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Canine Distemper Virus Utilizes Different Receptors to Infect Chicken Embryo Fibroblasts and Vero cells 被引量:1
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作者 Jun Chen Xiu Liang Pei-fu Chen 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第2期139-145,共7页
Inducing animal viruses to adapt to chicken embryos or chicken embryo fibroblasts(CEF) is a common method to develop attenuated live vaccines with full security.Canine distemper virus(CDV) also does this,but the mecha... Inducing animal viruses to adapt to chicken embryos or chicken embryo fibroblasts(CEF) is a common method to develop attenuated live vaccines with full security.Canine distemper virus(CDV) also does this,but the mechanisms and particular receptors remain unclear.Virus overlay protein blot assays were carried out on CEF membrane proteins,which were extracted respectively with a Mem-PER TM kit,a radioimmunoprecipitation assay buffer or a modified co-immunoprecipitation method,and revealed a common 57 kDa positive band that differed from the 42-kDa positive band in Vero cells and also from those receptors reported in lymphocytes and 293 cells,indicating a receptor diversity of CDV and the possibility of the 57-kDa protein acting as a receptor that is involved in adaptive infection of CDV Kunming strain to CEF. 展开更多
关键词 Canine distemper virus (CDV) Cellular receptor chicken embryo fibroblasts cef Vero cells Virus overlay protein blot assay
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中性红染色法检测人参皂苷及其衍生物对CEF增殖的影响 被引量:4
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作者 苏建青 褚秀玲 +3 位作者 李俊霞 付本懂 申海青 韦旭斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第35期17523-17525,17527,共4页
[目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作... [目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作用更明显。从药物对CEF细胞的不同作用时间点来看,以72 h的OD值和正常对照的差异最大,在24 h和正常对照组差异不显著。[结论]人参皂苷及其衍生物在中、低浓度能够促进CEF细胞的增殖,且药物作用具有时间依赖性。 展开更多
关键词 人参皂苷 衍生物 鸡胚成纤维细胞 安全浓度
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Effects of Proliferation of CEF with Ginsenoside and Its Derivatives 被引量:1
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作者 苏建青 褚秀玲 韦旭斌 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第6期97-100,167,共5页
Objective The research aimed to provide theoretical basis for studying anti-MDV mechanism of ginsenoside and its derivatives in vitro. Method Effects of ginsenoside and its derivatives on proliferation activity of c... Objective The research aimed to provide theoretical basis for studying anti-MDV mechanism of ginsenoside and its derivatives in vitro. Method Effects of ginsenoside and its derivatives on proliferation activity of chick embryo fibroblast (CEF) in vitro were determined by using neutral red dye absorption method. Result The results showed the proliferation effects of different drugs are not completely same, and are more obvious with low toxic drugs. Detected at different action times, the differences of OD values was biggest at 72 h when compared with normal control group, while there was no significant difference at 24 h. Conclusion Ginsenoside and its derivatives could promote the proliferation of CEF cells in medium as low concentrations, which have time-dependent characteristic. 展开更多
关键词 GINSENOSIDE DERIVATIVES chicken embryo fibroblast cef Safe concentration
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NDV基因Ⅶ型与基因Ⅱ型感染CEF后microRNA表达谱分析
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作者 薄一丹 庞洪泽 +5 位作者 赵款 雷白时 蒋文明 袁万哲 张武超 刘聚祥 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期105-112,F0003,共9页
