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Type I strain of Toxoplasma gondii from chicken induced different immune responses with that from human,cat and swine in chicken 被引量:1
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作者 ZHAO Guang-wei WANG Shuai +8 位作者 WANG Wang ZHANG Zhen-chao XIE Qing ZHANG Meng IA Hassan YAN Ruo-feng SONG Xiao-kai XU Li-xin LI Xiang-rui 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2015年第5期956-965,共10页
In this study,four strains of Toxoplasma gondii with the same genetic type(Type I) originated from chicken,human,cat and swine were used to compare the immune responses in resistant chicken host to investigate the r... In this study,four strains of Toxoplasma gondii with the same genetic type(Type I) originated from chicken,human,cat and swine were used to compare the immune responses in resistant chicken host to investigate the relationships between the parasite origins and the pathogenicity in certain host.A total of 300,10-day-old chickens were allocated randomly into five groups which named JS(from chicken),CAT(from cat),CN(from swine),RH(from human) and a negative control group(—Ve) with 60 birds in each group.Tachyzoites of four different T.gondii strains(JS,CAT,CN and RH) were inoculated intraperitoneally with the dose of 1×10~7 in the four designed groups,respectively.The negative control(-Ve) group was mockly inoculated with phosphate-buffered saline(PBS) alone.Blood and spleen samples were obtained on the day of inoculation(day 0) and at days 4,11,25,39 and 53 post-infection to screen the immunopathological changes.The results demonstrated some different immune characters of T.gondii infected chickens with that of mice or swine previous reported.These differences included up-regulation of major histocompatibility complex class Ⅱ(MHC Ⅱ) molecules in the early stage of infection,early peak expressions of interleukin(IL)-12(IL-12) and-10(IL-10) and long keep of IL-17.These might partially contribute to the resistance of chicken to T.gondii infection.Comparisons to chickens infected with strains from human,cat and swine,chickens infected with strain from chicken showed significant high levels of CD4~+ and CD8~+ T cells,interferon gamma(IFN-γ),IL-12 and IL-10.It suggested that the strain from chicken had different ability to stimulate cellular immunity in chicken. 展开更多
关键词 chicken Toxoplasma swine pathogenicity parasite inoculated infected immunity inoculation interleukin
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Preliminary Study on the Antigenic Relation of vIL-8 Encoded by Marek's Disease Virus and Chicken IL-8(cIL8)
2
作者 GAO Wei QIN Ai-jian JIN Wen-jie SHAO Hong-xia 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第B12期57-61,共5页
