低致病性禽流感病毒与禽病原性大肠杆菌的联合感染试验

以10^(5.17)ELD_（50）的低致病性禽流感病毒(mildlypathogenic avian influenza virus,MPAIV)气管内注射10日龄SPF鸡,24h后,重复感染一次;48h后,气管内注射禽病原性大肠杆菌353(018)、120(018)、037(078)、166(078)、058(02)、536(088)、132(011)和173(026)株,3×10~7CFU/羽,连续观察5d.结果:MPAIV单独感染组死亡率为13.33%;各大肠杆菌单独感染组的死亡率分别为353:100.00%、120:60.00%、037:80.00%、166:86.67%、058:100.00%、536:93.33%、132:86.67%和173:20.O0%;MPAIV与上述各分离株的联合感染组的死亡率分别为100.00%、93.33%、86.67%、93.33%、100.00%、100.00%和100.00%.

四株鸭源H3N8亚型禽流感病毒对SPF鸡的感染性分析

为评价鸭源H3N8亚型禽流感病毒对鸡的感染风险,作者选取了4株HA基因位于不同进化分支的病毒进行了SPF鸡的感染性试验。结果表明,这4株H3N8亚型禽流感病毒不需要提前适应就可以感染鸡,病毒对鸡不同脏器的组织嗜性存在较大差异。鸡感染病毒后未表现出明显的临床症状,大部分感染鸡可以通过呼吸道和消化道向外排毒。此外,DK/ZJ/S4088/2013和DK/GZ/S1245/2013这两株病毒还可以由感染组的鸡传播给接触组的鸡。综上所述,本研究中的4株鸭源H3N8亚型禽流感病毒具有感染鸡并在鸡群间传播的潜在风险,在家禽的饲养和流通环节中应尽量避免鸡群与鸭群的接触。

几种病毒与禽病原性大肠杆菌的人工联合感染

以 2种剂量的低致病性禽流感病毒 ( lowly pathogenic avian influenza virus,LPAIV)、传染性支气管炎病毒 ( infectious bronchitis virus,IBV)疫苗株 H1 2 0和 H52、新城疫病毒 ( Newcastle disease virus,NDV) La-sota株分别于气管内注射 1 0日龄易感鸡 ,2 d后 ,气管内注射禽病原性大肠杆菌 O37株 ( O78) ,连续观察 5d。结果 ,除 LPAIV单独感染组有 6 .2 5%的死亡率外 ,其余各病毒单独接种组均健活 ;大肠杆菌 O37株单独接种组的死亡率为 6 2 .50 % ;较高剂量的 LPAIV、IBV H1 2 0和 H52、NDV Lasota株与大肠杆菌 O37株有较强的协同致病作用 ,死亡率分别达到 81 .2 5%、1 0 0 .0 0 %、93.75%和 87.50 % ;而较低剂量的上述病毒则无明显的协同作用。 IBV。

基于音频特征和模糊神经网络的禽流感病鸡检测

为了能在早期发现禽流感并进行预防,该文提出了一种基于音频特征和模糊神经网络的禽流感病鸡检测方法。依据获取的家禽音频和环境及其他噪声的谱熵差别大的特点,在复杂环境中分析并提取出鸡声,丢弃非鸡声段,对提取的鸡声进行分析及处理,计算短时过零率、短时能量以及短时过零率与短时能量混合特征,用作判别患禽流感的病鸡和健康鸡的依据。利用T-S模糊神经网络,对提取出来的家禽音频特征进行训练和识别,试验表明隶属度函数为钟形函数、隶属度个数为2时模糊神经网络对试验提取的3个鸡声特征组成的3组测试集的敏感性分别为75.47%、80.39%和76.92%,特异性分别为80.85%、79.59%和72.92%,正确识别率分别为78%、80%和75%。该研究为规模化家禽养殖场及大型家禽流通市场的禽流感病禽识别提供一套快速、高效检测方法。

禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立

为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通过优化反应条件,建立了AIV和ChPV二重PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异好,能同时检测AIV和ChPV,对其他常见的禽病病原体均未反应;该法对AIV和ChPV的检测下限均为100fg;对159份临床样品检测结果与PCR阳性产物测序结果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,对AIV和ChPV的防制具有重要意义。

H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型的建立

为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量。感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至104.5EID50,滴鼻、点眼各0.1mL,对照组接种PBS,感染后24h放入同居鸡;感染后连续观察14d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量。结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID50)为10-8.167/0.1mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为104.5 EID50。感染模型试验结果显示,以104.5 EID50的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8d全部死亡;在感染和同居3d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P<0.05)。本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础。