本研究旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)流行株HB株(基因Ⅶ型)与疫苗株La Sota株(基因Ⅱ型)在感染鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)36 h后宿主细胞microRNA(miRNA)表达谱变化情况。通过高通量测序技术... 本研究旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)流行株HB株(基因Ⅶ型)与疫苗株La Sota株(基因Ⅱ型)在感染鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)36 h后宿主细胞microRNA(miRNA)表达谱变化情况。通过高通量测序技术分别对La Sota株与HB株感染CEF后36 h后的样本与参考鸡源基因组进行系统比对,筛选差异表达miRNA并对其靶基因进行GO功能注释以及KEGG通路富集。最后随机筛选5条miRNA通过实时荧光定量PCR(Real-time quantification PCR,RT-qPCR)进行验证。结果表明,La Sota与HB感染组中已知miRNA分别为56.9%和47.8%;La Sota与HB感染组通过差异性比较后共筛选出10条差异表达miRNA;通过对差异表达基因的靶基因进行GO与KEGG富集发现,其主要在细胞代谢、生物合成以及应激信号传导等通路上出现显著富集;RT-qPCR结果与RNA-seq结果趋势一致,证明了测序结果的可靠性。为进一步揭示不同NDV毒株感染CEF以及在感染过程中miRNA发挥的调控作用提供了研究基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基因Ⅶ型 基因Ⅱ型 miRNA 鸡胚成纤维细胞(cef)
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鸡胚成纤维细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定 被引量:7
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作者 祁小乐 陈玉明 +7 位作者 张礼洲 任宪刚 高立 高宏雷 秦立廷 王永强 高玉龙 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2013年第8期14-16,共3页
试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为... 试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为进一步研究重要禽源病毒与宿主细胞的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 cef CDNA文库 酵母双杂交
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鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建 被引量:4
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作者 刘伟 高玉龙 +2 位作者 高宏雷 王笑梅 许修宏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期413-417,共5页
鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规... 鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cDNA入门文库,其平均滴度为1.1×106cfu/mL,文库总容量为1.2×107cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入门文库转换为表达文库,经测定平均滴度为5×105cfu/mL,文库总容量为5.5×106cfu,平均插入片段为2411bp,重组率为100%。结果表明,所构建的文库具有较高的重组率和较大的库容量,可作为较高质量的文库来研究IBDV的相关基因,为研究病毒受体和病毒入侵途径,进一步了解IBDV的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞(cef) GATEWAY技术 CDNA表达文库 传染性法氏囊病病毒(IBDV)
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鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用 被引量:3
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作者 齐铁英 张亚华 +7 位作者 南锡 陆明哲 佐颖 姜力 齐琳 南文龙 武佳斌 李鑫 《中国兽药杂志》 2002年第11期45-47,共3页
采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样)。鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗... 采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样)。鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗。鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上。全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗。 展开更多
关键词 鸡全胚成纤维细胞 鸡痘细胞活疫苗生产 应用
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传染性法氏囊病病毒在鸡胚细胞上的优化繁殖 被引量:7
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作者 张立 张元兴 +1 位作者 严春 俞俊棠 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第6期707-711,共5页
研究了传染性法氏囊病病毒(IBDV)在鸡胚细胞上繁殖的优化条件,结果表明,鸡胚细胞体外增殖培养后对IBDV的敏感性并不减弱,而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化(体积分数在0.01~0.10范围内)对病毒的繁殖影响... 研究了传染性法氏囊病病毒(IBDV)在鸡胚细胞上繁殖的优化条件,结果表明,鸡胚细胞体外增殖培养后对IBDV的敏感性并不减弱,而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化(体积分数在0.01~0.10范围内)对病毒的繁殖影响不大。该病毒更适宜于稍偏酸性和较高温度下繁殖。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 病毒 鸡胚细胞 优化 繁殖
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不同接毒方法培养鸡痘细胞苗维持液与细胞内病毒含量的测定 被引量:1
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作者 袁建琴 高斌战 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第3期308-311,共4页
以同步接毒和异步接毒培养鸡痘细胞苗,在其他条件相同前提下,发现同步接毒维持液的pH变化、细胞病变与异步接毒存在一定差异。为明确两种接毒法对病毒增殖效果的影响,本试验分别对维持液和病变细胞的毒价进行了监测。经过试验测得同步... 以同步接毒和异步接毒培养鸡痘细胞苗,在其他条件相同前提下,发现同步接毒维持液的pH变化、细胞病变与异步接毒存在一定差异。为明确两种接毒法对病毒增殖效果的影响,本试验分别对维持液和病变细胞的毒价进行了监测。经过试验测得同步接毒法的细胞内含毒量明显高于异步接毒法。 展开更多
关键词 鸡痘苗 细胞苗 鸡胚成纤维细胞 同步接毒法 异步接毒法
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多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用 被引量:2
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作者 缪佶 鲍衍清 +2 位作者 邵红霞 钱琨 秦爱建 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第1期1-8,共8页
