HPLC法同时测定黄花蒿水提浸膏中青蒿素、青蒿乙素、猫眼草黄素和猫眼草酚D的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定黄花蒿水提浸膏中青蒿素、青蒿乙素、猫眼草黄素、猫眼草酚D的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈(A)-纯水(B),梯度洗脱;体积流量:0.8 mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:210 nm。结果青蒿素、青蒿乙素、猫眼草黄素和猫眼草酚D进样量分别在1.6088~16.088μg(r=0.9999)、0.0141~0.1414μg(r=1)、0.1851~1.8509μg(r=0.9999)、0.1441~1.4414μg(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)分别为102.44%、97.82%、95.07%、95.55%,RSD分别为1.12%、1.44%、1.29%、1.53%。结论该方法简便准确、可靠稳定、重复性好,可用于同时测定黄花蒿水提浸膏中青蒿素、青蒿乙素、猫眼草酚D、猫眼草黄素的含量。

高效液相色谱法测定藏药亚吉玛(肉质金腰)中金腰乙素含量

目的建立测定藏药亚吉玛(肉质金腰)中金腰乙素含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Inertsustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(40∶60,V/V),流速为1.2 mL/min,检测波长为350 nm,柱温为35℃,进样量为10μL。结果金腰乙素的进样量在0.04~5μg范围内与峰面积线性关系良好(R2=0.9990,n=8);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);平均加样回收率为95.39%,RSD为1.64%(n=6)。样品中金腰乙素含量为0.1323%~0.6127%(n=3)。结论所建立的方法结果准确,精密度、重复性及耐用性均良好,可用于肉质金腰中金腰乙素的含量测定。

猫眼草黄素对不同来源大鼠肝微粒体CYP450亚酶活性影响的对比研究

采用“Cocktail”探针底物法,分别以咪达唑仑、非那西丁、香豆素、奥美拉唑、氯唑沙宗、右美沙芬、甲苯磺丁脲作为CYP3A4、1A2、2A6、2C19、2E1、2D6、2C9的特异性探针底物,采用RP-HPLC-UV测定体系中底物浓度变化,比较猫眼草黄素对不同来源肝微粒体体系中(市售/自制)各亚酶活性影响及抑制类型差异。结果表明:猫眼草黄素在市售大鼠肝微粒体孵育体系中,对CYP1A2、3A4、2E1、2C19存在抑制作用,IC50值分别为0.005(CYP1A2)、0.006(CYP2C19)、0.003(CYP3A4)、0.028(CYP2E1)mmol·L^(-1),表明其对1A2、3A4抑制活性更强,但对3A4可能存在低浓度诱导、高浓度抑制的双重调节。抑制类型分别为非竞争性抑制和反竞争性抑制,Ki值分别为0.0041、0.0037 mmol·L^(-1);在自制大鼠肝微粒体体外孵育体系中,药物对CYP2C9、2A6、3A4存在不同程度的抑制作用,但反而显著提高CYP2C19酶活性,且无法确定酶抑制类型。综上,不同来源肝微粒体孵育体系存在差异,市售肝微粒体更适于体外孵育试验,若确需自制肝微粒体,应进行必要的条件优化和质量评价,以减少试验偏差。

高效液相色谱法同时测定青蒿中东莨菪内酯、猫眼草酚及猫眼草黄素

建立青蒿素抗疟相关化合物东莨菪内酯、猫眼草酚及猫眼草黄素的同时提取及其含量测定方法。采用乙醇回流提取3种化合物，HPLC-UV测定其含量，结果表明：乙醇回流提取3个目标化合物的回收率均在97．83％-99．48％之间，相对标准偏差CRSD〈5．00％）；3种化合物在各自的检测限内线性关系良好（r≥0．999），该方法的稳定性（RSD〈5．00％）、重现性（RSD〈5．00％）及精密度（RSD〈5．00％）良好。该方法简便、快速、线性范围宽，可用于青蒿药材及提取物中3种化合物的质量控制；特别适宜不同生长阶段青蒿样品中东莨菪内酯、猫眼草酚及猫眼草黄素含量的跟踪监测。

