Isolation of Lysozyme from Chicken Egg White Using Polyacrylamide-based Cation-exchange Cryogel

An effective cation-exchange chromatographic method for lysozyme isolation from chicken egg white is presented, using supermacroporous cryogel grafted with sulfo functional groups. The chromatographic processes were carried out by one-step and sequential elution, respectively. Sodium phosphate buffer （pH 7.8） containing different concentrations of NaC1 is used as elution agent. The corresponding breakthrough characteristics and elution behaviors in the cryogel bed were investigated and analyzed. Purity of lysozyme in the elution effluent was assayed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis （SDS-PAGE）. The maximum purity of the obtained lysozyme was about 96%, and the cryogel is demonstrated as a potential separation medium for purification of high-purit lysozyme from chicken egg white.

中草药复方对贵州隐性白羽鸡产蛋性能、蛋品质、血清和肝脏生化指标的影响

为研究饲粮中添加不同比例中草药复方对贵州隐性白羽鸡产蛋性能、蛋品质、内脏器官发育指标、血清生化指标的影响,选取420日龄、体重(1.04±0.15)kg的贵州隐性白羽鸡(蛋鸡)80只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复4只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加5%、10%、20%复方中草药添加剂。试验期31 d。结果表明:(1)饲粮中添加中草药复方对贵州隐性白羽鸡的产蛋率、平均日产蛋重、料蛋比有显著影响(P<0.05)。其中,与对照组相比,5%组、20%组产蛋率分别降低15.71%、28.57%(P<0.05),10%组也低于对照组,但无显著差异(P>0.05);5%组、20%组平均日产蛋重较对照组降低12.95%、28.58%(P<0.05),10%组低于对照组,但无显著差异(P>0.05);5%组、20%组的料蛋比均显著高于对照组,分别提高15.24%、40.33%(P<0.05)。(2)饲粮中添加中草药复方对贵州隐性白羽鸡喂药前1 d的鸡蛋重量、喂药第20天的蛋黄颜色和蛋壳厚度、喂药第25天的蛋壳强度有影响(P<0.05)。其中,喂药前1 d,5%组和10%组的鸡蛋重量显著高于对照组(P<0.05),分别提高9.60%、8.09%;喂药第20天,5%组、10%组、20%组的蛋黄颜色较对照组分别降低7.22%、8.00%、7.14%,5%组、10%组、20%组的蛋壳厚度较对照组分别降低7.32%、12.20%、7.32%(P<0.05);喂药第25天,10%组、20%组的蛋壳强度较对照组提高20.63%、31.36%(P<0.05),5%组蛋壳强度较对照组降低5.67%(P>0.05)。(3)饲粮中添加中草药复方对贵州隐性白羽鸡的肠脏指数、生殖器指数有显著影响(P<0.05)。其中,5%组的肠脏指数较对照组提高7.56%,10%组、20%组较对照组降低11.13%、4.89%,差异均不显著(P>0.05);20%组生殖器指数较对照组降低42.38%(P<0.05),5%组和10%组与对照组无显著差异(P>0.05)。(4)饲粮中添加中草药复方对贵州隐性白羽鸡的肌酸激酶、谷草转氨酶、甘油三酯、尿素氮、葡萄糖、总胆固醇、总胆红素、总蛋白无显著影响(P>0.05),对碱性磷酸酶、谷丙转氨酶、肌酐有显著影响(P<0.05)。其中,5%组、10%组的碱性磷酸酶较对照组提高119.98%、105.19%(P<0.05);10%组的谷丙转氨酶达到最大,为199.86 U/L,较对照组显著提高400.27%(P<0.05);肌酐含量最大的是10%组,为460.12μmol/L,显著高于对照组245.18%(P<0.05)。(5)隶属函数分析得出,饲粮中添加中草药复方的贵州隐性白羽鸡各组综合排名为:10%组>对照组>20%组>5%组。综上可知,饲粮中添加中草药复方可一定程度提高地方鸡产蛋性能、蛋品质以及血清和肝脏生化指标,其中贵州隐性白羽鸡以10%的中草药复方添加剂量效果最好。