本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)检测方法,并对REV在鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast,CEF)上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的... 本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)检测方法,并对REV在鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast,CEF)上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计3对引物,利用重组质粒作为模板,绘制3种不同基因的标准曲线。检测结果显示,本研究建立了多重实时荧光PCR检测方法,所制备的标准品模板在108~101copies范围内与Ct值之间呈现良好的线性关系,且最低检出量为101copies。REV感染CEF后gag、env、LTR基因的拷贝数均先减少后增多。通过实时荧光PCR技术与间接免疫荧光方法检测,发现REV在CEF上复制的初始阶段呈现病毒适应过程,此后病毒大量复制,表现出明显的增长趋势。该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法,同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 鸡胚成纤维细胞 实时荧光PCR 复制
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中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究 被引量:8
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作者 布合丽倩穆·依明 赛福丁·阿不拉 +3 位作者 艾克拜尔·依明 胡安古丽·努尔别克 阿克珠利·努尔包 李昊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2737-2744,共8页
为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL... 为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL,选择安全浓度范围内的(39.06~625μg/mL)5种浓度的各级多糖,用3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药)检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP 50、CAP 30、CAP t、CAP 80和CAP 70均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP 50、CAP 30能显著抑制NDV感染CEF的作用(P<0.05),阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP 50及CAP 30的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。 展开更多
关键词 牛皮消多糖 鸡胚成纤维细胞 新城疫病毒 抗病毒
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一种优化鸡胚成纤维细胞制备方法及生长曲线测定 被引量:4
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作者 王友 尤永君 +2 位作者 徐兆强 罗冠群 王军 《中国动物保健》 2013年第7期17-20,共4页
鸡胚成纤维细胞(CEF)的来源方便,制备简单,耐受性好,且适合于许多病毒的生长繁殖,因此被广泛用于疫苗的生产、病毒的培养以及一些细胞和分子生物学的研究。然而传统的鸡胚成纤维细胞制备方法存在制备时间长、死细胞较多和细胞贴壁慢的... 鸡胚成纤维细胞(CEF)的来源方便,制备简单,耐受性好,且适合于许多病毒的生长繁殖,因此被广泛用于疫苗的生产、病毒的培养以及一些细胞和分子生物学的研究。然而传统的鸡胚成纤维细胞制备方法存在制备时间长、死细胞较多和细胞贴壁慢的问题。笔者根据经验摸索出一种实验室快速制备CEF的简便方法,并通过台盼蓝染色用细胞计数法绘制了原代CEF及次代CEF的生长曲线。该简便方法的建立为实验室快速制备高质量高纯度的鸡胚成纤维细胞提供了方便,同时对其生长曲线的测定也为进行基因转染方面的研究积累了资料。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞(cef) 简便方法 生长曲线 基因转染
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复方糖苷抗新城疫病毒感染作用 被引量:1
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作者 陆辉 蔡丙严 成大荣 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期713-718,共6页
采用2种方法研究了复方糖苷抗新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)感染作用。一是鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)培养法,通过观察NDV CPE的形成及测定CEF OD值的变化,计算病毒抑制率等指标,综合评价复方糖苷在细... 采用2种方法研究了复方糖苷抗新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)感染作用。一是鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)培养法,通过观察NDV CPE的形成及测定CEF OD值的变化,计算病毒抑制率等指标,综合评价复方糖苷在细胞水平上抗NDV作用,并从直接灭活病毒、阻断病毒吸附与生物合成及释放等环节,探讨了复方糖苷的抗NDV途径。二是将复方糖苷稀释成1 200,1 000,800,600,300μg/m L 5种浓度与100 EID50 NDV液混合后接种9日龄SPF鸡胚,于72 h后统计鸡胚的存活数并测定尿囊液血凝效价(HA),依此判定复方糖苷在鸡胚内抗NDV作用。结果表明:随着药物浓度的增加CPE的特征逐渐减弱,OD值明显升高,病毒抑制率增大,当复方糖苷质量浓度为600μg/m L时对NDV具有显著的直接杀灭与阻断吸附作用。HA在1 200,1 000μg/m L时均为0。表明复方糖苷具有显著的抗NDV感染作用。 展开更多
关键词 复方糖苷 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 鸡胚
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鸡MDV L-meq基因与该病毒感染的鸡胚成纤维细胞中p53基因的相关性 被引量:1
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作者 丁洪波 丁旭 +2 位作者 卜秀娟 吴涵 潘风光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1442-1444,1453,共4页
目的探讨鸡马立克病病毒(Marek disease virus,MDV)L-meq基因与MDV感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken em-bryo fibroblast,CEF)中p53基因的相关性。方法双酶切质粒pMD18-T-L-meq,获得L-meq基因片段,克隆入载体pcDNA3.1(+),构建重组真核表达... 目的探讨鸡马立克病病毒(Marek disease virus,MDV)L-meq基因与MDV感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken em-bryo fibroblast,CEF)中p53基因的相关性。方法双酶切质粒pMD18-T-L-meq,获得L-meq基因片段,克隆入载体pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA-L-meq,转染CEF细胞,利用实时定量RT-PCR检测转染细胞中p53基因mRNA的表达量,TRAP法检测转染细胞中端粒酶的活性,流式细胞术检测转染细胞细胞周期的变化。结果重组真核表达质粒pcDNA-L-meq经双酶切鉴定构建正确。转染L-meq基因后48 h,CEF细胞中p53基因mRNA的表达量略有升高,72 h时下降。转染L-meq基因后48、72 h,CEF细胞的端粒酶活性比未转染的CEF细胞分别高16、1个活力单位。转染L-meq基因后48 h,CEF细胞G0/G1期比例较转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞(对照)显著增加(P<0.01);转染后72 h,实验组G0/G1及G2/M期细胞比例较对照组显著增加(P<0.01);转染后48和72 h,S期细胞比例较对照组均显著减少(P<0.01)。结论 L-meq基因对MDV的增殖具有一定程度的抑制作用,在病毒的增殖过程中可能为一种转录抑制因子。 展开更多
关键词 马立克病病毒 L-meq基因 鸡胚成纤维细胞 基因 p53
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