岩筋菜的化学成分研究

从岩筋菜根部乙醇提取物的中性部分分离得到三个结晶,经光谱方法鉴定为金腰素乙,22,23-二氢波菜甾酮和波菜甾醇及22,23-二氢波菜甾醇的混合物。

青蒿素工业提取废料丙酮层中猫眼草黄素等3种多甲氧基黄酮富集研究

为从青蒿素工业生产废料丙酮层中富集纯化猫眼草黄素、蒿黄素、槲皮万寿菊素3种活性多甲氧基黄酮。取一定量丙酮层,氯仿溶解,取与丙酮层生产废料质量相等的HPD-100大孔树脂拌样,挥干后上HPD-100大孔树脂,60%、70%、80%、90%EtOH/H 2O依次进行洗脱;以RP-HPLC-UV为目标化合物追踪方法,取含目标化合物的70%洗脱部分,上硅胶柱,以石油醚-丙酮梯度洗脱,100∶13馏份有黄色结晶(1),100∶15馏份有黄色结晶(2),100∶20馏份有黄色结晶(3),经TLC、RP-HPLC-UV及1H NMR、13 C NMR分析,确定为猫眼草黄素(1,3000 mg)、蒿黄素(2,1000 mg)、槲皮万寿菊素(3,500 mg),以上既为后续药效学研究提供原料,也为青蒿素工业废料循环利用奠定重要基础。

猫眼草黄素-β-环糊精包合物的制备与初步评价

目的初步研究恒温磁力搅拌法进行猫眼草黄素-β-环糊精包合物的制备工艺。方法采用L9(34)正交实验设计,以β-环糊精与猫眼草黄素的投料比、包合温度、搅拌时间为考察因素,以猫眼草黄素的包封率为考察指标,确定最佳制备工艺。采用红外光谱法和示差扫描量热法对制备的包合物进行初步评价。结果最佳包合工艺条件:猫眼草黄素与β-环糊精物质的量比为1∶7,包合温度为60℃,包合时间为4 h。红外光谱法和示差扫描量热法能确证猫眼草黄素-β-环糊精包合物的形成。结论优选的β-环糊精包合工艺简单,可操作性强。

青蒿素工业提取废弃物及其主要成分猫眼草黄素抗肿瘤-增敏双效作用的研究

为探究青蒿素工业提取废弃物丙酮层及其主要成分猫眼草黄素的抗肿瘤活性及对抗肿瘤药的增敏作用,采用细胞增殖与活性检测法(CCK-8),考察丙酮层及猫眼草黄素与青蒿素、青蒿琥酯、阳性抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶及甲氨蝶呤复配前后,对结肠癌细胞LS174T、肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549增殖的影响;采用Compusyn 1.0专业软件分析处理,得到各药物抑制肿瘤细胞增殖的效应值(fraction affected,Fa)与联合指数(combination index,CI)关系。结果表明:猫眼草黄素和丙酮层对LS174T、HepG2细胞均具有较强的抗肿瘤活性,且猫眼草黄素和丙酮层显著提高5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、青蒿素和青蒿琥酯抗肿瘤活性;在LS174T细胞模型上,猫眼草黄素-青蒿素、丙酮层-青蒿素、丙酮层-5-氟尿嘧啶、丙酮层-青蒿琥酯复配均存在协同作用;在HepG2细胞模型上,猫眼草黄素-青蒿素、猫眼草黄素-青蒿琥酯、丙酮层-5-氟尿嘧啶、丙酮层-青蒿素、丙酮层-青蒿琥酯复配亦存在增敏作用。综合而言,工业废弃物丙酮层及其主要成分猫眼草黄素,不仅其二者本身具有较好的抗肿瘤活性,可为临床上提供潜在的天然小分子抗肿瘤部位或单体化合物,还可作为一种化疗增敏剂,增强潜在抗肿瘤药青蒿素衍生物及临床常用抗肿瘤药5-氟尿嘧啶的化疗敏感性,在为临床提供广谱抗肿瘤药和化疗增敏剂的同时,实现工业废弃物的循环利用。

