头穴电针对脑出血大鼠脑组织GLUT-1及其基因表达的影响

目的:研究大鼠脑出血后血肿周围组织葡萄糖载体蛋白-1(GLUT-1)、GLUT-1mRNA表达的动态变化规律及头穴透刺治疗作用。方法:将雄性Wistar大鼠144只随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组又分为24h、72h、168h三个小组,采用胶原酶/肝素联合注入法制备脑出血大鼠模型。针刺组给予百会透太阳穴电针治疗,按指定时间断头取脑,取血肿周围3mm范围内组织,分别采用免疫组织化学法检测GLUT-1和RT-PCR法检测GLUT-1mRNA表达的变化。结果:脑出血后,模型组三个时间点均见大部分GLUT-1阳性微血管形态变窄、皱缩、闭塞,越靠近病灶越严重;与假手术组比较,模型组GLUT-1及GLUT-1mRNA表达24h时失代偿性升高(P<0.05),72h、168h时失代偿性降低(P<0.05)。针刺组:仅在24h时血肿周围出现了轻微的管腔狭窄,之后大部分血管表现为管腔呈圆形扩张;GLUT-1与GLUT-1mRNA表现相同的变化趋势,即与假手术组比较,24h时变化不明显,72h、168h时出现降低(P<0.05),且各时间点与模型组有明显差异(P<0.05)。结论:头穴电针能扩张血管,改善供血,减轻血管内皮细胞的损伤,故能推迟GLUT-1及GLUT-1mRNA病变的发生,延长治疗时间窗。

油莎豆生长素受体TIR1基因家族鉴定及响应盐胁迫和外源IBA的表达分析

特色油料作物油莎豆(Cyperus esculentus L.)地下块茎可积累大量油脂,且具有适应性广和抗逆性强等特点,是研究植物抗逆性和地下营养器官富集油脂的优异材料。运输抑制剂响应蛋白1(transport inhibitor response protein 1,TIR1)作为生长素受体可调控植物生长发育和响应非生物胁迫。然而,油莎豆CeTIR1的相关研究鲜有报道。本研究基于油莎豆转录组数据筛选鉴定出4个油莎豆TIR1基因(CeTIR1-1、CeTIR1-2、CeTIR1-3和CeTIR1-4),并采用RT-PCR技术克隆到4个CeTIR1成员的ORFs。生物信息学分析表明,4个CeTIR1蛋白含有典型的F-box蛋白结构域、AMN1超结构域和Transp_inhibit结构域。CeTIR1s序列长度、编码蛋白相对分子量和等电点等理化性质差异较小。4个CeTIR1分别与禾本目莎草科、木犀科及十字花科的植物来源的TIR1s在进化上亲缘关系较近。基因表达分析显示,油莎豆CeTIR1基因在不同组织表达水平差异显著,均在块茎组织中高表达,在根和叶组织中表达量较低。盐胁迫处理下油莎豆幼苗抗氧化酶活性和MDA含量升高,添加外源IBA处理后,盐胁迫油莎豆幼苗的抗氧化酶活性进一步升高且MDA含量降低。这预示着IBA可以缓解盐胁迫对油莎豆幼苗生长的不利影响。qRT-PCR结果显示,4个CeTIR1基因在盐胁迫处理幼苗中表达量增加,外源添加IBA亦可显著上调CeTIR1-2基因的表达。综合分析显示CeTIR1-2可能是参与调控油莎豆幼苗响应盐胁迫的一个重要基因。研究结果可为挖掘生长素调控油莎豆生长发育和抗逆性相关功能基因以及油莎豆逆境栽培研究提供科学依据和重要参考。

MCP-1-2518位点基因多态性对脊柱结核易感性的影响

目的:分析趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)启动子区2518基因型频率和等位基因多态性与中国湖南省汉族人群脊柱结核易感性的关系。方法:连续收录2004年12月～2012年8月我院收治的湖南汉族新发脊柱结核患者及健康志愿者,应用聚合酶链式反应(PCR)和DNA直接测序法检测两组患者MCP-1-2518位点的多态性,运用R×C卡方检验比较两组基因型分布频率的差异,计算各比值比(OR)及95%可信区间(CI)。结果:共纳入符合条件的脊柱结核患者334例,健康志愿者336例。MCP-1-2518GG、AG、AA三种基因型在病例组和对照组中的分布频率分别为37.1%、50.3%、12.6%和25.6%、54.2%、20.2%,两组组间比较有显著性差异(P<0.05),其中MCP-1-2518GG基因型的分布频率在脊柱结核人群中显著增高。MCP-1基因-2518 G/A多态位点G、A等位基因频率在病例组为62.3%和37.7%,在对照组为52.7%和47.3%,两组等位基因的分布频率存在统计学差异(P<0.05),-2518G等位基因与脊柱结核发病相关,其OR值为1.483,95%CI为1.193～1.844。结论:在湖南汉族人群中,MCP-1-2518位点GG基因型和G等位基因均可能与脊柱结核的易感性相关。

