛋白水解程度。

响应面法优化鸡骨蛋白酶解工艺条件

以冰鲜鸡骨渣为原料,测定其营养成分。采用高压蒸煮的方法提取鸡骨蛋白,并采用复合蛋白酶对该蛋白进行酶解,以水解度和蛋白质提取率为测定指标,选定酶的添加量、水解温度和水解时间3个因素进行单因素实验;在此基础上,采用响应面法先建立数学模型,然后回归分析、模型评价,确定最佳酶解条件为加酶量1.5%、温度55℃、水解时间2.5 h,此时水解度为25.88%。

乌鸡肉蛋白质分步酶解工艺与水解液澄清方法研究

对乌鸡肉蛋白质的分步酶水解工艺及其水解液的澄清方法进行了研究。结果表明 ,将乌鸡肉破碎、预煮后 ,用 Alcalase和 Flavourzyme分步水解鸡肉蛋白质 ,再经灭酶、硅藻土过滤等处理 ,可制得澄清的乌鸡肉蛋白质水解液 ,其水解度和总氮收率分别为 46 .72 %和 81.43%

反应温度对鸡骨蛋白酶解液美拉德产物光谱特性和抗氧化活性的影响

以鸡骨蛋白酶解液和半乳糖为反应体系,研究了反应温度对其美拉德产物(MRPs)褐变程度、中间产物生成、荧光光谱与体外抗氧化活性的影响。结果表明,反应温度是影响鸡骨蛋白酶解液MRPs光谱特性和抗氧化活性的重要因素,100℃条件下该体系反应的褐变程度最高,中间产物生成量最多,且具有更高的DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和还原能力。此外,褐变程度、中间产物生成量与鸡骨蛋白酶解液MRPs的DPPH自由基清除率和还原力之间具有良好线性关系。

鸡BMP4的结构与功能分析

基于NCBI数据库上骨形态发生蛋白4(BMP4)的氨基酸序列,运用生物信息学方法从蛋白理化性质、信号肽、结构域、Motif、三维结构及物种间进化关系等方面对鸡BMP4的结构和功能进行分析。结果表明,鸡BMP4具有信号肽、TGF-β结构域和潜在的糖基化、磷酸化等位点,无跨膜区,成熟肽与模板2h62B有91.18%的氨基酸序列一致,物种间BMP4相似性为90.65%。鸡BMP4具有BMPs家族典型结构,本研究可为BMP4在软骨和骨形成、原始卵泡发育、干细胞向脂肪细胞定向分化以及早期胚胎发育过程中发挥作用奠定基础。

乌鸡精、乌鸡肽和乌鸡汤蛋白质含量及相对分子质量分布的比较

文中对乌鸡精、乌鸡肽和乌鸡汤蛋白质含量及蛋白质相对分子质量分布区间进行了比较。结果表明:乌鸡肽总蛋白质含量为84.18%,酸溶蛋白质含量为83.10%,明显高于乌鸡精和乌鸡汤;乌鸡肽的小分子蛋白质含量更高,相对分子质量140-1 000的占92.59%,更利于人体的吸收。

鸡骨蛋白酶解过程中的产物性质研究及电泳分析

研究风味蛋白酶酶解鸡骨过程中的氨基氮、可溶性氮、肽基氮的变化规律以及产物的呈味特性的变化趋势。结果表明:氨基氮和可溶性氮在酶解过程中逐渐增加,肽基氮增加到最大值后下降;酶解产物鲜味随时间延长而增加,苦味值在酶解后期逐渐稳定。游离氨基酸含量在24h达到最大值,呈味氨基酸的大量释放对酶解液的风味有重要影响。酶解液的Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,在酶解过程中,多肽分子质量逐渐降低,酶解24h,酶解液分子质量约都集中在10.0kD以下。

甲状腺激素对乌鸡生长和蛋白质能量沉积的影响

为了探讨甲状腺激素对乌鸡生长和蛋白质沉积的影响 ,选用 1日龄雪峰乌鸡 36 0只 ,随机分为 2组 ,对照组喂基础日粮 ,试验组喂基础日粮加 T3(3,5 ,3'-三碘甲腺原氨酸 ) 0 .1m g/ kg.在试验期的 2 ,4 ,6 ,8周龄分别对试鸡的生产性能、整鸡蛋白质、胸肌、腿肌蛋白质含量和能量进行测定 .结果表明 :2组间各阶段日增重无显著差异 ,相对生长率除在 8周龄试验组显著低于对照组外 ,其他各阶段无显著差异 .采食量和饲料效率 2组间各阶段无显著差异 ,整鸡蛋白质沉积量 ,蛋白质沉积率 ,胸、腿肌蛋白质沉积量无显著差异 。

肉鸡鸡骨蛋白质酶法水解研究

用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶对肉鸡骨进行酶解,得出最优酶为木瓜蛋白酶。然后以木瓜蛋白酶作水解酶,考察了原料预处理方法、酶用量、料液比、酶解温度及时间对水解度的影响,并采用正交实验对酶解条件进行了优化。结果表明:原料经121℃高压蒸煮15min,酶用量2.5%(w/w,以蛋白质含量计),料液比约0.71(5∶7,w/v),酶解温度57℃,酶解时间7h,样品的水解度可达12.16%。在此水解液中加入1.0%(w/v)的活性炭脱色脱臭,于60℃真空干燥后可得到黄色固体蛋白质水解物。

