烟曲霉Af293 chsD基因缺失突变株的构建

目的构建Af293 chs D缺失突变株,并对chs D的功能进行初步的研究。方法 PCR扩增chs D两侧部分序列并连接至p PK2质粒的潮霉素表达盒两端,从而构建重组质粒p PK2/chs D-(L+R)。酶切p PK2/chs D-(L+R)并胶回收含chs D左侧、hph表达盒及chs D右侧的片段,连接至p DHt/SK而构建二元质粒p DHt/chs D::hph。经ATMT方法将p DHt/chs D::hph转化至Af293,经潮霉素抗性筛选从而获得烟曲霉△chs D突变株,并测量Af293,△chs D突变株生长直径及扫描电镜下观察分生孢子形态。结果经PCR初步鉴定,筛选出的突变株中,其染色体中的chs D序列已被hph置换,初步形态研究表明,△chs D突变株的生长速度显著低于Af293野生型,且分生孢子凹陷呈干瘪状。结论成功获得Af293△chs D突变株。chs D基因功能初步研究表明,chs D可能与烟曲霉的生长相关。