抵抗素体外对胆管癌细胞侵袭和转移的影响及其机制

目的:观察重组人抵抗素(resistin)对胆管癌细胞系QBC939增殖、侵袭、转移及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法:分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、Matrigel侵袭实验和迁移实验检测不同浓度的抵抗素对QBC939细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot检测抵抗素对QBC939细胞内MMP-2蛋白表达的影响。结果:当抵抗素浓度高于10 ng/ml时,对QBC939细胞增殖具有明显的促进作用(P<0.01),并呈一定的剂量依赖性;经10、50、100 ng/ml抵抗素处理24 h后,QBC939细胞体外侵袭及迁移能力均较空白对照组明显增强(P<0.01);Western blot法检测抵抗素作用QBC939细胞24 h后MMP-2表达水平显著增加。结论:抵抗素对人胆管癌QBC939细胞的侵袭和转移能力有明显的促进作用,该作用机制可能与提高MMP-2表达水平有关。

肝门上入路法切除高位胆管癌

目的总结肝门上入路在BismuthⅢ～Ⅳ型胆管癌中临床应用的经验体会。方法回顾性分析2000年7月至2005年10月采用肝门上入路手术切除的20例BismuthⅢ～Ⅳ型胆管癌患者。结果切缘阳性2例。术后近期内并发胸腔积液5例，伤口感染2例，膈下感染1例，胆肠吻合口瘘1例，肝功能衰竭1例。1年生存率为70％（P0=14／20=0．70），2年生存率为50％（P1=7／14=0．50），3年生存率为57％（P2=4／7=0．57）。结论（1）肝门上入路是BismuthⅢ-Ⅳ胆管癌的手术入肝路径。（2）肝正中裂路径由于没有主要的胆管或血管通过，出血少，操作简单，暴露清楚。肝Ⅳ段切除可以完成部分肝门部胆管肿瘤切除。（3）局部扩大的肝切除方法可以最大限度地保存正常肝组织，减少由于肝功能衰竭所导致的各种并发症；尽可能的做到胆管残端病理检查时的R0切除。

老年肝门部胆管癌的临床特点与治疗

背景与目的：老年肝门部胆管癌的发病率有上升趋势．由于老年人的病理、生理及其病变的解剖特点．手术切除率极低，而以各种引流术辅以术后放化疗为主。本研究探讨老年肝门部胆管癌的临床特点及有效治疗方法。方法：回顾性分析本院1995年1月到2005年12月共收治的28例老年人（≥60岁）肝门部胆管癌的临床资料：结果：共3例行胆管癌切除，术后两例存活超过3年，手术探查3例．存活时间1～2个月，其余22例均行胆道内或外引流，辅以放疗，存活时间在5个月到48个月，平均13．2个月。结论：外科手术仍是治疗肝门部胆管癌的有效治疗手段。对无法切除者，行各种引流手术，辅以放化疗，可以改善患者的生存质量、延长生存时间。

Kasai术式在Ⅲ、Ⅳ型肝门胆管癌切除术中应用

目的探讨Kasai术式在Ⅲ、Ⅳ型肝门胆管癌切除中应用的安全性和实用性。方法 2008年4月至2011年12月间,对7例Ⅲ、Ⅳ型肝门胆管癌行Kasai术式进行手术。结果 3例胆漏,其中2例量少,引流5～7天后停止,1例较多,每日约100～200 ml,4周后自行愈合。1例切口感染,2例出现腹水,给予营养支持、保肝、利尿等治疗后痊愈。结论选择性Kasai胆肠内引流术式应用于Ⅲ、Ⅳ型肝门胆管癌切除中方法简易、安全、实用。

影像学技术在肝门部胆管癌诊断和治疗中的价值评估

目的探讨超声、CT、MRI/MRCP等影像学技术在肝门部胆管癌的诊断和治疗中的临床应用价值。方法分析肝门部胆管癌的病例,统计分析超声检查、CT检查、MRI/MRCP检查对肝门部胆管癌的定性、定位、分型、血管侵袭、转移等方面的诊断符合情况。结果 CT检查、MRI/MRCP检查比超声检查的正确率高。结论影像学检查在肝门部胆管癌诊断及治疗中有重要临床应用价值。