云南盐津乌鸡血液蛋白及同工酶遗传多态性研究

采用水平式淀粉凝胶是电泳技术，对云南盐津乌鸡３４只个体共计３４个基因座位的血液蛋白及同工酶多态性研究，发现了ＬＡＰ，ＡＫＰ－１，ＡＫＰ－２，ＣＫｓ－１，ＰＥＰ－Ｂ５个座位具有多态性，多态座位百分比和平均杂合度分别为Ｐ＝０．１４７０，Ｈ＝０．０５８６，对多态座位基因频率进行计算发现盐津乌鸡ＬＡＰ＾Ｂ，ａＫＰ－１，ＡＫＰ－２，ＣＥｓ－１＾Ａ，ＰＥＰ－Ｂ＾Ａ频率较高。

日粮蛋白水平对7～12周龄略阳乌鸡免疫及抗氧化性能的影响

本试验旨在研究日粮不同蛋白水平对7～12周龄略阳乌鸡母鸡免疫及抗氧化性能的影响.试验选取42日龄略阳乌鸡母鸡180只,随机分成3组,每组5个重复,每重复12只鸡.各试验组分别饲喂蛋白水平为12.39％、16.60％和20.15％的日粮,于8、10和12周龄末采集血清及肝脏样品测定免疫及抗氧化指标.结果表明：日粮蛋白水平对8、10和12周龄略阳乌鸡母鸡血清中各项免疫指标均没有显著影响（P＞0.05）.日粮16.60％和20.15％蛋白水平组较12.39％蛋白水平组显著提高了8周龄略阳乌鸡母鸡血清T-AOC含量（P＜0.05）及10周龄略阳乌鸡母鸡血清SOD含量（P＜0.05）.随着日粮蛋白水平的升高,12周龄略阳乌鸡母鸡血清中MDA含量显著降低（P＜0.05）.8、10周龄略阳乌鸡母鸡肝脏中CAT含量均随日粮蛋白水平提高而显著增加,但在12周龄未表现出显著性差异.由此可见,在本试验条件下,随着日粮蛋白水平升高,略阳乌鸡机体抗氧化功能具有显著增强的趋势.

乌骨鸡日粮适宜蛋白质水平的研究

通过饲养和消化代谢试验 ,研究不同生长阶段(1～30日龄 ,31～60日龄 ,61～90日龄)不同蛋白质水平下乌骨鸡的生产性能和表观氮存留率 ,以便确定不同生长阶段日粮蛋白质适宜水平。结果 ,较符合乌骨鸡各生长阶段需要的蛋白质水平为 :1～30日龄为19%(ME :12.40MJ/kg) ,31～60日龄为17 %(ME :12.40MJ/kg) ,61～90日龄为17 %(ME :12.5MJ/kg)。

乌骨鸡育成期适宜蛋白质水平及其与产蛋性能关系的研究

本试验就乌骨鸡育成期适宜蛋白质水平与产蛋期产蛋性能进行了研究。结果表明：乌骨鸡育成期蛋白质水平较低组（４～６周龄饲粮蛋白质水平为１９％，７～１４周龄蛋白质水平为１７％，１５～２５周龄蛋白质水平为１３％）与育成期蛋白质水平较高组（４～６周龄饲粮蛋白质水平为２１％，７～１４周龄蛋白质水平为１９％，１５～２５周龄蛋白质水平为１５％）的体重、日增重、饲粮效率差异不大。从产蛋率看：２７～３４周龄、４１～４８周龄也表现出育成期低蛋白组高于育成期高蛋白组。在２７～３４周龄试鸡中，除３１～３２周龄差异不显著外，其余周龄的差异都显著（Ｐ＜０．０５）。４１～４８周龄低蛋白组高于高蛋白组，但差异不显著（Ｐ＞０．０５），两种周龄期料蛋比试验结果都是低蛋白组低。通过试验得到本试验乌骨鸡育成期的３个不同时期对蛋白质适宜需要参数：４～６周龄饲粮适宜蛋白质水平为１ｇ％（ＭＥ：１２．３０ＭＪ／ｋｇ），７～１４周龄蛋白质水平为１７％（ＭＥ：１１．９５ＭＪ／ｋｇ）、１５～２５周龄蛋白质水平为１３％（ＭＥ：１１．５９ＭＪ／ｋｇ）。

日粮蛋白质对7～12周龄略阳乌鸡生长发育的影响

通过分析日粮蛋白质对7～12周龄略阳乌鸡生长性能、主要组织器官发育和血清生化指标的影响,初步确定此阶段略阳乌鸡蛋白质的需要量。选取600只43日龄略阳乌鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复20只鸡(公母各半),5个组分别饲喂蛋白质质量分数为12.39%、14.20%、16.60%、18.06%和20.15%的日粮。结果表明,日粮蛋白质质量分数对略阳乌鸡的平均日增量、料质量比、胰腺、胸腺和法氏囊质量、胸肉占体质量的比例及血清中白蛋白质量浓度均有显著影响,对平均日采食量、部分内脏器官指数和血清生化指标无显著影响,饲喂日粮蛋白质质量分数为18.06%和16.60%处理组的略阳乌鸡平均日增质量、料质量比、胸肉占体质量的比例及血清中白蛋白质量浓度显著高于12.39%、14.20%和20.15%处理组。随着日粮蛋白质质量分数的增加,平均日增量及料质量比都呈现二次曲线变化趋势。回归分析表明,以平均日增量及料质量比为评价指标,7～12周龄略阳乌鸡日粮蛋白质需要量分别为17.52%和17.18%。