The SNPs C.513A>T in the MHC B-F gene and rs15001532 in the SPOCK1 gene are associated with Salmonella pullorum disease resistance in chickens

supported by the Earmarked Fund for the Modern Agroindustry Technology Research System, China （CARS-41）;the National High Technology Research and Development Program of China （2011AA100301）

云南省某乌骨鸡种鸡场鸡白痢沙门氏菌分子生物学特性研究

为了明确云南省某乌骨鸡种鸡场鸡白痢沙门氏菌的分子生物学特性,试验收集了90份18~21日龄的未出壳死胚样品和100份下痢鸡的泄殖腔棉拭子,采用沙门氏菌属血清诊断试剂盒和PCR方法进行病原菌的分离鉴定,并对分离菌进行MLST分型、药敏试验、毒力基因和耐药基因检测。结果表明:在90份未出壳死胚样品中共分离到80株鸡白痢沙门氏菌(88.89%,80/90),而泄殖腔棉拭子样品中未分离到鸡白痢沙门氏菌。80株鸡白痢沙门氏菌均为ST92型(100%,80/80);均携带invA、hilA、sefA、sipA、sipC、sopB、sopE、spvC、ssaR、ssrA、stn P1等11种毒力基因,均未检出毒力基因pef A和rck;对红霉素的耐药率最高,为93.75%(75/80),而对氧氟沙星、庆大霉素、氟苯尼考、多黏菌素B、多西环素、加替沙星、氨苄西林、阿莫西林、头孢西丁、头孢他啶、链霉素、四环素和复方新诺明均敏感;均未检出耐药基因,与耐药表型一致。说明从云南省某乌骨鸡种鸡场分离到的鸡白痢沙门氏菌来源单一,80株鸡白痢沙门氏菌均携带11种毒力基因,提示其毒力较强;除了红霉素外,对其他药物均敏感,提示该乌骨鸡种鸡场用药相对安全。

2021-2023年安溪县鸡白痢血清学调查

为了解安溪县鸡白痢流行情况,于2021-2023年对安溪县4家规模蛋鸡场、随机抽取24个乡镇的34家中小规模场、61家散户进行鸡白痢血清学调查。通过调查发现,不同养殖年份、养殖条件下鸡群鸡白痢的感染程度不同,散户的鸡白痢感染率(30.33%)高于规模蛋鸡场(7.26%)和中小规模养鸡场(15.80%),母鸡鸡白痢感染率(18.91%)略高于公鸡的感染率(17.92%)。总体分析可知,安溪县鸡群中鸡白痢感染情况普遍存在,感染水平与多个因素有关。亟需开展鸡白痢病种的净化工作,通过检测淘汰阳性鸡,并加强生物安全措施,达到区域净化该病种的效果。

RAPD技术在志贺菌及沙门菌鉴别中的应用

以鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌和痢疾志贺菌为研究对象,分别提取基因组DNA,利用6条随机引物以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析.结果表明,4条随机引物能较好地在这3种菌中检测到多态性分子标记.共扩增出了59个DNA片段,其中3个菌株共有的谱带有7条,而显示多态性的片段有52条,占88.1%.引物P6的扩增图谱可用于3株细菌的鉴别.在对3株细菌扩增中发现,鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌的扩增条带相同率达67%,但各有自己的特征性谱带.鸡沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远.

饲喂乳杆菌对雏鸡生长性能的影响

分别用６０羽依沙褐雏鸡饲喂鸡源乳杆菌，试验组与对照组相比，平均日增重提高了２４．４％（Ｐ＜０．０５）。人工感染鸡白痢沙门氏菌后，饲喂乳杆菌组死亡率同未饲喂乳杆菌组相比，死亡率降低了２０％（Ｐ＜０．０１）。表明鸡源乳杆菌制剂是一种安全。