MPAIV、NDV Lasota株分别与较低致病性禽源E.coli的联合感染试验

以 2× 1 0 5EID50 的低致病性禽流感病毒 ( mildly pathogenic avian influenza virus,MPAIV)、2× 1 0 6 EID50 新城疫病毒 L asota株( Newcastle disease virus Lasota strain,NDVL asota)气管内注射 1 0日龄 SPF鸡 ,2 4h后 ,同剂量、同法重复感染一次 ;48h后 ,分别气管内注射较低致病性禽病原性大肠杆菌 1 2 0( O1 8)和 1 73( O2 6 )株 ,2× 1 0 7CFU/羽 ,2 4h后同剂量、同法重复攻毒一次 ,连续观察 1 0d。结果 :MPAIV单独感染组死亡率为 53% ;NDV Lasota株单独攻毒组未见死亡 ;大肠杆菌 1 2 0株单独攻毒组死亡率为 40 % ,1 73株单独攻毒组死亡率为 7% ;MPAIV与大肠杆菌1 2 0株联合攻毒组的死亡率为 87% ,NDV L a-sota株与 1 2 0株联合攻毒组的死亡率为 40 % ;MPAIV与大肠杆菌 1 73株联合攻毒组的死亡率为 80 % ,NDV Lasota株与 1 73株联合攻毒组的死亡率为 2 0 %。

禽流感病毒H9N2与新城疫病毒在鸡成纤维细胞中共感染对病毒复制的影响

临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的复制情况进行了分析,设定以NDV和AIV共感染细胞后12和24h作为样品采集点,通过Western blot、间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测了两种病毒共感染与单独感染对病毒NP蛋白表达的相互影响。结果显示:Western blot分析表明共感染12和24h,NDV NP蛋白的表达分别下调了70.6%(P<0.001)和45.7%(P<0.001),AIV NP蛋白的表达分别下调了61.5%(P<0.001)和82.8%(P<0.001);免疫荧光分析显示共感染组细胞中NDV和AIV的NP蛋白丰度在感染12h时间点分别下调81.1%(P<0.001)和65.5%(P<0.001),24h时则分别下调41.2%(P<0.05)和47.4%(P<0.001);qPCR结果也证实共感染12和24h组NDV NP的mRNA表达水平分别下调了64.3%(P<0.001)和64.4%(P<0.05),AIV NP的mRNA表达水平分别下调了61.5%(P<0.001)和63.0%(P<0.001)。本研究证明AIV与NDV共感染在细胞水平上可引起病毒复制的相互抑制,为研究NDV和AIV共感染机制在细胞水平上奠定了基础。

民和县鸡新城疫和禽流感秋季集中免疫抗体检测

本文采用血凝—血凝抑制试验对民和县2020年秋季集中免疫鸡新城疫、禽流感后的鸡进行了免疫抗体检测,结果为:鸡新城疫免疫抗体群体合格率为88.5%,禽流感免疫抗体群体合格率为89%;鸡新城疫、禽流感群体免疫抗体合格率均达到农业部规定的≥70%以上,具有强的保护力;极少数乡镇的禽流感、鸡新城疫免疫抗体合格率较低,存在发生疫病的风险,建议补免,使其获得强的免疫力。

不同禽流感病毒含量的新-流二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平的监测

将未浓缩的新城疫抗原分别与未浓缩的、浓缩3倍、浓缩6倍的禽流感抗原混合,并制备成三组鸡新城疫、禽流感(H9N2 HP株)二联灭活疫苗(简称新-流二联灭活疫苗),分别免疫21日龄SPF鸡,每羽0.3 m L,同时设置未免疫的空白对照组,免疫组与对照组均在免疫前及免疫后7、14、21、28、35 d进行采血,检测新城疫和禽流感抗体。结果发现,各免疫组在免后不同日龄的新城疫抗体基本一致,禽流感病毒抗原浓缩倍数越高(即禽流感病毒含量越高)的新-流二联灭活疫苗,免后14、21 d的抗体也越高;从免后21 d开始,各免疫组的禽流感抗体水平差异逐渐减小,免疫后禽流感抗体水平的高低可以反映该疫苗的免疫效果。试验结果表明,该疫苗可以通过浓缩提高抗原病毒含量的方法来提高免后早期抗体水平,取得良好的早期免疫效果。