Interleukin-8 homolog (vIL-8) is a chemokine encoded by the genome of Marek's disease virus. Chicken IL-8 (cIL8) is an important chemokine of chickens which plays a role in antiviral activity. To explore the relat... Interleukin-8 homolog (vIL-8) is a chemokine encoded by the genome of Marek's disease virus. Chicken IL-8 (cIL8) is an important chemokine of chickens which plays a role in antiviral activity. To explore the relationship between vIL-8 and cIL8 can help to discern the function of vIL-8. In this study, the amino acid sequences of vIL-8 and cIL8 were aligned. The cIL8 gene was expressed in E. coli and the cIL8 fusion protein was obtained, after induction with IPTG. The protein was separated by SDS-PAGE and the band of interest was excised and minced for mouse immunization. An immunofluorescence test was used to detect vIL-8 expression in insect cells. The results showed that both vIL-8 and cIL8 were typical CXC chemokines in structure, and they had similar key amino acids, known to be important for receptor binding. The result of the immunofluorescence test showed that the mouse anti-cIL8 serum could react with vIL-8 expressed by insect cells. Therefore, vIL-8 shares common antigenic determinants with cIL8, and they may have a common receptor. This feature of vIL-8 suggests that it may participate in the immune evasion of the virus. 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 VIL-8 共同抗原 白细胞介素-8 编码 SDS-PAGE 病毒基因组 氨基酸序列
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H9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答 被引量:1
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作者 刘智民 任鹏飞 +9 位作者 韩心语 乔梦丽 牛胜 王颖 任建乐 赵宇军 张鼎 范瑞文 毕玉海 田文霞 《山西农业科学》 2023年第11期1323-1330,共8页
为研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)感染鸡红细胞后白细胞介素(ILs)参与的免疫应答反应,进一步揭示鸡红细胞在感染H9N2亚型禽流感病毒中所发挥的免疫调节作用,应用实时荧光定量PCR技术分别对体外感染H9N2 AIV后0、2、6、10 h和体内攻毒... 为研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)感染鸡红细胞后白细胞介素(ILs)参与的免疫应答反应,进一步揭示鸡红细胞在感染H9N2亚型禽流感病毒中所发挥的免疫调节作用,应用实时荧光定量PCR技术分别对体外感染H9N2 AIV后0、2、6、10 h和体内攻毒3、7、14 d后8种白细胞介素相关基因(IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-34)的表达水平进行检测。结果表明,8种ILs相关基因均在鸡红细胞中表达,其表达水平在体外感染H9N2 AIV后和体内攻毒后呈现动态变化;与对照组相比,体外感染H9N2 AIV后不同时间点IL-6和IL-18的相对表达量呈现逐渐升高的趋势,而IL-7、IL-12、IL-15的相对表达量呈现逐渐下降的趋势;IL-13在感染H9N2 AIV后的0、6 h显著下降,而IL-16仅在感染H9N2 AIV后的2 h显著下降。体内攻毒后的不同时间点,IL-12、IL-13、IL-15、IL-16的相对表达水平均逐渐升高,而IL-6、IL-18、IL-34的表达水平先升高后降低,仅IL-7表达水平先降低后升高。综上,鸡感染H9N2 AIV后红细胞发生了相应的免疫应答反应,并通过促炎因子以及抗炎因子的表达来调节鸡感染H9N2后的免疫应答。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 鸡红细胞 SPF鸡 白细胞介素
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鸡IL-17A真核表达质粒的构建及其对IBD rVP2亚单位疫苗的免疫佐剂效应 被引量:1
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作者 王玉俭 郑倩 解欣斐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期396-402,共7页
为探究鸡白介素-17A(IL-17A)真核表达质粒对鸡传染性法氏囊病(IBD)rVP2亚单位疫苗的免疫佐剂效应,本研究采用RT-PCR方法扩增鸡IL-17A基因,将其克隆于原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-chIL-17A,将其转化BL21(DE3)大肠杆菌,诱... 为探究鸡白介素-17A(IL-17A)真核表达质粒对鸡传染性法氏囊病(IBD)rVP2亚单位疫苗的免疫佐剂效应,本研究采用RT-PCR方法扩增鸡IL-17A基因,将其克隆于原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-chIL-17A,将其转化BL21(DE3)大肠杆菌,诱导表达重组蛋白rchIL-17A,通过SDS-PAGE检测后,经His色谱层析柱纯化rchIL-17A,纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并通过ELISA鉴定。