麻鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定和中药对其耐药性的消除作用

通过菌落形态、革兰氏染色、生化试验、运动力检查、全血平板凝集试验以及动物致病性试验对死亡麻鸡组织中分离的细菌进行了鉴定，确定为鸡白痢沙门氏菌。通过药敏试验证明，麻鸡白痢沙门氏菌对阿莫西林、氨苄西林、卡那霉素、氟苯尼考、利福平高度敏感，对头孢噻肟、头孢拉啶、头孢曲松纳、庆大霉素、泰乐菌素、硫红霉素、粘杆菌素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星以及恩诺沙星不敏感。麻鸡白痢沙门氏菌分别与双黄连和三黄片两种中药作用后，大多数抗菌药物的抑菌环都扩大0．6～6．3mm，部分药物的敏感性发生了变化。

粪菌移植对雏鸡生长性能、血清白痢阳性率和屠宰性能的影响

为探讨粪菌移植对雏鸡的生长性能、血清白痢阳性率和屠宰性能的影响,选择972羽健康、1日龄雏鸡,随机分为6组,每组9个重复,每个重复18羽。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加2%、4%、6%、8%、10%粪菌液的日粮10 d,然后改为投喂基础饲料至35日龄。结果表明:在1~14 d阶段,添加粪菌液对雏鸡的成活率、平均日采食量、平均日增重、料重比影响不显著(P> 0.05);在15~35 d和1~35 d阶段,2%粪菌液组鸡的平均成活率最高,分别较对照组提高了6.20%、8.17%(P <0.05);2%粪菌液组鸡的平均日增重均最高,分别较对照组提高了68.74%、29.06%(P <0.05);2%粪菌液组鸡的平均料重比最低,分别较对照组降低了53.70%、36.44%(P <0.05);2%粪菌液组35日龄鸡的血清白痢阳性率最低,较对照组降低了44.14%(P <0.05)。添加2%粪菌液能提高雏鸡屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率,但较对照组差异不显著(P> 0.05)。研究表明,粪菌移植能够显著提高雏鸡生长性能,显著降低雏鸡血清白痢阳性率,其中添加2%粪菌液的效果最好。

江西地方品种鸡禽白血病病毒及鸡白痢沙门氏菌感染状况的研究

禽白血病毒(ALV)和鸡白痢沙门氏菌(SP)均可以垂直传播。通过禽白血病病毒(ALV)J亚群抗体和群特异性P27抗原的商品化ELISA检测试剂盒和全血平板法等调查了江西省13个种鸡企业的8个地方品种鸡群ALV和SP的感染情况,结果显示:ALV-P27抗原、ALV-J抗体均有检出,江西省地方鸡ALV-J亚型感染相当严重,迫切需要净化。江西地方品种鸡白痢沙门氏菌感染率相差较大,同一品种鸡在不同场之间的SP感染率差异明显。生物安全措施会影响鸡白痢的感染情况,在鸡白痢的净化过程中,采取严格的淘汰制度的同时,必须加强饲养管理措施来控制鸡白痢的发生。

新杨黑与苏禽绿壳蛋鸡鸡白痢的检测与净化研究

目的研究地方品种鸡场核心种鸡群鸡白痢的感染状态与净化成效。方法分别于15、19、23、27、35周龄按10%的比例集姜堰市某蛋鸡场新杨黑、苏禽绿壳2个地方品种鸡群的全血样本,用鸡白痢平板凝集抗原进行抗体监测。根据血清学监测结果及现场剖检病变,无菌采集疑似沙门氏菌感染的肝、脾等组织,进行沙门氏菌的分离鉴定及高敏药物选择实验。采取淘汰阳性鸡、加强饲养管理及高敏药物防治等措施进行鸡白痢的净化。结果鸡白痢的净化效果显著,新杨黑鸡鸡白痢血清抗体总阳性率由15周龄的27.33%下降至35周龄的0.67%。苏禽绿壳鸡鸡白痢血清抗体总阳性率由15周龄的36.67%下降至35周龄的1.33%。结论通过连续5次的检测、净化措施,鸡白痢的净化取得了显著的成交。为该地区地方鸡品种蛋鸡场鸡白痢的净化提供了实践依据。