乌鲁木齐市2017年2起人感染H7N9禽流感疫情分析

目的对乌鲁木齐市2017年监测发现的2例人感染H7N9禽流感病例疫情进行调查分析,为人禽流感疫情防控提供有效参考依据。方法对患者、密切接触者和活禽市场开展流行病学调查,采集病例呼吸道标本和外环境标本应用实时荧光定量PCR(real-time PcR)方法,检测甲型流感病毒及H7N9禽流感病毒特异的核酸片段,进行分析。结果调查发现2例毫无关系患者同一天发热,先后检测出H7N9流感病毒核酸。2例患者均为男性,年龄相近,都有基础性疾病,经过救治,其中1例患者核酸检测转阴,症状消失救治成功。另1例患者核酸检测持续阳性,最终救治无效死亡。流行病学调查患者发病前7天均无活禽接触史,有相同的活禽宰杀点暴露史,经外环境采样,多份标本检测出禽流感病毒核酸。结论2例感染H7N9禽流感病例感染来源于受H7N9病毒污染的活禽宰杀店的可能性较大,建议加强沿街商铺的规范管理和卫生消毒工作,规范禽类宰杀与销售。医疗机构加强流感样病例监测和不明原因肺炎监测是及时发现人禽流感病例的重要手段。

山东省部分地区鸡源大肠杆菌与低致病性H9亚型禽流感病毒混合感染的调查

为了解近年来山东省鸡大肠杆菌与H9亚型禽流感病毒混合感染的情况,对2012年1月份至2014年3月份期间山东省部分地区送检的1 816份病料进行研究,通过大肠杆菌的分离鉴定和H9亚型禽流感病毒的血凝抑制试验,结果分离出大肠杆菌116例,占总病料的6.39%;检出H9亚型禽流感病毒495例,占总病料的27.26%;检出大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染46例,占总病料的2.53%;且混合感染检出率在第一、四季度较高;青岛、聊城地区大肠杆菌与H9亚型禽流感混合感染检出率高于潍坊和烟台。调查结果表明临床鸡大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染现象比较普遍,严重威胁着山东地区养殖业的发展。

应用鸡胚分离法分离人感染H7N9禽流感病毒的研究

目的 建立人感染H7N9禽流感病毒鸡胚分离法，并用病毒分离株进行血清抗体检测。方法 用SPF鸡胚接种人感染H7N9禽流感确诊病例的呼吸道标本，培养72 h后收获羊水和尿囊液测定血凝效价（HA）。用2株病毒分离株检测福建省首例患者急性期、恢复期及密切接触者血清抗体。结果 经鸡胚盲传2代后，5例患者的咽拭子标本均分离出该病毒。第2代分离物HA滴度（1∶32～1∶256）较第1代（1∶8～1∶32）明显提高。2株病毒分离株检测感染者血清，恢复期血清HI抗体滴度较急性期升高16倍，且2株检测结果一致。结论 用鸡胚分离法分离人感染H7N9禽流感病毒敏感性高，感染者在短期内可产生高滴度的HI抗体。

福建省首例人感染H5N6禽流感病例实验室诊断与病毒序列初步分析

目的分析福建省首例人感染H5N6禽流感病例的实验室检测结果，为今后实验室检测和疫情防控提供依据。方法采集患者咽拭子和外环境标本，提取病毒RNA，采用Real-time PCR方法检测标本H5N6亚型流感病毒，对病毒HA和NA基因片段采用一步法RT-PCR进行扩增并测序，利用生物信息学软件初步分析病毒进化特征。结果病例咽拭子标本经实验室确诊为H5N6亚型流感病毒，命名为：A/Fujian-Sanyuan/21099/2017（H5N6）；不同时间先后5次采集患者咽拭子标本，前3次仍检出H5N6流感阳性；采集43份外环境标本，检测出16份H5阳性标本；同源性分析发现A/Fujian-Sanyuan/21099/2017（H5N6）病毒的HA和NA基因分别高度同源于A/Cygnus atratus/Hubei/2Z2-O/2016（H5N8）病毒和A/chicken/Hubei/ZYSJF16/2016（H5N6）病毒，同源性分别达99.6%和99.0%；氨基酸分析发现，病毒HA基因切割位点具有多个连续的碱性氨基酸，氨基酸序列为：PLREKRRKR﹡GLF。结论该患者为福建省首例人感染高致病性H5N6禽流感病毒病例，该病毒HA和NA基因分别与H5N8和H5N6病毒基因高度相似。