鸡蛋清卵白蛋白与溶菌酶的两步超滤法分离"

研究了两步超滤法分离鸡蛋清中卵白蛋白与溶菌酶的可行性。基于超滤机理分析了超滤过程中初始料液体积分数、pH值和跨膜压力等参数对膜通量、透过液蛋白质质量浓度的影响。在考察膜通量变化确定超滤时间的基础上,通过超滤试验获得最佳工艺条件:初始料液体积分数6.0%,pH值2.5,跨膜压力0.12 MPa。超滤产物纯度、回收率较高,卵白蛋白、溶菌酶的纯度分别为85.72%、87.21%,回收率分别为51.36%、62.58%。试验结果表明,两步超滤法可用于鸡蛋清卵白蛋白与溶菌酶的规模化、高效分离。

两步超滤法分离鸡蛋清中卵转铁蛋白的研究

以配有聚砜树脂衍生物膜的超滤装置为载体,结合透析、冷冻干燥处理,发展一种从蛋清中分离提取卵转铁蛋白经济简单的方法,并研究操作压力、搅拌速度、溶液pH值、稀释倍数等操作参数对膜通量的影响,并优化工艺。结果表明,两步超滤法分离鸡蛋清中卵转铁蛋白的最佳条件是操作压力0.15 MPa,蛋清液和溶剂按体积比1∶10进行稀释,搅拌速度125 r/min,体系pH值为7。该条件下得到卵转铁蛋白纯度为29.6%。

毛细管柱表面鸡卵清蛋白快速改性并用于等电聚焦电泳分离蛋白质

开发了一种利用鸡卵清蛋白改性毛细管柱内表面的快速方法。改性后的毛细管柱可避免蛋白质样品的吸附作用 ,在较温和的条件下 ,柱性能有很好的稳定性 。

三个品种鸡蛋的蛋品质比较

为比较不同品种蛋鸡的鸡蛋营养成分含量及其品质差异,选用相同饲养条件下32周龄北京油鸡、矮脚油鸡和白来航鸡同日所产鲜鸡蛋各12个,进行常规蛋品质及蛋黄卵磷脂含量测定。结果表明:北京油鸡和矮脚油鸡鸡蛋大小适中,蛋黄颜色深且比率高,卵磷脂含量高。

溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究

[目的]研究制备溶菌酶的最佳工艺条件及其在山核桃乳中的应用。[方法]以鸡蛋清为原料,通过阳离子交换树脂法提取溶菌酶,采用正交试验确定制备溶菌酶的最适工艺条件,并将溶菌酶与甘氨酸和NaCl复配后作为防腐剂应用于脱脂山核桃乳饮料中。[结果]通过正交试验确定的最佳工艺条件为:蛋清树脂比5:1、pH值7.0、搅拌吸附4h,用1.0mol/LNaCl洗脱,洗脱液经超滤、浓缩后冷冻干燥得到溶菌酶成品。该试验最终酶收率为89.78%,酶活力为14817U/mg。将0.05%溶菌酶与0.30%甘氨酸和0.40%NaCl进行复配用于生产脱脂山核桃乳,其抑菌效果较显著,降低了山核桃乳的杀菌强度,延长了产品货架期。[结论]该工艺操作方便,适合溶菌酶的工业化生产;溶菌酶用于生产脱脂山核桃乳效果好。

利用肽配体库分析蛋清中低丰度蛋白质组

利用肽配体库技术(CPLL)研究了蛋清中的低丰度蛋白质组。考察了盐浓度和洗脱顺序差异对CPLL富集效率的影响。结果表明:盐浓度越高,蛋清蛋白质溶液的离子相互作用越强。利用洗脱溶液解离差异,采用先HOS(有机水溶液)后尿素CHAPS(3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸内盐)的洗脱顺序,溶菌酶能够得到高效分离。保持蛋清的原p H 8.8,25 mmol/L KH2PO4,150 mmol/L Na Cl,尿素CHAPS洗脱,是CPLL提供高效富集的前提。通过分析CPLL富集前后的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)条带差异,采用线性离子阱(LTQ)质谱在蛋清中检出45种低丰度蛋白质,其中两种未见报道。对蛋清中低丰度蛋白质亚细胞的定位分析发现,蛋清蛋白质的分泌蛋白居多。研究结果表明,CPLL技术能够实现蛋清中低丰度蛋白质的高效富集,分析深度达到亚细胞水平。