ICAM-1和IGF-Ⅱ在胆管癌中的表达及与预后关系

目的探讨胆管癌细胞ICAM-1和IGF-Ⅱ的表达与胆管癌转移、预后关系。方法常规石蜡切片,用鼠抗人IGF-Ⅱ、ICAM-1单克隆抗体免疫组化法,光学显微镜观察胆管癌细胞阳性染色。结果(1)胆管癌IGF-Ⅱ阳性表达率为52.9%(36/68),主要在胞浆和胞核表达;I-CAM-1阳性表达率为61.8%(42/68),主要在胞浆和胞膜表达。(2)ICAM-1和IGF-Ⅱ在分化好的胆管癌表达率低于分化差的胆管癌。(3)IGF-Ⅱ高表达,肿瘤组织中内皮细胞丰富,与血管生成密切相关。ICAM-1和IGF-Ⅱ高表达,存活时间短,易发生转移(88.9%)。结论胆管癌ICAM-1和IGF-Ⅱ共同高表达,使肿瘤细胞更易于从肿瘤组织中脱落、迁移,使胆管癌细胞易于侵袭周边组织,增加远处转移机会。

肝门部胆管癌32例的治疗分析

目的分析肝门部胆管癌的治疗方法。方法回顾性分析1998年4月至2007年12月32例肝门部胆管癌患者的治疗情况。结果剖腹探查取活检7例（21．9％），平均存活时间为54d。单纯胆管引流7例（21．9％），平均存活时间为5．6个月。手术切除加吻合18例（56．3％），平均存活时间为18．3个月。结论影像学检查在肝门部胆管癌的诊断中具有重要价值；外科手术是治疗肝门部胆管癌最有效的方法；胆道引流亦可延长患者生存期；综合治疗是肝门部胆管癌治疗的方向。

E-上皮钙粘附素和p16期因蛋白在胆管癌中的表达及临床意义

目的 探讨E-上皮钙黏附素（E-cadherin,ED）和p16基因蛋白表达与胆管癌生物学行为的关系。方法 应用免疫组化方法检测43例胆管癌组织中ED和p16基因蛋白表达,综合分析了ED和p16蛋白表达与胆管癌临床病理因素间的关系。结果 在胆管癌组织中,ED和p16表达阳性率分别为53.5％和44.2％。ED和p16表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移密切相关（P<0.05）。ED表达与p16表达呈正相关（r=0.47,P<0.005）。结论 ED和p16表达提示胆管癌生物学行为不良。

93例肝门胆管癌外科治疗与预后分析

目的探讨肝门胆管癌的外科治疗与预后。方法回顾性分析我院自1999年6月-2005年6月93例肝门胆管癌患者的外科治疗情况,并分析影响其预后的因素。结果93例肝门胆管癌病人中根治性切除52例,姑息性切除21例,行外引流术9例,开腹内引流术11例。根治性手术切除组的中位生存期31个月,其他治疗组的中位生存期分别为13、7、11个月。年龄、血清总胆红素、临床分型、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移是影响术后患者预后的重要因素。结论肝门胆管癌的治疗以手术切除治疗为主,根治性切除治疗的预后明显优于其他。年龄、血清总胆红素、临床分型、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移等对预后也有显著的影响。

