用正交试验法分析四种表面活性剂的复配性能

用正交试验设计法研究月桂醇聚醚硫酸酯钠、十二烷基硫酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱和月桂酰肌氨酸钠复配的最佳使用比例,摸索四种表面活性剂对泡沫、洗后皮肤水分含量及刺激性的影响。结果显示,在给定的因素水平数里,泡沫高度的优方案为AES:13%,K12:4%,CAB:6%,LS30:5%;洗后皮肤水分含量的优方案为AES:14.5%,K12:3%,CAB:6%,LS30:2%;刺激性最小的优方案为AES:11.5%,K12:1%,CAB:6%,LS30:3%。通过试验数据分析可知,AES对泡沫高度和鸡胚试验评分有显著影响;K12对泡沫高度和洗后皮肤水分含量有显著影响;CAB对泡沫高度有影响;而LS30有助于降低鸡胚评分,在3%时效果最好。

“无泪配方”的评价体系建立与应用

发用类产品、易触及眼睛的护肤产品以及眼部彩妆上市之前,必须进行眼部刺激测试,以证明该产品对眼睛是安全的。“无泪配方”是这类产品常用的宣称,但是对于“无泪配方”的评估却缺乏相关的标准。本文旨在整合眼刺激相关的评价方法,建立一套更为全面的安全性评估体系,用于筛选和评估“无泪配方”。该评价体系包括第一层级的体外眼刺激测试、体外疼痛受体激活测试,第二层级的动物测试以及第三层级的临床试用测试和临床滴注测试。通过该体系,比较了两款开发中的儿童沐浴配方,筛选出眼刺激更低、更温和的产品。研究结果表明,此评价体系可以有效筛选出“无泪配方”,并为开发这类产品提供支持数据。

麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用

目的 :探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用。方法 :分别以重组碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,贝复济 )和生理盐水为阳性和阴性对照 ,作用于绒毛尿囊膜 (chrioallantoicmembrane ,CAM) ,通过一级、二级血管计数 ,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性 ;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响 ,验证其促血管生成效应 ;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量 ,初步探索其作用机理。结果 :麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加 ;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多 ,前者细胞表达VEGF和bFGFmRNA明显增高 ,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多。结论 :麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成。

反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用研究

目的 研究反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用。方法 在HUVECs中MTT法检测细胞活性,电镜观察细胞死亡类型,流式细胞仪定量细胞凋亡率;用鸡胚尿囊膜模型观察新生血管形成;肉瘤S180小鼠体内模型观察反应停的抗肿瘤作用,并通过免疫组化观察反应停对肿瘤组织微血管数的影响。结果 反应停对HUVECs有直接抑制作用,IC50为(22 .91±1. 74) μmol·L-1;经反应停作用48h后的HU VECs,随剂量增加,电镜下可见核不规则,染色体浓集,空泡状内质网及凋亡小体等不同时期细胞凋亡现象;流式细胞检测显示反应停可依剂量诱导HUVECs凋亡或坏死;鸡胚尿囊膜新生血管形成模型中,反应停抑制新生血管形成的阳性率随剂量而增加;小鼠S180肿瘤移植模型中,反应停单独使用,虽可明显减少肿瘤血管密度, 无抑制肿瘤生长作用;与环磷酰胺联合使用,可减少环磷酰胺用量,与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用。结论 反应停有抗新生血管形成作用,单独应用对小鼠S180肿瘤无抑制作用,但与环磷酰胺有协同作用。

鲨鱼软骨制剂抑制血管生成的研究

以鲨鱼软骨为原料 ,经盐酸胍抽提 ,丙酮分级沉淀 ,超滤等步骤得到鲨鱼软骨制剂 (sharkcartilagepreparation ,SCP) .利用整装细胞扫描电镜方法测定SCP对血管内皮细胞骨架系统的影响 ,体外细胞迁移实验测定它对内皮细胞迁移的抑制效应 ,及鸡胚绒毛尿囊膜实验测定对血管生成的抑制效应 .结果表明SCP能显著抑制内皮细胞的骨架形成 ;显著抑制内皮细胞的迁移 ,并有明显的浓度依赖关系 ;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成 .细胞骨架是细胞分裂增殖及运动迁移的基础 ,血管内皮细胞的运动迁移又是血管生成的基础 ,因此SCP的作用机理可能是通过抑制细胞骨架的形成 ,抑制内皮细胞的运动迁移 。

