1,5-dicaffeoylquinic acid protects primary neurons from amyloid β1-42-induced apoptosis via PI3K/Akt signaling pathway

Background Recently, 1,5-dicaffeoylquinic acid （1,5-DQA）, a caffeoylquinic acid derivative isolated from Aster scaber, was found to have neuroprotective effects. However, the protective mechanisms of 1,5-DQA have not yet been clearly identified. The purpose of this study was to explore the protective mechanisms of 1,5-DQA on neuronal culture. Methods We investigated the neuroprotective effects of 1,5-DQA against amyloid IB1-42 （Aβ42）-induced neurotoxicity in primary neuronal culture. To evaluate the neuroprotective effects of 1,5-DQA, primary cultured cortical neurons from neonate rats were pretreated with 1,5-DQA for 2 hours and then treated with 40 pmol/L Aβ42 for 6 hours. Cell counting kit-8, Hoechst staining and Western blotting were used for detecting the protective mechanism. Comparisons between two groups were evaluated by independent t test, and multiple comparisons were analyzed by one-way analysis of variance （ANOVA）. Results 1,5-DQA treated neurons showed increased neuronal cell viability against Aβ42 toxicity in a concentration- dependent manner, both phosphoinositide 3-kinase （PI3K）/Akt and extracellular regulated protein kinase 1/2 （Erkl/2） were activated by 1,5-DQA with stimulating their upstream tyrosine kinase A （Trk A）. However, the neuroprotective effects of 1,5-DQA were blocked by LY294002, a PI3K inhibitor, but not by PD98059, an inhibitor of mitogen-activated protein kinase kinase. Furthermore, 1,5-DQA＇s anti-apoptotic potential was related to the enhanced inactivating phosphorylation of glycogen synthase kinase 313 （GSK3β） and the modulation of expression of apoptosis-related protein Bcl-2/Bax. Conclusion These resutts suggest that 1,5-DQA prevents AI342-induced neurotoxicity through the activation of PI3K/Akt followed by the stimulation of Trk A, then the inhibition of GSK313 as well as the modulation of Bcl-2/Bax.

苍耳子不同部位中绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量测定

目的:通过对不同批号苍耳子刺、去刺苍耳子、苍耳子中主要有效成分绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸含量进行测定,对苍耳子去刺是否会对药效产生影响进行探究。方法:采用HPLC法,色谱柱:Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);检测波长:328nm;流速:1.0 ml·min-1;柱温:25℃;进样量:10μl;流动相:A相:乙腈,B相:0.16%磷酸溶液,梯度洗脱对苍耳子不同部位的主要有效成分绿原酸1,5-二咖啡酰奎宁酸含量进行测定。结果:绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸在苍耳去刺果实中含量高,而刺中含量低,苍耳子去刺具有一定的合理性。结论:该方法科学先进,稳定可行,实验结果可靠,为苍耳子须去刺工艺的合理性提供了一定依据。

天山雪莲悬浮培养细胞中紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的生物合成调控

紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸为野生天山雪莲中的3种活性化学成分,具多种药理活性,在药材中含量较低。研究在筛选得到天山雪莲上述3种化学成分高产细胞系的基础上,通过外源添加碳源和生物合成前体的方法调控紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸在天山雪莲培养细胞中的生物合成,极大地提高了其含量和产量。仅需培养16 d,紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的质量浓度即可以分别达到339.0,225.3,512.7 mg·L-1;三者的含量分别为野生药材的67.9,1.9,10.6倍。研究为最终实现通过天山雪莲细胞培养同时规模化生产以上3种活性成分打下了坚实基础,具有理论和实际应用意义。

苍耳子炮制前后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量比较

目的:考察苍耳子炮制前后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量变化。方法:采用清炒法对3个不同来源的苍耳子药材进行炮制,通过HPLC法测定苍耳子炮制前后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。结果:3批苍耳子炮制后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量均降低。结论:该方法简便、快速准确。研究结果为生、炒苍耳子饮片的质量标准制定提供了科学依据。

苍耳子炒制前后水煎液中酚酸性成分含量比较

目的:考察苍耳子炒制前后水煎液中新绿原酸、绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸及总酚酸的含量变化。方法:采用清炒法对3个不同产地苍耳子饮片进行炮制,对苍耳子(生品、炒品)进行水煎煮提取。采用HPLC法测定水煎液中新绿原酸、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量;采用分光度法测定水煎液中总酚酸的含量。结果:苍耳子炒制后水煎液中新绿原酸、绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸及总酚酸含量均有所提高。结论:苍耳子炒制后可增加有效成分的煎出,从而增强疗效。

雪莲细胞培养物的质量标准研究

目的:建立雪莲细胞培养物的质量标准。方法:参照《中华人民共和国药典》2020年版附录,分别建立雪莲细胞培养物的一般检查项目及定性定量指标。以芦丁为对照品,利用紫外分光光度法建立雪莲细胞培养物总黄酮成分含量的测定方法;利用高效液相色谱(HPLC)法同时测定绿原酸、紫丁香苷和1,5-二咖啡酰奎尼酸成分含量,并建立其特征图谱,采用2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对特征图谱进行相似度分析。结果:15批次雪莲细胞培养物总黄酮类成分含量10.0%~11.0%;绿原酸含量0.86%~1.09%;紫丁香苷含量0.34%~0.48%;1,5-二咖啡酰奎尼酸含量3.20%~3.75%。15批雪莲细胞培养物指纹图谱相似度大于0.9,特征图谱中呈现10个特征峰,指认峰2为绿原酸、峰4为紫丁香苷、峰7为1,5-二咖啡酰奎尼酸。结论:本研究建立了雪莲细胞培养物的质量标准,建议醇溶性浸出物不得低于29.4%;雪莲细胞培养物中的总黄酮类成分含量不得低于10.0%,绿原酸、紫丁香苷、1,5-二咖啡酰奎尼酸的含量应分别不得低于0.86%、0.34%、3.20%,为天山雪莲药制品的工业化生产提供了参考。