同一母鸡三个蛋清混样检测禽白血病病毒p27抗原的可行性分析

为探讨采用母鸡3个蛋清混样开展禽白血病检测与净化的可行性,试验对2014~2016年北京油鸡5个品系30 639只母鸡蛋清禽白血病病毒p27抗原ELISA结果进行了统计与分析。同一母鸡3个蛋清S/P值求平均作为混样的S/P值,以S/P≥0.20、S/P≥0.15、S/P≥0.10为阳性判定标准,分别比较混样法与单独检测的一致性。结果显示:随着净化代次的增加,阳性判定阈值降低,混样法对阳性母鸡检出率逐渐升高。以S/P≥0.10为阳性标准,2016年阳性母鸡检出率为100%,母鸡阴性转为阳性的比例不超过1%,其中2个或3个蛋清S/P值≥0.10的占80%~90%。研究结果充分说明母鸡3个蛋清混样进行禽白血病病毒p27抗原检测理论上是可行的,尤其在净化后期或种群阳性比例不高的情况下,将S/P≥0.10定为阳性标准,不仅可以淘汰阳性个体,而且有助于淘汰弱阳性个体。

蛋重和蛋形指数对拉萨白鸡种蛋孵化效果的研究

为研究拉萨白鸡种蛋蛋重和蛋形指数(纵径/横径)对孵化效果的影响,在相同孵化条件下,选用3世代47周龄拉萨白鸡种蛋,按蛋重分组进行孵化,Ⅰ组(≤45.0 g)蛋形指数为(1.27±0.05),Ⅱ组(45.1~50.0 g)蛋形指数为(1.27±0.05),Ⅲ组(50.1~55.0 g)蛋形指数为(1.27±0.05),Ⅳ组(55.1~60.0 g)蛋形指数为(1.28±0.05),Ⅴ组(>60.0 g)蛋形指数为(1.31±0.05)。结果表明,种蛋的蛋重越大,其纵径均值、横径均值、蛋形指数均值、受精率、入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率和雏鸡初生重越大,即Ⅴ组(>60.0 g)种蛋的蛋重均值、纵径均值、横径均值、蛋形指数均值、受精率、入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率和雏鸡初生重均最大,分别为(61.03±0.82)g、(58.13±1.68)mm、(44.59±0.79)mm、(1.31±0.05)、98.15%、85.19%、86.79%和(42.48±1.98)g;Ⅱ组(45.1~50.0 g)的健雏率最高,为96.09%;Ⅰ组(≤45.0 g)的雏鸡初生重占入孵蛋重的百分比最大,为(69.91±2.71)%;蛋重与纵径、横径、蛋形指数呈极显著正相关(P<0.01)。因此,蛋重和蛋形指数对拉萨白鸡种蛋的孵化率影响较大,应选择较大种蛋(>45.0 g),蛋形指数的范围则较宽,在≥1.27时即可以达到较理想的孵化效果。