柴胡皂甙-d对鸡胚血管形成抑制作用的研究

目的观察柴胡皂甙-d(saikosaponin d,SSd)对鸡胚新生血管形成的作用,并探讨其作用的机制。方法制备鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)模型,86个制备成功,鸡胚开窗后,随机分为4组:SSd大剂量(20μg/mL)组,16个;SSd中剂量(10μg/mL)组,19个;SSd小剂量(5μg/mL)组,25个;对照(PBS,0.01 mol/L)组,26个。将药物或试剂20μL置于CAM表面的载体上。3天后,用数码照相机照像记录血管生长情况;HE染色,普通光镜下观察炎性细胞计数;Leica图像分析系统计算血管生成反应阳性率。结果胚龄第6天时,CAM血管生长呈叶脉状,以载体为中心呈放射状生长,可见血管辐轴,贯穿于载体。加样后SSd各剂量组血管生成明显减少,明胶海绵周围放射状走行的微血管极不明显,可见血管截断、缺如现象。显微镜下SSd各剂量组明胶海绵内及周围CAM间充质内微血管数目及炎性细胞浸润数目均较对照组减少。SSd对中、小血管形成的抑制作用最明显(P<0.05,P<0.01),而对大血管形成的抑制作用较弱,和对照组比较(5.06±1.89vs5.56±2.38),差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析显示CAM大血管生成数目与炎性细胞浸润程度未见明显的相关关系(r=0.117,P>0.05);随着炎性细胞浸润数目的增加,CAM小血管生成明显增多,两者呈显著正相关(r=0.971,P<0.01)。结论SSd能够抑制鸡胚生理性血管生成,对中、小血管生成的抑制作用明显,而对大血管形成未见明显的抑制作用,其机制可能与SSd抑制白细胞的游走、活化作用密切相关。

鸡胚尿囊膜血管生长的特点及观测方法

研究鸡胚尿囊膜血管的特点以及观测方法。培养海兰种种蛋 ,观测不同培养天数以及模拟用药后鸡胚尿囊膜血管数量、血管面积的变化。结果表明 ,鸡胚尿囊膜血管数量、血管面积随培养天数的增加而增加 ,生存能力亦随之增强。培养

蝎毒多肽提取物的抗血管生成作用

用不同浓度的东亚钳蝎素的多肽提取物PESV(4￣20μg/ml)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察HUVEC增殖活性和凋亡变化,增殖活性检测采用BrdU掺入的ELISA法,凋亡水平和凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的检测采用流式细胞术检测;用鸡胚尿囊膜(CAM)显示PESV对血管生成的抑制作用。结果显示,PESV抑制HUVEC的增殖,而对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖无明显影响;PESV作用72h后,HUVEC凋亡相关基因Bcl-2表达降低,Bax表达增加,凋亡细胞比例增至10.5%,明显高于对照组;0.5mgPESV能明显抑制CAM新生血管的形成。因此,PESV具有良好的体外抗肿瘤血管生成活性,PESV作为一种肿瘤血管抑制剂的天然药物来源,其有效成分和药理作用有待进一步研究。

鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域的应用及研究进展

鸡胚因发育过程清楚,长久以来作为基础和应用科学研究领域重要的实验模型,尤其在鸡胚发育早期绒毛尿囊膜阶段,因其血管丰富,是天然的免疫缺陷宿主,是病理学、药理学和肿瘤学等研究领域的理想实验模型。作者简述了发育早期的鸡胚组织结构,并介绍了鸡胚绒毛尿囊膜在肿瘤研究、血管生成、器官移植、烧伤等疾病机理研究中的应用,以及在鸡胚病理模型基础上进行的抗肿瘤药物筛选的应用。重点介绍了鸡胚及禽类细胞系在病毒繁殖和疫苗生产、治疗性蛋白和单抗生产方面的应用研究进展。多种人源病毒、禽源病毒、支原体等可在鸡胚及禽类细胞上增殖,并用于疫苗生产。作者对常用的禽类纤维原细胞和多能干细胞的发展和特点进行了阐述,并总结了商业化的禽类细胞系来源以及部分易感病毒。鸡胚表达系统能够在目的蛋白特定位点产生人源化糖基,减少目的蛋白对人的过敏反应,且禽蛋廉价易得,可作为生产人用单克隆抗体和治疗性蛋白的合适供体。作者介绍了鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域应用的最新进展,并对鸡胚作为动物模型在未来的应用进行了展望。

