浙贝乙素胆汁酸盐的制备及其镇咳、祛痰和平喘活性的筛选

为了寻找具有优良镇咳、祛痰和平喘活性且毒性较低的药物,将贝母中的主要药效成分之一浙贝乙素和蛇胆中各主要药效成分进行酸碱反应,得到一系列浙贝乙素胆汁酸盐并对所得的盐进行镇咳、祛痰和平喘活性的筛选。活性筛选结果显示,浙贝乙素胆酸盐和浙贝乙素鹅去氧胆酸盐的镇咳、祛痰和平喘活性较强,尤其是二者显示出比磷酸可待因还强的镇咳活性值得关注。借鉴药物化学中的结构拼合思路有望在中药复方的研究开发中开辟出一条新的途径。

浙贝乙素胆酸盐中浙贝乙素和胆酸的含量测定

目的建立浙贝乙素胆酸盐中浙贝乙素和胆酸的含量测定方法。方法以甲醇-乙酸铵(0.1 mol.L-1)-三乙胺-冰乙酸(78∶22∶0.2∶0.03)为流动相,C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,流速为1 mL.min-1;蒸发光散射检测器检测(漂移管温度72.1℃,氮气流速2 mL.min-1)。结果浙贝乙素胆酸盐中浙贝乙素和胆酸分别在50.4～151.1μg.mL-1(r=0.999 6,n=5)、50.5～151.4μg.mL-1(r=0.999 9,n=5)内峰面积与浓度呈良好线性关系;平均回收率分别为99.17%(RSD=0.62%)和99.37%(RSD=0.63%)。结论该方法测定浙贝乙素胆酸盐中的浙贝乙素和胆酸含量简便,可靠,重复性好。

胆盐对附红细胞体活力影响试验

目的观察胆盐对附红细胞体活力的影响,探讨附红细胞体的消化道传播。方法以附红细胞体菌种与0.003%、0.03%、0.1%、0.2%、0.3%、3%猪胆盐溶液分别按1∶3混合,于37℃中,分别在1h、2h、3h、4h、5h、6h、24h用压片镜检法观测附红细胞体的活力变化。结果 3%的胆盐在2 h内能显著刺激附红细胞体增强其活力,2 h后其活力下降,6 h时其活力丧失;0.3%的胆盐在4 h内能刺激附红细胞体活力增强,4 h后下降,24 h时活力微弱;0.1%的胆盐能24 h保持附红细胞体的活力,且在3-4 h活力增强;0.003%的胆盐能在3 h内保持其活力,其后其活力减弱。结论高浓度的胆盐能先刺激附红细胞体增强其活力,随后很快抑制其活力,甚至将其杀死;0.1%的胆盐能保持附红细胞体的活力;更低浓度胆盐长时间作用也降低附红细胞体活力。

鲈鱼活性肽的制备工艺及其体外降血脂活性研究

以海洋鲈鱼为原料,采用胰蛋白酶酶解制备活性肽,以水解度为指标,采用正交试验法对酶解条件进行优化,运用胆酸盐结合试验比较制备的活性肽的体外活性。结果表明,胰蛋白酶酶解鲈鱼蛋白最佳酶解条件为:酶解温度40℃、酶添加量20 000 U/g、pH值8.5、酶解时间5 h,此时水解度可达到12.5%;通过胆酸盐结合试验,发现其体外降血脂活性与酶解时间有关,酶解5 h的酶解液降血脂活性最高(与降血脂药物考来烯胺相当)。