光动力治疗胆管癌的临床分析

目的探讨胆管癌的光动力治疗方法(photodynamic therapy,PDT)及观察近期疗效。方法2例胆管癌患者,1例于DSA导引下经皮肝穿置放光导纤维行光动力治疗;1例外科手术置放光导纤维光动力治疗,于治疗前及治疗后进行血清胆红素测定,观察胆管梗阻缓解情况。结果2例患者血清胆红素均明显下降。结论光动力治疗能够有效地解除胆管梗阻,是治疗胆管癌的一种有效手段。

survivin mRNA在胆管癌病人血清中的表达和意义

目的检测胆管癌病人血清中survivin mRNA的表达,探究其临床意义。方法应用RT-PCR检测20例胆管癌患者、41例良性胆道疾病患者、10例健康志愿者血清中survivin mRNA的表达,并与胆管癌的病理分级进行相关性分析。结果在20例胆管癌病人、41例良性胆道疾病病人、10例健康人血清中,survivin mRNA的阳性表达率分别为85.0%(17/20)、21.9%(9/41)、0(0/10),前者血清中survivin mRNA的阳性表达水平明显高于后两者血清中的阳性表达水平(P<0.05)。对胆管癌病人的病理分级进行相关性分析显示,其血清中survivin mRNA的表达与病理分级无相关性。结论在绝大多数胆管癌病人血清中都表达survivin mRNA,可以做为诊断胆管癌的一种新型肿瘤标记物。

通过核转录因子-кB诱导基质金属蛋白酶的表皮生长因子对胆管癌细胞侵袭的影响

目的探讨表皮生长因子通过核转录因子(NF)-кB诱导基质金属蛋白酶促进胆管癌细胞侵袭的机制。方法检测胆管癌细胞株HuCCT1在表皮生长因子(EGF)同浓度下的细胞侵袭力及细胞增殖情况；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析方法,检测基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9在不同EGF浓度下的基因和蛋白表达；采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测NF-кB在不同EGF浓度下的活性。结果随着EGF浓度的增加,胆管癌细胞株HuCCT1侵袭细胞数也随之增加,具有明显的浓度依赖性。而EGF浓度的变化对HuCCT1细胞的增殖无明显影响。EGF明显上调HuCCT1细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平,MMP-2不受影响。EGF增强NF-кB的活性；PDTC和布洛芬明显抑制EGF诱导的HuCCT1细胞侵袭力。结论EGF能够增强胆管癌细胞的侵袭力,其增强的侵袭力可能是通过NF-кB信号传导路径,激活MMP-9而实现的。

单中心56例肝门部胆管癌的外科治疗

目的探讨肝门部胆管癌患者不同手术方式的安全性及有效性。方法回顾性分析2010年1月至2015年7月于首都医科大学附属北京佑安医院行联合肝切除的56例肝门部胆管癌患者的临床资料。将患者分为联合小范围切肝组（12例）与联合大范围切肝组（44例），对比两组围手术期并发症发生率、手术死亡率及远期生存率，对患者临床病例资料进行单因素与多因素分析，并分析各因素与预后生存期的关系。结果（1）小范围切肝组及大范围切肝组并发症发生率分别为33．3％和65．9％，后组明显高于前组（P〈0．05）；（2）肝门部胆管癌小范围切肝组术后第1、3年生存率分别为60％和15％；大范围切肝组术后第1、3年生存率分别为64％和15％，两组差异无统计学意义（P〉0．05），总体中位生存期为16个月；（3）R0切除组中位生存期显著长于R1／R2切除组（22个月比10个月，P〈0．05）；（4）单因素分析显示，与肝门部胆管癌手术预后相关的因素是年龄、术前血清CA19-9水平、肿瘤分化程度、镜下切缘情况、肝动脉侵犯及门静脉侵犯和淋巴结转移；多因素分析显示镜下切缘程度和术后肿瘤分化程度与肝门部胆管癌患者手术预后显著相关（P〈0．05）。结论R0切除能够明显延长肝门部胆管癌患者的生存期，手术应该重视获得病理阴性切缘；在保证R0切除的基础上，对选择性患者进行小范围肝切除能够降低围手术期并发症发生率及病死率。