拉萨白鸡蛋品质的测定及相关分析

为研究拉萨白鸡蛋品质的相关物理性状,对43周龄拉萨白鸡所产的30枚新鲜鸡蛋进行了蛋品质测定及相关分析。结果表明,蛋壳重量与蛋壳颜色呈显著正相关(P<0.05);蛋壳强度与蛋重呈显著正相关(P<0.05);蛋白重量与蛋壳颜色呈显著正相关(P<0.05),与蛋壳重量呈极显著正相关(P<0.01),与蛋壳率呈显著负相关(P<0.05);蛋白率与蛋壳率呈显著负相关(P<0.05),与蛋白重量呈极显著正相关(P<0.01);蛋黄重量与蛋壳重量、蛋白重量呈极显著正相关(P<0.01),与蛋壳率呈显著负相关(P<0.05),与蛋白率呈极显著负相关(P<0.01);蛋黄率与蛋形指数、蛋黄重量呈极显著正相关(P<0.01),与蛋壳重量、蛋白重量、蛋白率呈极显著负相关(P<0.01);蛋黄比色与蛋壳强度呈显著负相关(P<0.05);哈氏单位与蛋壳颜色呈显著负相关(P<0.05),与蛋白高度呈极显著正相关(P<0.01);蛋壳厚度与蛋壳强度呈极显著正相关(P<0.01);血肉斑与蛋壳强度呈极显著正相关(P<0.01),与哈氏单位呈显著负相关(P<0.05),与蛋壳厚度呈显著正相关(P<0.05)。其他性状间也有相关性,但差异不显著。该研究为拉萨白鸡今后的选育提供了理论依据。

3个品种鸡的蛋品质比较研究

随机选取43周龄的拉萨白鸡鸡蛋、藏鸡鸡蛋和白来航鸡鸡蛋各30枚,进行蛋品质测定。结果表明,3个品种鸡的蛋品质存在差异,除蛋比重差异不显著(P>0.05)外,拉萨白鸡鸡蛋、白来航鸡鸡蛋与藏鸡鸡蛋的蛋重、蛋壳颜色、气室直径、蛋壳百分率、蛋壳强度、蛋黄重量、蛋壳厚度均存在极显著差异(P<0.01);拉萨白鸡鸡蛋、藏鸡鸡蛋与白来航鸡鸡蛋的蛋形指数存在极显著差异(P<0.01);拉萨白鸡鸡蛋与藏鸡鸡蛋、白来航鸡鸡蛋的蛋白高度、哈氏单位存在极显著差异(P<0.01);蛋白重量、蛋黄比色在3个品种鸡的鸡蛋中存在极显著差异(P<0.01);拉萨白鸡鸡蛋与藏鸡鸡蛋、白来航鸡鸡蛋的蛋白百分率存在显著差异(P<0.05);3个品种鸡的蛋壳重量和蛋黄百分率相互表现出显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);拉萨白鸡鸡蛋、白来航鸡鸡蛋与藏鸡鸡蛋的血肉斑存在显著差异(P<0.05)。综合来看,拉萨白鸡的蛋品质最佳,具有良好的市场前景,应加大对拉萨白鸡的品种培育力度。

蛋形指数对拉萨白鸡种蛋孵化效果的影响及相关分析

为了研究蛋形指数对拉萨白鸡种蛋孵化效果的影响,在相同孵化条件下,选用3世代47周龄拉萨白鸡种蛋,按蛋形指数分组进行孵化,并对蛋形指数与孵化效果的相关性进行了分析。结果表明,蛋形指数(横径/纵径)在0.68~0.72时,0胚龄蛋重、纵径均值、头照(第11日胚龄)蛋重、二照(第20日胚龄)蛋重最大,分别为:(51.92±5.27)g、(57.71±1.97)mm、(48.95±4.67)g、(45.47±3.97)g;蛋形指数(横径/纵径)在0.73~0.77时,入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率和雏鸡的初生重最大,分别为:82.65%、86.60%、(36.31±4.71)g;蛋形指数(横径/纵径)在0.78~0.82时,头照(第11日胚龄)失重、头照(第11日胚龄)失重率、二照(第20日胚龄)失重、二照(第20日胚龄)失重率最大,分别为:(3.35±0.93)g、(6.64±1.54)%、(6.70±1.47)g、(13.47±2.56)%;蛋形指数(横径/纵径)在0.83~0.87时,橫径均值、受精率、健雏率、雏鸡初生重占入孵蛋重的百分比最大,分别为:(42.82±1.23)mm、97.26%、95.96%、(70.23±3.58)%;雏鸡初生重与雏鸡初生重占入孵蛋重的百分比呈极显著正相关(P<0.01)。该研究为拉萨白鸡今后的选育提供了理论依据。