高效液相色谱-串联质谱法测定饮料中7种绿原酸类物质

目的:建立了一种高效液相色谱-串联质谱法(High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)同时快速、准确测定饮料中7种绿原酸类物质含量的方法。方法:研究不同柱温、流速、色谱柱、提取溶剂、超声时间等对7种绿原酸类物质测定的影响,最终确定试样经90%甲醇水溶液超声提取,采用RP18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分离,HPLC-MS/MS同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5-二咖啡酰奎宁酸成分含量。结果:对HPLC-MS/MS检测7种成分的检测条件优化和方法学考察,包括色谱条件。结论:该检测方法简便、准确、可靠,线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求,可用于饮料中7种绿原酸类成分的定量分析。

HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别评价菊苣子质量

目的建立腺毛菊苣Cichorium glandulosum种子(菊苣子药材)和混伪品菊苣Cichorium intybus种子HPLC指纹图谱及多成分含量测定,并结合化学模式识别法对二者进行分析比较,为其资源利用开发和进一步的质量控制研究提供参考。方法采用YMC-PACK ODS-A色谱柱,以0.2%磷酸溶液(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃,进样量为5μL。利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立19批腺毛菊苣种子和4批菊苣种子样品的HPLC指纹叠加图谱并分析相似度,通过对照品比对指认,确定化学成分并进行含量测定,使用SPSS 20.0和SIMCA-P 14.1软件进行聚类分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)分析和正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)分析,对不同批次样品进行质量评价。结果建立了19批腺毛菊苣种子和4批菊苣种子HPLC指纹叠加图谱,并确定19个共有峰,通过对照品比对指认了其中8个色谱峰;建立了绿原酸、秦皮乙素、1,4-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、1,5-二咖啡酰奎宁酸含量测定方法;指纹图谱相似度在0.915~0.998;OPLS-DA分析与PCA分析结果一致,可将样品分为3组,并筛选出1,5-二咖啡酰奎宁酸、槲皮素、绿原酸、菊苣酸4个差异性成分。结论通过HPLC指纹图谱结合化学模式识别方法,建立了一种简单可靠的菊苣子药材质量评价方法,为菊苣子药材的质量评价和资源化利用提供依据。

HPLC同时测定苍耳子中6个化学成分的含量

目的:用HPLC同时测定苍耳子中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸6个化学成分的含量。方法:采用Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温35℃。结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸色谱峰分离良好。进样量分别在0.012～1.2、0.028～2.8、0.012～1.2、0.014～1.4、0.024～2.4、0.011～1.1μg范围内线性关系良好。平均回收率(n=6)分别为102.3%、96.4%、99.1%、103.1%、103.0%、103.4%,RSD分别为1.8%、1.1%、1.8%、1.5%、2.0%、1.9%。结论:建立的苍耳子HPLC含量测定方法可用于苍耳子的质量控制。

HPLC法同时测定不同产地灯盏细辛中4种有效成分的含量

目的:采用高效液相色谱法同时测定9批不同产地灯盏细辛药材中绿原酸、咖啡酸、1,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和野黄芩苷4种有效成分。方法:采用ZorbaxC18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～9min,10%A;9～10min,10%A～13%A;10～40min,13%A),流速1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长325nm。结果:绿原酸、咖啡酸、1,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷浓度分别在3.93～62.9μg·mL-1(r=0.9999)、0.106～1.70μg·mL-1(r=0.9997)、0.124～1.98μg·mL-1(r=0.9995)、28.78～460.4μg·mL-1(r=0.9999)范围内呈现良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为95.74%(RSD=1.7%)、103.3%(RSD=2.6%)、100.0%(RSD=4.0%)、101.8%(RSD=3.4%)。结论:该方法简便、准确,可用于灯盏细辛药材的质量评价。

炒制对苍耳子中6种主要成分含量的影响

目的研究炒制对苍耳子中6种主要成分含量的影响。方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸进行梯度洗脱,流速1 m L·min-1,柱温35℃,检测波长254 nm。结果苍耳子炒制后新绿原酸和隐绿原酸的含量明显升高;绿原酸、1,5-和4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量明显下降。结论酚酸类成分不稳定,苍耳子应炒至黄褐色为宜。

HPLC-DAD法测定不同产地欧亚旋覆花中7种活性成分

目的：建立HPLC-DAD法同时测定欧亚旋覆花中绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、芦丁、菠叶素、槲皮素、木犀草素、6-甲氧基木犀草素。方法 Diamonsil C18色谱柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈–0.4%枸橼酸水溶液，梯度洗脱；体积流量1 mL/min；柱温30℃；检测波长360 nm；进样量：10μL。结果绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、芦丁、菠叶素、槲皮素、木犀草素、6-甲氧基木犀草素分别在0.118～2.360、0.261～5.220、0.030～0.600、0.052～0.140、0.081～0.162、0.041～0.820、0.030～0.600μg与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率分别为97.22%、97.43%、97.52%、99.48%、98.87%、98.76%、98.39%，RSD 值分别为0.92%、1.16%、1.50%、1.56%、0.79%、0.76%、1.62%（n＝6）。结论该方法准确、简便、重复性好，可用于欧亚旋覆花药材中成分的质量控制。