CXC趋化因子受体7在胆管癌组织的表达及临床意义

目的探讨CXC趋化因子受体7（CXCR7）在人胆管癌细胞株及胆管癌组织的表达并分析其临床意义。 方法采用Western blot技术检测人胆管癌RBE细胞株中CXCR7的表达，采用免疫组织化学技术检测CXCR7在70例胆管癌组织和15例非肿瘤胆道上皮组织中的表达。 结果Western blot检测结果表明，胆管癌RBE细胞株中能够检测到CXCR7的表达值为（0.28±0.05）；免疫组织化学结果显示胆管癌组织中存在CXCR7蛋白表达。70例胆管癌、15例非肿瘤胆道上皮组织中阳性表达率分别为84.3%和0。CXCR7蛋白在胆管癌中的表达均明显高于非肿瘤胆道上皮组织（χ2＝41.332，P＝0.000）。胆管癌组织中CXCR7蛋白表达与临床分期和淋巴结转移明显相关（χ2＝5.132，P＝0.023；χ2＝8.451，P＝0.004）。生存分析结果表明，CXCR7高表达患者生存期短于低表达患者（χ2＝9.060，P＝0.003）。 结论CXCR7与胆管癌的发生发展有关。

WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因（WWOX）表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制。方法用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞；采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达；流式细胞仪（FCM）法检测转染前后各细胞凋亡率的变化；JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化；荧光定量RT—PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化；将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤，TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡。结果建立了稳定表达WWOX基因的QBC939／WWOX细胞株，mRNA及蛋白表达明显增加。FCM显示QBC939／WWOX组的细胞凋亡率明显增高[（1．24±0．35）％比（1．73±0．48）％比（21．40±2．35）％，P〈0．01]，JC-1显示转染组的线粒体膜电位下降[（4．27±0．64）％比（4．96±0．52）％比（28．60±3．94）％，P〈0．01]，bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低（P〈0．05）。转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢（P〈0．05），TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为（13．6±1．5）％，较对照组明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡，其机制可能与下调bcl-2的表达，激活线粒体凋亡通路有关。

抗胆管癌浸润的实验研究

目的探讨胆管癌细胞浸润和转移的生物学机制及阻断其浸润过程的可行方法.为发展新的抗肿瘤疗法提供依据。方法利用底物捕获免疫分析法、微量分光光度法和人羊膜浸润培养系统,观察不同环节阻断对 QBC_(939)胆管癌细胞Ⅳ型胶原酶和尿激酶型纤溶酶元激活物(u-PA)分泌量或活性的抑制作用及对其体外浸润能力的影响。结果层粘素 P11片段能够降低胆管癌细胞Ⅳ型胶原酶分泌量,并抑制胆管癌细胞的体外浸润能力。u-PA 及其作用产物纤维蛋白溶酶抑制剂反-对氨甲基环已酸和6-氨基己酸可抑制 QBC_(939)细胞 u-PA 的活性,并显著抑制其体外浸润能力,与层粘素 P-11片段联合应用抑制效应更强。结论多途径阻断肿瘤浸润过程的关键环节在未来肿瘤临床治疗中具有应用前景。

SET-及MYND-结构域含有蛋白3真核表达载体的构建及对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响

目的构建SET-及MYND-结构域含有蛋白3（SMYD3）荧光质粒并观察组蛋白甲基转移酶SMYD3对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响。方法在人源组织中调取并扩增SMYD3基因酶切并连接于pEGFP—C3质粒构建SMYD3荧光质粒pEGFP—C3-SMYD3。利用质粒转染人肝门部胆管癌细胞株FRH0201并检测SMYD3表达改变，利用细胞计数试剂盒（CCK-8）方法及Transwell方法检测过表达SMYD3后细胞生长及迁移能力变化。结果酶切及测序结果显示SMYD3成功连接入pEGFP—C3载体中，Westernblot法结果显示在质粒转染组中SMYD3表达较未转染组升高（73．23±5．60）％，较未转染组及空质粒转染组SMYD3表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）；CCK-8方法及Transwell方法显示转染组细胞生长速度较未转染组及空白组加快，迁移能力增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SMYD3的过表达促进肝门部胆管癌细胞的增殖及迁移，可能是调控肝门部胆管癌发生发展的因素之一。

