chk1反义寡核苷酸增加HeLa细胞顺铂作用下凋亡敏感性

目的:通过反义封闭chk1基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路,从而增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂(DDP)的敏感性.方法:采用MTT法检测梯度浓度DDP作用人宫颈癌细胞株HeLa24,48和72h后对细胞的生长抑制率.以脂质体为载体将chk1正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western Blot测量Chk1蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测DDP作用后细胞凋亡率.结果:DDP对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性.反义封闭chk1基因可抑制Chk1蛋白表达(P<0.01),DDP作用下细胞凋亡率为54.1%,高于转染正义链的34.2%(P<0.01).结论:反义封闭chk1基因可增加HeLa细胞对DDP的凋亡敏感性.

沉默Chk1基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响

目的:探讨沉默Chk1基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用。方法:采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk1基因,q-PCR与Western blot检测Chk1 mRNA与蛋白表达。流式细胞术检测DADS作用与Chk1基因沉默BGC823细胞周期分布情况。Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达。结果:流式细胞术显示,15 mg·L-1DADS作用BGC823细胞12、24、36、48 h后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P<0.05)。Chk1沉默BGC823细胞Chk1 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05)。沉默Chk1后,G2/M期细胞较对照组降低(P<0.05)。DADS处理后,对照组G2/M细胞高于Chk1沉默组(P<0.05)。Chk1基因沉默后Cdc25C和Cyclin B1表达较对照组增加(P<0.05)。DADS处理对照组后,Cdc25 C和Cyclin B1表达较未处理组降低(P<0.05)。DADS处理Chk1沉默组Cdc25 C和Cyclin B1表达较Chk1沉默下调(P<0.05)。结论:Chk1沉默可通过促进Cdc25C和Cyclin B1表达减弱DADS阻滞G2/M的作用,DADS阻滞G2/M的检查点是Chk1。

细胞周期检测点激酶1/2基因与放疗敏感性关系

目的观察宫颈癌HeLa细胞chk1/2基因表达改变对X射线诱导凋亡的影响。方法以脂质体为载体将chk1/2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中chk1/2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测X射线照射后细胞凋亡率。结果转染chk1/2反义寡核苷酸可明显抑制chk1/2蛋白表达(F=22.69,P<0.05),X射线作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(F=23.65,P<0.05)。结论反义封闭chk1/2基因可增加HeLa细胞对X射线照射的凋亡敏感性。