蛹虫草多糖降胆固醇作用的机制探讨

目的提取并纯化蛹虫草多糖(CMPS),分析相对分子质量分布,初步探讨其降胆固醇的作用机制。方法通过热水提取-醇沉法分离CMPS,采用Sevage试剂、AB-8大孔吸附树脂进行纯化,应用高性能凝胶渗透色谱明确CMPS相对分子质量分布。模拟机体胃肠道环境,测定不同质量浓度CMPS结合胆酸盐能力;培养HepG2细胞,观察CMPS对肝细胞增殖率及细胞内胆固醇水平的影响,蛋白免疫印迹分析肝细胞内3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA-R)及甾醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)表达变化。结果 CMPS中相对分子质量为3 119 kDa的多糖含量最高;CMPS体外结合胆酸盐能力较强,与胆酸钠、牛磺胆酸钠及甘氨胆酸钠的结合率分别达到63%、62%和50%。细胞实验数据表明低于200 mg/L的CMPS干预HepG2细胞24 h没有抑制其增殖率。同时,在安全质量浓度范围内(<200 mg/L),CMPS可显著下调肝细胞内SREBP-2和HMG-CoA-R蛋白表达,降低肝细胞内总胆固醇水平。结论 CMPS具有良好的体外降胆固醇活性。

阿苯达唑-胆酸衍生物的制备、表征、跨膜转运及降解评价

目的基于顶端钠依赖性胆盐转运体(ASBT)对胆酸(BA)的特异性识别,为提高阿苯达唑(ABZ)的跨膜转运效率,制备阿苯达唑-胆酸衍生物(ABZ-C6O2-BA),并对其固态性质、跨膜转运行为和降解机制进行评价。方法以6-氨基-1-羟基-二己脂作为Linker连接ABZ与BA,合成ABZ-C6O2-BA;使用核磁共振氢谱(1H-NMR)和傅里叶红外技术(FTIR)对ABZ-C6O2-BA进行验证;通过粉末X射线衍射(PXRD)法、差示扫描量热(DSC)法和扫描电子显微镜(SEM)法进行固态性质的表征;建立Caco-2单层细胞模型在体外对ABZ-C6O2-BA进行跨膜转运研究;进行ABZ-C6O2-BA体外羧酸酯酶(CES)水解反应,通过超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)定性分析ABZ-C6O2-BA水解产物。结果1H-NMR和FT-IR结果显示特征峰的偏移,证实ABZ-C6O2-BA制备成功;PXRD、DSC和SEM结果显示ABZ-C6O2-BA为无定型形态,且微观结构较ABZ有明显不同;体外跨膜转运实验结果显示高质量浓度的ABZ-C6O2-BA跨膜转运表观渗透系数(P_(app))显著高于高浓度的ABZ(P<0.05),中、低质量浓度的ABZ-C6O2-BA P_(app)相近于ABZ;ABZ-C6O2-BA在72 h时降解率>92.8%,代谢良好;通过UPLC-MS定性分析ABZ-C6O2-BA水解产物为ABZ-Linker,即CES水解了酯键,使得BA与ABZ分开。结论所制备的ABZ-C6O2-BA以无定型态存在,跨膜转运效率在一定浓度下较ABZ显著增加,且与浓度不相关,推测跨膜方式为主动转运,连接的BA可被体内的酶水解。

三种胆汁酸盐对Bilophila wadsworthia菌株生长的影响

本研究通过体外纯培养实验研究了3种胆汁酸盐:牛磺胆酸(TCA)、胆酸(CA)和脱氧胆酸(DCA),对沃氏嗜胆菌(Bilophila wadsworthia)菌株的生长状况的影响。比浊法和活菌计数法结果表明,TCA能显著促进该菌株生长,与添加相同摩尔浓度的牛磺酸(TAU)带来的效应接近,而CA和DCA对该菌株无显著作用。通过超高效液相色谱-质谱技术分析B.wadsworthia菌株对TCA的代谢的结果显示TCA可被该菌株分解产生CA和TAU。Ca2+沉淀法对B.wadsworthia菌株产胆盐水解酶的能力进行鉴定的结果表明该菌株具有产胆盐水解酶的能力。由此推断,TCA对B.wadsworthia菌株的促进作用主要是通过其水解产生的TAU,而非CA来发挥的。