鸡源鲍氏志贺菌的RAPD分析

【目的】确定鸡源鲍氏志贺菌的进化地位。【方法】选用6条随机引物（P1～P6）,采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,对1株鸡源鲍氏志贺菌、2株鸡白痢沙门菌、2株鸡肠致病性大肠杆菌和2株痢疾志贺菌共7株菌的基因组DNA进行分析,同时对个别特殊序列进行克隆测序,并在此基础上分析了鸡源鲍氏志贺菌与其他15个相关菌株的进化关系。【结果】6条随机引物中有4条引物（P1,P2,P4和P6）能较好地在志贺菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡致病性大肠杆菌3种菌中检测到多态性分子标记;这4条有效引物共扩增出了64个DNA片段,其中7个菌株共有的谱带有3条,多态性片段有61条,多态率达95.3%。引物P2可根据扩增图谱将志贺菌和大肠杆菌与沙门菌鉴别出来;用引物P6对上述7株细菌进行扩增,发现同种菌株间谱带特别相似,其中鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌扩增条带的相同率达66.7%,与鸡肠致病性大肠杆菌扩增条带的相同率达44.4%,而鸡白痢沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远,可用于3种细菌的鉴别。对扩增片段进行的测序及进化分析结果显示,鸡源鲍氏志贺菌与人源志贺菌的进化距离最近。【结论】鸡源鲍氏志贺菌可能是人源志贺菌的一个变异株或新的亚种。

EM防治雏鸡白痢的试验

用ＥＭ防治雏鸡白痢，主要是促进雏鸡肠道正常菌群的形成，抑制鸡白痢沙门氏菌的生长，以及通过ＥＭ中放线菌群所产生的对敏感微生物有选择性的抗生素对鸡白痢沙门氏菌的杀灭作用，从而达到防治雏鸡白痢的目的。本试验通过对雏鸡进行ＥＭ饮水和饲喂ＥＭ发酵饲料，有效地防治了雏鸡白痢。

鸡鲍氏志贺菌与痢疾志贺菌鸡白痢沙门菌及肠致病性大肠杆菌RAPD鉴别方法的建立

利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌、肠致病性大肠杆菌和痢疾志贺菌的基因组DNA进行了研究，在此基础上分析了鸡鲍氏志贺菌与其他6个菌株的亲缘关系。结果显示，有4条随机引物的扩增多态性良好，共扩增出了64个DNA片段，其中4种菌共有的谱带有3条，而显示多态性的片段有61条，占95．3％。引物P2的扩增图谱不能将志贺菌和大肠杆菌鉴别开，但可将这2种菌与沙门菌鉴别出来；引物P6的扩增图谱清晰且3种菌间有明显差异，可用于上述3种细菌的鉴别。不同细菌间的遗传距离为0．128～0．790，根据遗传距离可将鸡鲍氏志贺菌等7个菌株分为3个聚类群，鸡鲍氏志贺菌分离株位于人痢疾志贺菌类群中，可能是人志贺菌的一个新的亚种。

鸡白痢沙门杆菌水平传播特性及感染机体的研究

为了研究在不同感染率下雏鸡白痢沙门杆菌的水平传播特性及其对组织器官病理变化的影响,将240只3日龄SPF鸡均分成6组,1组为对照组,口服生理盐水,0.5 mL/只;2-6组分别按照20%,40%,60%,80%,100%的比例随机选取8,16,24,32,40只,每只分别口服1×108cfu/mL鸡白痢沙门杆菌悬液,0.5 mL/只。分别在攻毒后1,3,7,14,21,28天对未攻毒雏鸡进行泄殖腔采样来检测不同感染率组的感染情况,同时对0和100%感染率组进行组织学和血清学检测。结果表明：攻毒后1天（1DPI）时,感染率为0,85.71%,91.41%,97.14%,97.14%,100%;3DPI时,全部感染。各组的死亡率分别为0,5.40%,11.43%,28.57%,22.86%和35.00%。血清TNF-α在1DPI（P〈0.05）和3DPI（P〈0.01）时差异显著或极显著。器官载菌量为盲肠﹥肝脏﹥脾脏;组织病理学变化出现在3~7DPI,以肝脏、心脏和肺脏的病变最典型。说明鸡白痢沙门杆菌水平传播对雏鸡早期感染危害较大,特别是感染后1~7 d为细菌侵染的关键时间。