猫眼草黄素对破骨细胞分化及自噬作用的研究

目的研究猫眼草黄素对破骨细胞分化的影响及自噬在其中的作用。方法采用核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化成破骨细胞,空白组给予完全培养基,模型组给予含50.0 ng/mL RANKL的培养基,A~F组给予不同水平猫眼草黄素(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L)+含50.0 ng/mL RANKL的培养基。染色后计数破骨细胞数目,同时通过Western blot检测自噬相关蛋白LC3、ATG5的表达情况。结果C~F组破骨细胞数量与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组及B、D、E组中自噬相关蛋白ATG5表达未见明显变化(P>0.05)。与空白组比较,模型组自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.05)。与模型组比较,B、D、E组自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)。与模型组比较,猫眼草黄素干预1、3、5 d时,自噬相关蛋白ATG5表达无明显变化(P>0.05)。在干预3、5 d时,自噬相关蛋白LC3的表达较模型组明显下降(P<0.05)。结论猫眼草黄素对破骨细胞的分化有抑制作用,且呈剂量依赖性,其可能通过自噬途径发挥抑制作用。

UPLC-MS/MS测定青蒿素代谢抑制剂猫眼草黄素及大鼠血浆药代动力学研究

目的：建立UPLC—MS／MS测定大鼠血浆中青蒿素代谢抑制剂猫眼草黄素（chrysosplenetin，CHR）的体内分析方法，并考察其药代动力学参数。方法：血浆样品以乙腈沉淀蛋白；采用Shim—packXR．ODS C18色谱柱（2．0mm×100mm，2．2μm），以地西泮为内标，流动相为甲醇-0．1％甲酸水溶液（87：13）；质谱条件为电喷雾离子源（ESI源），正离子模式检测；样品分析时间为2min。结果：CHR在5～5000μg·L-1线性良好（r=0．9993），提取回收率为69．O％～81．2％，日内、日间精密度和准确度符合要求。CHR口服吸收差，存在双峰甚至多峰现象；静脉注射消除半衰期短，低、中、高剂量组t。分别为（17．01±8．06），（24．62±4．59），（28．46±4．63）min。结论：该方法特异、快速、灵敏，可用于CHR药代动力学分析。

黄花蒿酚类物质及其抗氧化活性对施肥的响应

研究施肥对黄花蒿Artemisia annua根、茎、叶总多酚、东莨菪内酯、猫眼草酚、猫眼草黄素的含量、累积量及其抗氧化活性的影响,为提高黄花蒿产量、质量和科学施肥提供理论依据。采用盆栽试验,设置不同施肥处理,利用高效液相色谱(HPLC)和紫外-可见分光光度法测定现蕾期根、茎、叶中的上述有效成分,以及提取物对DPPH.自由基的清除率。在黄花蒿体内,总多酚、东莨菪内酯、猫眼草酚和猫眼草黄素的分布趋势:叶>茎>根。黄花蒿的抗氧化活性与总多酚、东莨菪内酯、猫眼草酚、猫眼草黄素之间均呈显著正相关。施肥显著促进黄花蒿生长,纯施无机肥肥、纯施有机肥和有机无机配施的生物量比不施肥分别增加57.37%,91.63%,92.27%。施肥尤其是有机无机配施通常能提高黄花蒿总多酚、猫眼草酚和猫眼草黄素的含量和累积量,以及DPPH.自由基清除率。东莨菪内酯、猫眼草酚、猫眼草黄素主要在叶片中合成和储存,是主要的药用器官。在黄花蒿施肥实践中,提倡有机无机配施,可提高黄花蒿产量和质量,增加药农收入。