蛋重对拉萨白鸡种蛋孵化效果的影响

为研究拉萨白鸡蛋重对种蛋孵化效果的影响,在相同孵化条件下,选用3世代47周龄拉萨白鸡种蛋,按蛋重分组进行孵化。结果表明,种蛋在整个孵化期都处于稳定失重过程,蛋重越大,失重越大;蛋重对种蛋受精率和早期胚胎死亡率无显著影响(P>0.05);孵化至第11天时,Ⅴ组的胚胎失重和失重率最大,分别为(4.11±0.71)g、(6.73±1.67)%;孵化至第20天时,Ⅴ组的胚胎失重最大,为(7.81±1.27)g,Ⅳ组的胚胎失重率最大,为(13.08±2.59)%;蛋重在>60.0 g时,入孵蛋孵化率和受精蛋孵化率均最高,分别为85.19%和86.79%;不同组别的第11日胚龄蛋重、第20日胚龄蛋重都表现出极显著差异(P<0.01);雏鸡的初生重随蛋重的增加而显著增大,呈强显著正相关(r=0.94)且差异极显著(P<0.01);不同组别的雏鸡初生重表现出极显著差异(P<0.01)。

大豆蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、浓缩乳清蛋白及转谷氨酰胺酶对鸡肉肠出品率和硬度的影响

本文采用两因素析因实验设计,研究了转谷氨酰胺酶和四种非肉蛋白(大豆蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、浓缩乳清蛋白)对鸡肉肠出品率和硬度的影响。结果显示,随着浓度的增加,四种非肉蛋白均可显著增加鸡肉肠的出品率(p<0.01);转谷氨酰胺酶对出品率没有影响,与非肉蛋白之间亦无交互作用。转谷氨酰胺酶在提高鸡肉肠硬度的同时和非肉蛋白间有交互作用,其中酪蛋白和大豆蛋白能提高硬度,而卵清蛋白和浓缩乳清蛋白则显著降低了鸡肉肠的硬度(p<0.05)。

新型肿瘤坏死因子免疫抑制剂的克隆和表达

目的 :用鸡卵清溶菌酶 (henegg whitelysozyme ,HEL)T辅助细胞表位序列替换新型rhTNF α3’末端序列 ,构建和表达新型rhTNF α免疫抑制剂。方法 :克隆、表达、纯化和鉴定新型rhTNF α免疫抑制剂。结果 :DNA测序表明 ,重组新型hTNF αHEL的 3’末端序列与设计序列完全相同。将其转移到pBV2 2 0表达载体中 ,重组菌经 42℃诱导后做SDS PAGE分析 ,结果显示该重组体获得了表达 ,其表达量为菌体总蛋白量的 30 %,表达形式为包涵体 ,对该包涵体进行溶解和复性 ,再经阴离子交换柱纯化 ,获得的重组蛋白的纯度可达 90 %以上。免疫印迹鉴定结果证实 ,该表达蛋白可与抗TNF α抗体产生免疫反应。体外杀伤活性检测显示 ,该蛋白已完全丧失了新型TNF α的体外杀伤活性。结论 :上述实验证实 ,新型rhTNF α免疫抑制剂构建成功 ,该免疫抑制剂既保持了与TNF α抗体结合的能力又失去了TNF α的杀伤活性 ,为其下一步治疗作用的研究打下了基础。

鸡蛋白提取液诱导细胞后干细胞蛋白芯片分析

目的:分析鸡蛋白提取液与细胞共培养是否能升高干细胞蛋白的表达,使细胞向干细胞转化。方法:用四种细胞,做一个普通培养,一个50%鸡蛋白提取液共培养,培养3 d后,收集细胞,冻于-80℃,送公司做干细胞蛋白芯片检测。结果:C57-BMSC有3个蛋白发生了统计学意义的改变,TS-UC-MSC有1个蛋白发生了统计学意义的改变,293T有1个蛋白发生了统计学意义的改变,293T-GFP有1个蛋白发生了统计学意义的改变。结论:50%鸡蛋白提取液共培养细胞后,细胞发生了向干细胞转变的现象。