略阳乌鸡生长发育规律及鸡白痢净化技术研究

为了研究略阳乌鸡的体重和胫骨生长发育规律及选育提纯对鸡白痢净化的影响,在进行略阳乌鸡选育提纯的过程中,采用鸡白痢全血平板凝集检测技术测定场内乌鸡的鸡白痢阳性率,据此淘汰后继续进行选育提纯,通过测定略阳乌鸡的体重和胫长等,以期详细了解其生长发育规律。结果表明,略阳乌鸡公鸡的体重绝对生长量在10~12周龄时为409.84,达到体重生长峰值;略阳乌鸡母鸡的体重绝对生长量在4~6周龄时为191.49,达到体重生长峰值;略阳乌鸡公鸡的胫长绝对生长量在10~12周龄时为1.98,达到胫骨生长峰值;略阳乌鸡母鸡的胫长绝对生长量在0~2周龄时为1.89,达到胫骨生长峰值。通过选育提纯,鸡白痢阳性率由32.2%降至0.78%。

江苏某种鸡场鸡白痢沙门菌药物敏感性及其与耐药基因相关性分析

为了解江苏某种鸡场鸡白痢沙门菌分离株的药敏性及其与耐药基因的相关性,采用K-B法测定96株鸡白痢沙门菌分离株对9类21种抗菌药物的敏感性,通过PCR方法检测分离株的6类药物的10种耐药基因,并对分离株的药敏性与耐药基因的相关性进行分析。结果表明:所有鸡白痢沙门菌分离株均有不同程度的耐药现象,其中对萘啶酸(95.83%)、氨苄西林(55.21%)和链霉素(39.58%)的耐药率较高,且56.25%的分离株呈多重耐药。36.46%的分离株可检出耐药基因,共检出7种耐药基因,分别为aadA1 (26.04%)、blaCMY-2(11.46%)、sul2 (11.46%)、blaTEM-1(9.38%)、tetA(4.17%)、strA(3.13%)和qnr(3.13%)。与药敏性符合率较高的耐药基因依次为cat1 (93.75%)、tetA(73.96%)、tetC(71.88%)、sul2 (68.75%)和sul1 (67.71%)。这一研究提示该种鸡场鸡白痢沙门菌耐药情况较为严重,但耐药基因携带率较低,且耐药基因检测结果与药敏性并不完全符合。

二郎山山地鸡不同品系的鸡白痢净化效果分析

为了探究二郎山山地鸡育种过程中鸡白痢的净化效果,本研究采用全血玻板凝集方法检测SD02和SD03品系3个世代鸡群体中鸡白痢患病情况,并同时对每个世代中生产性能数据进行统计分析。结果显示,经过3个世代的鸡白痢净化淘汰,SD02和SD03品系各世代间的患病率差异极显著(P<0.01)。SD02品系中患病率与健雏率、育成阶段成活率、产蛋阶段成活率均呈显著负相关(P<0.05);SD03品系中患病率与育雏阶段成活率呈显著负相关(P<0.05)。以上结果表明,SD02和SD03中鸡白痢净化效果极显著,提高了鸡群的生产性能,为后续育种过程中清除鸡白痢奠定了理论基础。

广西地区鸡胚中沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解广西地区鸡胚中沙门菌的流行情况及耐药现状,本研究对广西某些鸡场送检的病死鸡胚进行沙门菌的分离鉴定。然后利用PCR方法鉴定沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并检测其耐药性。结果显示,经选择性培养基和PCR鉴定分离到18株沙门菌,分离率为13.95%(18/129)。血清型鉴定显示:分离株均为鸡白痢沙门菌。毒力基因检测发现shdA基因的分布率只有22.22%,其余15个毒力基因的分布率均为100%。药敏试验结果显示,沙门菌分离株对卡那霉素、庆大霉素、氯霉素、美罗培南、亚胺培南均敏感;但对林可霉素、克林霉素、罗红霉素、红霉素、利福平的耐药率达100%,表明鸡白痢沙门菌的多重耐药现象严重。本研究提示鸡白痢可能是导致鸡胚死亡及孵化率低的原因,因此应严格进行鸡白痢的防控净化工作。