慢病毒介导shRNA沉默survivin基因对鸡胚绒毛尿囊膜子宫内膜异位症模型的影响

目的研究慢病毒介导生存素基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对子宫内膜异位症异位内膜生长及新生血管形成的影响。方法建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)子宫内膜异位症模型,随机分成单纯接种组、shRNA慢病毒组、空载慢病毒组和空白载体组,每组30只。通过Image-proplus软件测量新生血管面积与鸡胚尿囊膜面积比(VA/CAM)评价沉默survivin基因对CAM血管生成的影响,TUNEL检测异位内膜细胞凋亡,组织病理学观察异位内膜病灶生长行为。结果 shRNA慢病毒处理组种植内膜存活率最低,该组VA/CAM明显低于单纯接种组、空载慢病毒组和空白载体组(P<0.001),后3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组种植内膜细胞凋亡率明显高于其他3组(P<0.05),另3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组病灶在光镜下可见腺体结构不完整,间质伴有不同程度的坏死。结论慢病毒介导survivin基因特异性shRNA能够显著抑制人子宫内膜异位症种植CAM模型的新生血管形成,抑制子宫内膜在CAM上的种植生长。

蝎毒多肽提取物对小鼠S_(180)肉瘤和H_(22)肝癌血管生成抑制作用的实验研究

目的 :在器官和体内水平观察东亚钳蝎蝎毒的多肽提取物 (PESV)的抗血管生成活性和对肿瘤生长的抑制作用。方法 :①观察PESV对鸡胚尿囊膜 (CAM )新生血管生成的影响。②观察皮下注射PESV(0 .3mg/kg)对S180 肉瘤和H2 2 肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长和肿瘤血管生成的影响。③用免疫组化的方法观察PESV对S180 肉瘤和H2 2肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织血管内皮细胞生长因子VEGF和bFGF表达的影响。结果 :0 .5mg/CAM和 0 .8mg/CAM的PESV能明显抑制CAM新生血管的形成。PESV能明显抑制小鼠S180 肉瘤和H2 2 肝癌的肿瘤生长和血管生成水平 ,并降低肿瘤组织内血管生成相关因子VEGF和bFGF的表达。结论 :PESV具有良好的体内和体外抗肿瘤血管生成活性 ,并藉此抑制肿瘤的生长。

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

鸡胚绒毛尿囊膜模型在肿瘤研究领域的进展

鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoie membrane,CAM)是近几年兴起的一种新型的肿瘤模型,与动物肿瘤模型相比具有简便价廉、便于动态观察、敏感性强等优点。利用CAM肿瘤模型可以筛选抗肿瘤药物,对其作用机制如抗血管生成、肿瘤侵袭、转移等方面研究作出一定贡献。但此肿瘤模型的应用目前仍存在一定的不足之处,正确应用该模型将为肿瘤体外实验研究提供有力的说服力。

蝎毒多肽对鸡胚血管生长的抑制作用

目的:探讨从东亚钳蝎蝎毒中分离的蝎毒多肽(STP)对血管形成的抑制作用。方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)的新生微血管模拟肿瘤的新生血管,用玻璃纤维滤纸吸附生理盐水和0.8μg、0.5μg的STP作为移植片,分别置入各组鸡胚的CAM上,孵化48h后,观察STP对CAM新生血管形成的影响。结果:0.5μgSTP实验组微血管密度及母血管的扩张均明显低于生理盐水组(P<0.01),表明STP能明显抑制CAM的新生血管的生长。结论:提示小剂量蝎毒多肽是一种有效的天然新生血管形成阻断剂。