替吉奥单药治疗胆管细胞癌根治术患者的临床疗效

目的 探讨替吉奥单药治疗胆管细胞癌根治术患者的临床疗效.方法 回顾性分析2011年11月至2013年12月浙江大学医学院附属第二医院收治的51例行胆管细胞癌根治术患者的临床资料.25例患者术后未行化疗,设为未化疗组;26例患者术后行替吉奥单药化疗,设为化疗组.未化疗组患者行胆管细胞癌根治术后无特殊处理.化疗组患者术后给予替吉奥单药化疗,用法：口服,2次/d,分别为早、晚餐后;用量：体表面积＜1.25 m^2的患者为40 mg/次,1.25 m^2≤体表面积＜ 1.50 m^2的患者为50 mg/次,体表面积≥1.50 m^2的患者为60 mg/次.连续用药14 d后停药7d,为1个疗程.常规给予6～8个疗程.采用门诊和电话方式进行随访,随访时间截至2014年12月1日.计数资料比较采用x2检验.符合正态分布的计量资料以x^-±s表示,采用t检验进行比较.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank检验进行生存分析.结果 化疗组26例患者均完成化疗疗程,无化疗相关死亡患者.14例患者出现化疗不良反应,停药后均明显缓解.51例患者均获得随访,随访时间为5～37个月,中位随访时间为19个月.未化疗组患者总体中位生存时间为22个月（18～27个月）,1、3年总体生存率分别为72.3％和42.9％;无瘤中位生存时间为21个月（16 ～ 26个月）,1、3年无瘤生存率分别为60.0％和55.0％.化疗组患者总体中位生存时间为32个月（29 ～ 35个月）,1、3年总体生存率分别为84.6％和44.4％;无瘤中位生存时间为26个月（21 ～31个月）,1、3年无瘤生存率分别为76.9％和61.9％.两组患者总体生存情况比较,差异有统计学意义（x2=6.032,P＜0.05）;两组患者无瘤生存情况比较,差异无统计学意义（x2=0.498,P＞0.05）.结论 胆管细胞癌患者行根治术后给予替吉奥化疗,能取得明显的生存获益,但在抑制胆管细胞癌复发方面,无明显优势.

环氧合酶-2与胆管癌治疗的相关研究及进展

环氧合酶（cyclooxygenase，cox）g前列腺素（prostaglandin，PG）合成过程中的限速酶，至少有2个亚型，即COX-1和COX-2。近年的研究发现，COX-2与肿瘤的发生、发展以及转移有密切关系，COX-2抑制剂有望成为肿瘤治疗的新靶点。本文就COX-2在胆管癌中的表达、调控和致癌机制以及COX-2抑制剂对胆管癌的治疗进展作一综述，展望COX-2抑制剂在胆管癌治疗中的前景。

浸润门静脉区域的癌肿整块切除的临床研究

目的许多近、远端胆管癌及壶腹周围癌的病人因血管受侵犯而丧失手术切除机会,本研究为提高手术切除率,延长生存期,改善病人生活质量而设计。方法 1990年3月～1996年10月,作者对50例近端胆管癌切除术和47例壶腹周围癌胰十二指肠切除术中的19例浸润了门静脉的患者,分别采用联合门静脉长度1.0～1.5cm;门静脉与肠系膜上静脉及脾静脉汇合部切除5例,切除长度2.0～4.0cm,门静脉侧壁切除5例。均行对端吻合成功。结果 19例中,17例恢复顺利,随访4～29个月,平均14个月,四例生存时间超过一年。围手术期死亡2例(10.5%)。结论癌肿浸润门静脉主干不超过2cm,浸润门静脉及肠系膜上静脉汇合部不超过5cm,无远处转移,可联合门静脉切除并行对端吻合是可行的。