白鹭源禽Ⅰ型副粘病毒L基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株全基因组序列设计5对引物,采用RT-PCR扩增出白鹭源禽I型副粘病毒(W13株)L基因的LA(1121 bp)、LB(1481 bp)、LC(1439 bp)、LD(1476 bp)、LE(1608 bp)5个片段,用DNA Star软件比较分析后进行拼接,获得长约6760 bp包含有L基因全长的核苷酸序列,而W13株L基因的mRNA全长为6704 bp、开放阅读框(ORF)为6615个碱基、编码2204个氨基酸。氨基酸同源性分析表明:W13株L基因与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过97.0%;而核苷酸同源性分析表明:W13株L基因与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过93.0%。可见,W13株与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的亲缘关系较近。

HSF1与XAF1基因在胃肠肿瘤中表达的研究

目的探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)与热休克转录因子1(HSF1)在胃肠癌中的表达情况及其相互关系。方法应用免疫印迹分析法检测胃癌、大肠癌组织以及胃肠道肿瘤细胞株中的XAF1及HSF1蛋白表达;用含有HSF1的真核表达载体转染胃肠道肿瘤细胞株或用RNA干扰的方法上调或下调HSF1表达,同步检测对XAF1表达的影响;用应激原(stressstimuli)刺激诱导HSF1表达,观察对XAF1表达的作用。结果在胃肠癌组织中HSF1的表达高于正常组织;在胃肠癌细胞株中XAF1与HSF1的表达呈负相关,应激刺激上调HSF1的同时下调XAF1表达。结论胃肠道肿瘤细胞高表达HSF1,其结果是抑制XAF1表达,这种机制应该是XAF1在(胃肠道)肿瘤细胞中低表达并导致肿瘤细胞凋亡缺失的原因之一。

胰岛素样生长因子结合蛋白-1启动子的克隆与序列分析

用酚氯仿抽提法提取SD大鼠的肝脏基因组DNA,PCR扩增胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)启动子并克隆至pUC118载体。从含IGFBP-1启动子的质粒中酶切分离出IGFBP-1启动子并测序。PCR扩增出420bp的目的DNA片段,与文献报道的IGFBP-1启动子DNA大小一致。经正、反两方向序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank数据库中的IGFBP-1启动子基因序列一致。以上结果表明克隆成功了IGFBP-1启动子基因,为构建具双向调节的胰岛素分泌调控基因质粒奠定了基础。

不结球白菜氯离子通道蛋白ClC-d基因的克隆及表达分析

根据从不结球白菜中获得的与铜胁迫相关的氯离子通道蛋白基因ClC-d的TDF片段设计引物,运用RACE技术克隆出具有完整阅读框的不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d,该基因全长2 752bp,开放阅读框为2 376bp,编码792个氨基酸,分子量为87.06kD,理论等电点为8.35,为碱性蛋白。结构分析表明:该蛋白含有1个电压门控的氯离子通道和2个CBS结构域。进化树分析显示,不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d推导的氨基酸序列与拟南芥氯离子通道蛋白基因的相似度高达100%,属于ClC类氯离子通道蛋白。RT-PCR结果表明在铜胁迫下该基因表达量增加,处理10d时达到最高,推测其可能参与对铜胁迫的应答反应。本研究结果有助于进一步研究该基因在不结球白菜逆境应答中的作用及其作用机制。

Egr-1启动子辐射诱导的基因表达特性

目的:研究电离辐射作用下早期生长反应因子1(Egr-1)启动子调控增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因在人结肠癌细胞SW480中的表达。方法:利用基因重组手段构建质粒Egr-1-EGFP;阳离子脂质体介导转染人结肠癌细胞SW480,给予不同剂量γ射线照射,流式细胞仪检测照射后不同时间点EGFP的表达。结果:电离辐射能够诱导Egr-1启动子调控下游基因的表达,且6 Gy照射后最为明显,在照射后24 h达到高峰。结论:Egr-1启动子具有电离辐射诱导特性。

星形胶质细胞上调基因-1与不育α基序和组氨酸/天冬氨酸蛋白1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)、不育α基序和组氨酸/天冬氨酸蛋白1(SAMHD1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法:选取本院自 2020 年 5 月至 2021 年 6 月收治的 203 例NSCLC患者为研究对象,用免疫组化法检测和比较AEG-1、SAMHD1 的表达水平,记录AEG-1、SAMHD1 表达水平与NSCLC临床特征的关系.结果:AEG-1 在NSCLC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);SAMHD1 在NSCLC组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织(P<0.05).AEG-1、SAMHD1 的表达水平与肿瘤大小、是否有淋巴结转移、肿瘤分期和分化程度有关(P<0.05).结论:AEG-1 的阳性表达可能与非小细胞肺癌的发展和转移密切相关,而SAMHD1 表达水平降低则预示患者的预后情况不佳,AEG-1、SAMHD1 可作为预测非小细胞肺癌病情严重程度和患者预后的分子标记物.