同时将鸡IL-17A基因克隆于真核表达载体pVAXI中构建重组质粒pVAX-chIL-17A,将pVAX-chIL-17A肌肉注射鸡7 d后经western blot检测其的表达。将21日龄SPF鸡随机分为4组,分别为对照组、pVAX-chIL-17A组、rVP亚单位疫苗组、pVAX-chIL-17A+rVP亚单位疫苗组,免疫后通过ELISA检测各组鸡血清中IBD病毒(IBDV)特异性抗体水平(0、14 d、28 d、42 d和56 d)和IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IFN-γ及TNF-α的分泌水平(28 d),通过流式细胞术检测各组鸡脾细胞中CD4+T和CD8+T细胞亚群的比例(14 d和28 d)。RT-PCR扩增结果显示获得了约为420 bp的目的片段,并构建原核表达质粒后经诱导纯化后得到了rchIL-17A;将其免疫小鼠后经ELISA检测,结果显示获得了其多克隆抗体。将构建的重组质粒pVAX-chIL-17A免疫鸡后,western blot分析结果显示,注射部位肌肉组织中目的蛋白正确表达。将SPF鸡分组免疫后,ELISA检测结果显示,pVAX-chIL-17A+IBD rVP2亚单位疫苗组各时间点的IBDV特异性抗体水平均显著或极显著高于rVP2亚单位疫苗单独免疫组(P<0.05、P<0.01、P<0.001);pVAX-chIL-17A单独及与rVP2亚单位疫苗共同免疫28 d后,鸡血清中IL-2、IL-6、IL-17A及TNF-α的分泌水平相较其它组显著提高(P<0.05、P<0.01),而IFN-γ和IL-4分泌水平无明显变化。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,单独免疫pVAX-chIL-17A 14 d及28 d后鸡脾细胞中CD4+T和CD8+T细胞的占比均极显著增加(P<0.01、P<0.001);与rVP亚单位疫苗单独免疫组相比,pVAX-chIL-17A与rVP2亚单位疫苗共同免疫14 d及28 d后鸡脾细胞中CD4+T和CD8+T细胞的占比均显著增加(P<0.001);pVAX-chIL-17A与rVP2亚单位疫苗共同免疫28 d后鸡脾细胞CD4+T/CD8+T细胞比值极显著高于rVP2亚单位疫苗单独免疫组(P<0.001)。本研究首次证实pVAX-chIL-17A可以显著增强IBD基因工程亚单位疫苗(rVP2)的免疫水平,为新型高效鸡免疫佐剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 白介素-17A 佐剂 真核表达
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鸡白细胞介素2增强传染性法氏囊病病毒多聚蛋白DNA疫苗免疫原性的研究 被引量:36
5
作者 于涟 李建荣 +2 位作者 黄耀伟 梁雪芽 孟松树 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期652-657,共6页
鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d... 鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d后二免 ,二免后 3d攻击标准强毒株。结果表明共注射鸡IL 2质粒能明显增强DNA疫苗对强毒攻击 ,保护率达 80 % ;能增强DNA疫苗诱导的中和抗体效价 (P <0 0 5 ) ;能显著促进鸡胸腺、脾脏和外周血液T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应 (P <0 0 5 )。这些结果提示鸡IL 2能明显增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫原性 ,是一种优良的禽类DNA疫苗佐剂。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 IL-2 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白基因 DNA疫苗 免疫原性
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鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量:16
6
作者 闫若潜 谢彩华 +3 位作者 吴志明 张志凌 刘光辉 刘梅芬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期594-604,共11页
【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡... 【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。【结果】成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。IFN-α活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性。【结论】rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素2 嵌合基因 融合表达 活性
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鸡IL-2和IL-15基因真核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用 被引量:10
7
作者 胡慧琼 王红宁 +5 位作者 袁斌 周生 李晓英 黄勇 柳萍 徐永莉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期805-810,共6页
根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物,采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因,与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15,研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,免疫... 根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物,采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因,与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15,研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,免疫后第10d,pDNAIL-15+AI灭活疫苗组和pDNAIL-2+AI灭活疫苗组HI抗体水平显著高于AI灭活疫苗组(P<0.05)。免疫后第10 d,pDNAIL-15+AI灭活疫苗组CD4+淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-2+AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组(P<0.05);免疫后第23 d,pDNAIL-2+AI灭活疫苗组CD4+淋巴细胞百分率显著高于pDNAIL-15+AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组(P<0.05)。证实pDNAIL-2和pDNAIL-15能提高禽流感灭活疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-2 鸡白细胞介素-15 禽流感疫苗 HI抗体