顺式CA1P对肿瘤细胞增殖和血管生成的影响

目的:研究顺式考布他汀二磷酸四钠(cis-CA1P)对体外培养肿瘤细胞增殖的作用,以及对鸡胚尿囊膜血管和离体培养的大鼠主动脉环血管生成的影响。方法:通过测定MTT评价药物对体外培养肿瘤细胞的作用;建立培养鸡胚尿囊膜模型、离体培养大鼠动脉环,研究顺式CA1P对血管生成的影响。结果:顺式CA1P对MGC-803人胃癌细胞、U937人急性髓系白血病细胞、A375人黑色素瘤细胞、HCT116人结肠癌细胞、MDA-MB-231人乳腺癌细胞、K562人白血病细胞具有显著的生长抑制作用,且呈明显的浓度依赖性;顺式CA1P呈剂量依赖性抑制鸡胚尿囊膜血管及离体培养的大鼠主动脉环血管生成,并可以抑制血管内皮细胞的运动及血管网络状结构形成。结论:顺式CA1P具有抑制肿瘤细胞增殖和抗血管生成的作用。

麦考酚酸抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用的研究

将48枚种蛋随机分为4组,孵育5d,然后把含有不同剂量的麦考酚酸(MPA)的滤纸圆片置于鸡胚尿囊膜(CAM)上。继续孵育48h后,在体视显微镜下观察CAM血管生长情况。结果表明8、4、2μg/egg剂量的MPA都能不同程度地抑制CAM的血管生成,并呈正相关。为MPA作为抗血管生成药物的研究奠定良好的基础。

抗坏血酸有机锗倍半氧化物抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用的研究

目的研究抗坏血酸有机锗倍半氧化物对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法在七日龄CAM上植入含不同剂量试药的甲基纤维素膜片,并孵化48 h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数,以此来反映试药对CAM新生血管形成的影响。结果抗坏血酸有机锗倍半氧化物2.5,1.5,0.5 mg/egg剂量相关性减少CAM局部的血管数。结论抗坏血酸有机锗倍半氧化物对CAM新生血管有显著的抑制作用。

改良光鸡胚试验评估化妆品用超细二氧化钛的光毒性

通过对德国人Neumann的光鸡胚试验进行了改良,并对其评估化妆品用超细二氧化钛的光毒性方面进行了初步应用。实验采用2×2阶测试设计,将受试物以无毒浓度作用于培育9 d的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM),继而暴露于5 J/cm2的UVA紫外区,去除受试物后再孵育24 h,观察CAM血管反应并计算光刺激指数,区分光毒性效力。通过对10种不同粒径、晶型、表面涂层的超细二氧化钛原料的应用研究发现,该改良光鸡胚试验可作为一种对超细无机防晒原料进行光安全性筛选的简便快捷、高灵敏度的体外替代方法。

一种睫毛生长液配方的性能验证

按照相关标准和方法对一款睫毛生长液配方进行了内控测试、安全性试验和在体功效性评价试验,从而验证睫毛生长液的性能。内控测试包括化妆品的理化测试、微生物试验和稳定性测试。安全性试验为鸡胚绒毛尿囊膜试验。最后筛选30名志愿者使用该配方睫毛生长液一个月验证产品功效性。结果表明:该睫毛生长液配方通过了内控指标测试,对眼睛无刺激性,并且具有显著促进睫毛生长的功效。

氯雷他定温敏性凝胶鼻粘膜毒性以及刺激性探究

探究氯雷他定温敏性凝胶剂通过鼻腔给药是否产生鼻黏膜毒性以及刺激性。以鸡胚尿囊膜为模型进行空白凝胶以及给药凝胶对比试验,观察是否产生出血、凝血、溶血等现象;以新西兰白兔为模型观察凝胶剂的刺激性,观察是否出现皮肤红斑、水肿等情况。结果表明,氯雷他定凝胶剂对鸡胚尿囊膜未产生出血、凝血、溶血现象;也不会引起对新西兰白兔刺激反应。