猪源副粘病毒的分子鉴定

参照GenBank发表的相关猪源副粘病毒和禽源副粘病毒融合蛋白F基因核苷酸序列,设计并合成了4对引物,采用RT-PCR技术对本研究室分离的猪源副粘病毒JL-1株F基因进行探索性扩增、序列测定,在此基础上设计引物扩增HN基因、进行序列测定,分析F、HN基因序列,对该病毒进行分子鉴定。结果显示,扩增出了JL-1株F、HN基因目的条带,序列分析表明其与猪源副粘病毒病家族其他成员即蓝眼病病毒、尼帕病毒、梅那哥病毒同源性很低,与禽副粘病毒1型(APMV-1)具有高度同源性。初步确定分离的猪源副粘病毒为禽副粘病毒1型。

先天性肌强直一家系以及散发患者一例的临床、电生理、基因学研究

目的探讨先天性肌强直一家系和散发患者一例的临床、电生理、基因学特点。方法对先天性肌强直的一家系和一例散发的患者进行详细的临床资料搜集,对家系先证者以及相关的亲属进行CLCN1和SCN4A基因测序。结果家系中3代共有7例患者,其中5例患者以及一例无症状的家系成员接受了基因检测,结果发现5例患者携带CLCN1A298 T突变。在散发的患者中发现了S723 R错义杂合突变。结论 CLCN1基因A298 T突变是家系中先天性肌强直患者的致病突变,而S723R是否为散发患者的致病突变需要进一步明确。

乳腺癌易感基因1、P53结合蛋白1、DNA损伤检测点介质1在人喉表皮癌细胞中的表达及临床意义

目的研究人喉表皮癌细胞系Hep-2中乳腺癌易感基因1(BRCAl)、P53结合蛋白1(53BP1)和DNA损伤检测点介质1(MDC1)的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链式反应检测BRCA1、53BP1、MDC1在喉癌细胞系Hep-2中mRNA的表达,同时用免疫印迹法检测蛋白的表达。结果在所检测的人喉癌细胞系Hep-2中BACR1、53BP1、MDC1在基因与蛋白两个水平均有表达。结论 BRCA1、53BP1、MDC1可能在喉癌的发生发展中有一定作用。

大薯病程相关蛋白1(PR1)基因及其启动子序列的克隆与分析

为了研究大薯Da PR1基因的表达模式及调控机理,本研究利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从高抗炭疽病大薯材料Da94中获得1个病程相关蛋白1(pathogensis-related protein 1,PR1)基因,命名为Da PR1。测序显示该基因包含长度为501 bp的完整开放阅读框(ORF),预测编码166个氨基酸。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白具有典型SCP-PR1-like保守结构域,Blast比对表明Da PR1蛋白与多种植物的PR1蛋白高度同源。实时荧光定量PCR检测表明,Da PR1基因在高抗种质中受炭疽菌显著诱导,在侵染48 h时其相对表达量达到最大。通过巢式PCR扩增Da PR1上游转录调控序列的5'端,获得1 203 bp的Da PR1基因启动子,序列分析表明该区域除了含有基础的启动子元件CAAT-box和TATA-box外,还存在茉莉酸(JA)、赤霉素(GB)等激素响应元件及真菌诱导响应元件(W-box)。本研究通过克隆和分析Da PR1基因及其启动子序列,为进一步研究该基因的功能及其表达调控机制奠定了基础。

车前子对腹泻模型大鼠小肠组织中水通道蛋白的影响

目的观察车前子对腹泻模型大鼠小肠组织中水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白3(AQP3)的基因和蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法将60只SD雄性大鼠采用随机数字表法分为空白组,模型组,阳性对照(氢氯噻嗪)组,车前子低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组于每日上午予番泻叶药液灌胃复制大鼠腹泻模型,空白组予等量蒸馏水灌胃;每日下午各药物组予相应药物灌胃,空白组和模型组予等量蒸馏水灌胃,连续灌胃14 d。给药期间观察各组大鼠的排便情况。灌胃结束后,在麻醉状态下剖取各组大鼠的小肠组织,采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测小肠组织中AQP1、AQP3的基因和蛋白表达水平。结果模型组大鼠全部排水样稀便;与空白组比较,模型组大鼠小肠组织中AQP1 mRNA、AQP3 mRNA和相应蛋白的表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,车前子各剂量组大鼠粪便基本成形;小肠组织中AQP1 mRNA、AQP3 mRNA和相应蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论车前子可通过上调小肠组织中AQP1、AQP3的基因和蛋白表达水平,增加小肠对水分的吸收量,调节水液代谢,从而达到止泻的目的。