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鸡白细胞介素-6的原核表达及其对疫苗免疫增强效果的研究 被引量:10
8
作者 谢彩华 闫若潜 +4 位作者 崔保安 赵雪丽 吴志明 张志凌 张健 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期557-561,共5页
本研究采用PCR技术,扩增、克隆了鸡白细胞介素-6(ChIL-6)成熟肽基因并进行原核表达,对表达的鸡白细胞介素-6组蛋白(rChIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,经测定rChIL-6的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评... 本研究采用PCR技术,扩增、克隆了鸡白细胞介素-6(ChIL-6)成熟肽基因并进行原核表达,对表达的鸡白细胞介素-6组蛋白(rChIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,经测定rChIL-6的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评估重组蛋白的生物学活性;用4个不同浓度的rChIL-6在不同部位与NDV活疫苗、AIVH5N1灭活疫苗同时肌肉注射来评价其免疫增强作用。研究结果表明,表达rChIL-6为25ku左右,经纯化后的蛋白纯度在95%以上;100pg/mLrChIL-6注射组具有较高的促小鼠脾淋巴母细胞增殖活性;不同浓度的rChIL-6注射组对NDV和AIVH5N1疫苗都具有较好的免疫增强作用,但对其免疫抗体产生时间及抗体滴度峰值出现和维持时间均没有明显的影响,其中0.03μg/mLrChIL-6浓度注射组的对鸡疫苗的免疫增强作用最明显,过高或过低浓度的rChIL-6对疫苗免疫增强作用不显著。这些研究为新型免疫增强佐剂开发以及鸡免疫失败性疫病的预防和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-6 基因克隆 蛋白表达 免疫活性 免疫增强
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ChIL-2对H_5亚型AIV疫苗免疫增强作用研究 被引量:7
9
作者 刘岩 由振强 +2 位作者 许健 郑江涛 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期797-801,共5页
鸡白细胞介素2真核表达质粒pCI-IL-2及原核表达重组鸡白细胞介素2(rChIL-2)分别与H5亚型禽流感油乳剂灭活苗联合使用,25日龄首免,40日龄时加强免疫.MTT法检测各组鸡外周血淋巴T细胞增殖,HI试验监测H5亚型禽流感抗体水平的消长规律,结果... 鸡白细胞介素2真核表达质粒pCI-IL-2及原核表达重组鸡白细胞介素2(rChIL-2)分别与H5亚型禽流感油乳剂灭活苗联合使用,25日龄首免,40日龄时加强免疫.MTT法检测各组鸡外周血淋巴T细胞增殖,HI试验监测H5亚型禽流感抗体水平的消长规律,结果表明:pCI-IL-2及rChIL-2均能显著增强AIV疫苗的免疫效果(P<0.05),pCI-IL-2和rChIL-2两组间差异不显著(P>0.05);证实鸡白细胞介素2对H5亚型禽流感疫苗有免疫增强作用.rChIL-2协同免疫组MTT及HI试验均在第四周达到峰值,pCI-IL-2协同免役组峰值出现时间稍晚,但随后质粒免疫组可维持在更高的水平值.提示IL-2蛋白的作用更迅速,IL-2质粒作用更持久. 展开更多
关键词 白细胞介素2 AIV MTT HI 免疫增强
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鸡白细胞介素18成熟蛋白全长基因的克隆与序列测定 被引量:8
10
作者 胡敬东 崔治中 +2 位作者 范伟兴 刘文强 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期119-121,共3页
根据已发表的鸡白细胞介素 18(IL- 18)成熟蛋白的 c DNA序列 ,设计 1对特异性引物 ,应用 RT- PCR从脂多糖(L PS)刺激 10 h活化的 MDCC- MSB1细胞中克隆到编码鸡 IL - 18成熟活性蛋白的完整基因片段 ,其大小为 5 10 bp。经序列测定证实 ... 根据已发表的鸡白细胞介素 18(IL- 18)成熟蛋白的 c DNA序列 ,设计 1对特异性引物 ,应用 RT- PCR从脂多糖(L PS)刺激 10 h活化的 MDCC- MSB1细胞中克隆到编码鸡 IL - 18成熟活性蛋白的完整基因片段 ,其大小为 5 10 bp。经序列测定证实 ,所获得的 c DNA基因序列与文献报道的结果完全一致 ,从而为进一步研究鸡 IL- 18的基因表达、生物学活性以及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素18 基因 克隆 序列测定
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重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定 被引量:7
11
作者 陈吉刚 陈维虎 +5 位作者 周继勇 王金勇 齐静 郑肖娟 俞照正 孙红霞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1034-1039,共6页
将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2... 将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。 展开更多