蛋形指数对拉萨白鸡种蛋孵化效果影响的研究

为研究蛋形指数(纵径/橫径)对拉萨白鸡种蛋孵化效果的影响,在相同孵化条件下,选用3世代47周龄拉萨白鸡种蛋1342枚,按照蛋形指数由小到大分为4组(Ⅰ~Ⅳ组,蛋形指数均值组间差异极显著)进行孵化,比较各组种蛋在孵化期不同时间点的蛋重、失重、失重率以及孵化成绩和雏鸡初生重。结果表明,种蛋在整个孵化期都处于稳定失重过程,孵化至第11日时,Ⅰ组种蛋的失重和失重率最大,分别为(3.35±1.30)g和(6.64±2.17)%;孵化至第20日时,Ⅱ组种蛋的失重和失重率最大,分为(6.66±1.43)g和(13.30±2.52)%;Ⅰ组种蛋的受精率、入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率及雏鸡初生重占入孵蛋重的百分比均最高,分别为98.23%、80.53%、81.98%、(69.82±3.55)%;Ⅲ组种蛋的雏鸡初生重最大,为(36.69±4.35)g,显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组(P<0.05)。综上提示,蛋形指数越大,种蛋失重和失重率越小,受精率越低。研究结果为了解拉萨白鸡种质特性,开展拉萨白鸡品种选育和种质资源开发提供了参考。

高海拔地区通过输氧对拉萨白鸡种蛋孵化效果的研究

为研究不同输氧浓度对拉萨白鸡种蛋孵化效果的影响,选用5世代拉萨白鸡种蛋进行孵化。试验分为8组,每组各1000枚拉萨白鸡种蛋,对照组全程不输氧,试验1组的氧气浓度为21.00%~22.50%,试验2组的氧气浓度为22.51%~23.50%,试验3组的氧气浓度为23.51%~24.50%,试验4组的氧气浓度为24.51%~25.50%,试验5组的氧气浓度为25.51%~26.50%,试验6组的氧气浓度为26.51%~27.50%,试验7组的氧气浓度为27.51%~28.50%。结果表明,试验7组的总出雏数、健雏个数、健雏率、入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率均最高,分别为:851羽、813羽、95.53%、85.10%、91.21%;试验7组的头照死胚个数、死精率、二照死胚个数、弱雏率、毛蛋个数、死胎率均最低,分别为:18枚、1.93%、29枚、3.88%、35枚、3.75%;对照组的无精蛋个数、头照死胚个数、死精率、二照死胚个数、死雏个数、死雏率、毛蛋个数、死胎率均最高,分别为:68枚、87枚、9.33%、146枚、8枚、1.42%、136枚、14.59%;对照组的受精蛋个数、受精率、总出雏数、健雏个数、健雏率、入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率均最低,分别为:932枚、93.20%、563羽、529羽、93.96%、56.30%、60.40%;试验2组的弱雏率均最高,为4.88%;试验6组的受精蛋个数、受精率、弱雏个数均最高,分别为:942枚、94.20%、37羽;试验6组的无精蛋个数、死雏率均最低,分别为:58枚、0.49%。通过该试验,为拉萨白鸡种蛋在高原上进行供氧孵化试验提供理论参考。

用鸡胚培养对虾白斑综合症病毒(WSSV)的研究

为探索对虾白斑综合症病毒(WSSV)能否在鸡胚中培养,基于稳定培养体系,将WSSV接种到SPF鸡胚中.收获接种3 d后死亡的鸡胚,从中提取病毒;将其再次接种到健康鸡胚中,传代5次后,由卵黄囊膜提取病毒,将其经肌肉注射至克氏原螯虾,结果实验组克氏原螯虾100%死亡,而对照组无死亡情况.对各代鸡胚及克氏原螯虾进行PCR和电镜检测,实验组呈WSSV阳性;电镜下,死亡鸡胚细胞中可见大量正在组装的病毒粒子;表明WSSV可用鸡胚进行培养.