鸡TGF-β1对大肠杆菌和鸡白痢沙门菌黏附DF1细胞的影响

旨在研究鸡转化生长因子-β1(transfer growth factor-β1,TGF-β1)对大肠杆菌和鸡白痢沙门菌黏附DF1细胞的影响。通过ELISA方法检测鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染DF1细胞后鸡TGF-β1表达量的变化,参考GenBank中鸡TGF-β1序列构建鸡TGF-β1的过表达和干扰表达载体,将构建成功的TGF-β1重组表达载体转染DF1细胞后48 h在荧光显微镜下观察其转染效率,荧光定量PCR检测鸡TGF-β1 mRNA水平表达量的变化,ELISA方法检测鸡TGF-β1胞外蛋白表达量的变化,通过黏附试验检测鸡TGF-β1对致病性大肠杆菌和鸡白痢沙门菌黏附DF1细胞的影响。结果显示,NDV感染DF1细胞后,鸡TGF-β1胞外表达量显著高于未感染细胞的表达量(P<0.05),经酶切测序鉴定TGF-β1干扰表达和过表达重组载体构建成功。转染鸡TGF-β1重组过表达载体细胞的TGF-β1 mRNA和胞外蛋白表达量均显著高于未转染细胞(P<0.01),致病性大肠杆菌和鸡白痢沙门菌对细胞的黏附率均显著高于未转染细胞(P<0.01),转染鸡TGF-β1重组干扰表达载体细胞的mRNA和胞外蛋白表达量均显著低于未转染细胞(P<0.01),致病性大肠杆菌和鸡白痢沙门菌对细胞的黏附率均显著低于未转染细胞(P<0.01)。综上,NDV感染DF1细胞后,鸡TGF-β1的表达量增加,鸡TGF-β1可促进致病性大肠杆菌和鸡白痢沙门菌黏附DF1细胞,这为进一步研究鸡TGF-β1在家禽病毒感染继发细菌性疾病中的作用提供试验基础。

鸡白痢沙门菌sptP基因缺失株的构建及其免疫保护效力评价

旨在评价鸡白痢沙门菌sptP基因缺失突变株对雏鸡的免疫保护效力,研制有效的鸡白痢沙门菌减毒活疫苗。利用λ-red同源重组技术构建鸡白痢沙门菌C79-13株的sptP基因缺失株C79-13ΔsptP,并分析其基本生物学特性;以1.0×10^(8)菌落形成单位(CFU)的C79-13ΔsptP经口服免疫3日龄雏鸡,对雏鸡的体重与临床症状变化、血清IgG水平及外周血淋巴细胞增殖能力进行测定,并评价其亲本株C79-13攻毒后的免疫保护效力。PCR和测序结果表明成功构建了鸡白痢沙门菌sptP基因缺失株C79-13ΔsptP,该缺失株与其亲本株C79-13的生长特性和生化特性一致,但其毒力显著降低;免疫后,雏鸡的生长性能没有变化,C79-13ΔsptP能够诱导雏鸡产生显著的体液和细胞免疫应答反应;与对照组相比,攻毒后免疫组雏鸡的发病率和死亡率均显著降低。表明鸡白痢沙门菌sptP缺失株可对雏鸡提供有效的免疫保护,具有作为鸡白痢疫苗的潜力。

“雏痢净”对人工感染雏鸡白痢的疗效研究

对人工感染鸡白痢的艾维茵雏鸡采用“雏痢净”按高 ( 0 .5 g/只 )、中 ( 0 .4g/只 )、低 ( 0 .3g/只 )三个剂量混饲治疗 ,用 2 %甲磺酸培氟沙星 (药物对照 )组、感染不用药 (阳性对照 )组、不感染不用药 (阴性对照 )组作为对照。结果 :“雏痢净”高、中、低剂量组与 2 %甲磺酸培氟沙星组对雏鸡白痢均有较高的疗效 ,其中“雏痢净”高、中剂量组与 2 %甲磺酸培氟沙星组的治疗效果最好 ,但三者差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;“雏痢净”各组与 2 %甲磺酸培氟沙星组的相对增重率极显著高于感染不用药组 (P <0 .0 1 )。研究表明 ,“雏痢净”高、中剂量组雏鸡用药后症状明显减轻且渐恢复 ,体重也明显增加 ,其疗效与 2 %甲磺酸培氟沙星相当。