关键词 重组鸡白细胞介素2 诱导表达 生物学活性 单克隆抗体 多克隆抗体 抗原捕获ELISA 淋巴因子
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海兰鸡白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析 被引量:9
12
作者 陈红英 崔保安 +2 位作者 黄青云 李新生 王学斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期48-50,共3页
白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Thl型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其... 白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Thl型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与在GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡IL-18基因 克隆 序列测定
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鸡IL-18cDNA的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 被引量:9
13
作者 胡敬东 崔治中 赵宏坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期264-268,共5页
运用RT PCR方法,从经脂多糖(LPS)诱导的鸡马立克氏病成淋巴细胞样细胞系 MDCC MSB1 总 RNA中扩增得到了鸡白细胞介素18(Chicken interleukin 18,ChIL 18)成熟蛋白基因的 cDNA,并将其克隆到 pMD18 T载体上。DNA序列测定表明,克隆得到的Ch... 运用RT PCR方法,从经脂多糖(LPS)诱导的鸡马立克氏病成淋巴细胞样细胞系 MDCC MSB1 总 RNA中扩增得到了鸡白细胞介素18(Chicken interleukin 18,ChIL 18)成熟蛋白基因的 cDNA,并将其克隆到 pMD18 T载体上。DNA序列测定表明,克隆得到的ChIL 18 cDNA与国外报道的完全一致,包括终止密码子在内其编码区的长度为510bp,编码169个氨基酸残基的蛋白质。将ChIL 18 成熟肽段编码区定向克隆到原核表达载体 pGEX 6P 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,构建成原核表达质粒 pGEX ChIL18。该质粒的 BL21(DE3)LysS转化菌在 IPTG的诱导下可高效表达GST ChIL18基因融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的32%。 展开更多
关键词 IL-18 克隆 DNA GST 诱导 编码区 白细胞介素18 高效表达 原核表达质粒 IPTG
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白细胞介素18和鸡白细胞介素18 被引量:12
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作者 潘蔚绮 李广兴 刘胜旺 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期123-128,共6页
白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 1... 白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 18具有多种生物学功能 ,它不仅可以增强 Th1型免疫反应 ,而且在 Th2型免疫反应中也发挥一定的作用。人类医学研究证明 IL- 18在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力。在集约化畜禽养殖业中 ,包括白细胞介素 18在内的细胞因子作为天然的免疫调节剂 ,目前已被公认为是一种可以替代传统疗法的新型治疗剂。鸡 IL- 18基因是最近才被发现的 ,由于它具有与人和哺乳动物相似的生物学功能 ,因而鸡 IL- 18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义。 展开更多
关键词 白细胞介素18 鸡白细胞介素18 细胞因子 免疫调节剂 分布 分子结构 受体 生物学功能
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重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响 被引量:9
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作者 李宏梅 胡敬东 +4 位作者 郭慧君 郑玉姝 刘翠艳 田兆菊 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期624-627,共4页
用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们... 用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。 展开更多
关键词 重组鸡白细胞介素-18(rChIL-18) 细胞杀伤活性 马立克氏病病毒 细胞免疫 SPF鸡
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固始鸡白细胞介素2基因的克隆、表达及其表达蛋白活性的检测 被引量:8
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作者 王彦彬 卢中华 +5 位作者 康相涛 宋素芳 孙桂荣 韩瑞丽 李国喜 李守义 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第5期66-71,共6页
参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的 20~35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段,IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒 pGEM-T-chIL-2。测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白... 参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的 20~35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段,IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒 pGEM-T-chIL-2。测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白细胞介素2基因与GenBank上已发表的序列相比,存在2 个核苷酸变异。重新设计表达引物,以克隆质粒pGEM-T—chIL一2为模板PCR扩增表达片段,对表达片段进行 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切,连接到作同样双酶切的pET28a表达载体上,鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行IPTG 诱导表达,然后对表达产物进行SDS-PAGE电泳鉴定,结果表明,表达蛋白主要以包涵体的形式存在,表达蛋白分子质量约为18 ku;目的蛋白表达量占总量的18%。体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性。 展开更多
关键词 固始鸡 白细胞介素2 原核表达 生物活性
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鸡白细胞介素4基因的克隆及其原核表达 被引量:8
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作者 戴华 郑佳玉 +3 位作者 陈俊华 孙林 潘志明 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期473-477,共5页
应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获... 应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获得表达,融合蛋白大小分别为38ku和18ku,Westernblot结果也显示,在相对分子质量38ku和18ku位置有特异性条带。这为重组ChIL-4的规模化生产、疫苗佐剂的研制及其单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-4 CDNA 克隆 表达
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鸡白细胞介素2口服免疫佐剂增强传染性法氏囊病病毒DNA疫苗免疫效果的研究 被引量:12
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作者 谢荣辉 万旺军 +2 位作者 李龙 李建荣 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期237-242,共6页
将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素... 将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素2口服免疫增强剂具有相对的安全性.重组ZJ111/pCI-IL-2菌能明显增强IBDV DNA疫苗对强毒株攻击保护率;增强IBDV DNA疫苗诱导的抗体的效价(P<0.05);增强IBDV DNA疫苗所诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).上述结果初步表明以减毒沙门氏菌为载体的白细胞介素2免疫增强剂具有良好的安全性和免疫增强作用,为研制低成本、实用化的禽类口服免疫增强剂奠定了基础. 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 传染性法氏囊病病毒 免疫增强
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鸡IL-2基因的克隆及序列测定 被引量:15
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作者 陈奖励 王欢 +4 位作者 宋英晖 宋秀龙 陈红岩 姜永厚 卢景良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2000年第4期11-13,共3页
应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载... 应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载体 ,克隆了扩增片段 ,经酶切鉴定及 DNA序列测定 ,确认为鸡 IL- 2基因 ,该序列与 Sundick报道的结果一致。对氨基酸的比较发现 ,鸡 IL - 2与牛 IL - 2和 IL - 15之间分别存在着 2 4 %及4 4 %的同源性 ,该基因系国内首次获得经序列测定证实的鸡 IL- 2 c DNA基因 ,这为今后进一步进行鸡 IL- 展开更多
关键词 鸡IL-2 分子克隆 RT-PCR 免疫传剂 预防接种
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鸡白介素-6(ChIL-6)基因的克隆与序列分析 被引量:11
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作者 孙建和 陆苹 蒋静 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-3,共3页
分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡 ,无菌取处理鸡的脾脏 ,匀浆后用Tr izol抽提细胞总RNA ,应用随机引物反转录获得cDNA ,设计引物 ,经PCR扩增获得鸡白介素 - 6 (ChIL - 6 )基因 ,应用pGEM -T载体克隆该基因 ,经测... 分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡 ,无菌取处理鸡的脾脏 ,匀浆后用Tr izol抽提细胞总RNA ,应用随机引物反转录获得cDNA ,设计引物 ,经PCR扩增获得鸡白介素 - 6 (ChIL - 6 )基因 ,应用pGEM -T载体克隆该基因 ,经测序 ,表明其与GeneBank中公布的唯一的一个ChIL - 6基因为同源基因。 展开更多
关键词 ChIL-6基因 基因克隆 鸡细胞因子基因 白介素-6 序列分析
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