广东与湖南养殖鳜群体随机扩增多态DNA研究

采用RAPD技术对广东和湖南养殖鳜群体进行了遗传多样性分析。从40个随机引物中筛选出22个有效引物,共扩增产生289条RAPD标记片段,广东养殖群体共产生155条扩增片段,湖南养殖群体共产生134条扩增片段,有122条带为两群体共有。广东和湖南养殖群体内平均遗传距离分别为0.063 3和0.062 9,两群体间遗传距离为0.129 9。广东和湖南养殖群体Shannon多样性值分别为0.069 0和0.072 3,多态座位比例分别为25.16%和10.15%。与脊椎动物平均多态座位比例比较,发现其遗传多样性并不很丰富。因此,需要在生产过程中要采取行之有效的管理措施以避免或减少遗传多样性水平的降低,确保鳜养殖业的可持续发展。

长江水系不同水体鳜mtDNA控制区序列的遗传分析

对长江水系洞庭湖、鄱阳湖、秋浦河和太湖4个鳜群体共42尾的mtDNA控制区核苷酸序列进行了测定,获得了长度785bp的同源序列．4个群体中共检测到变异位点36个,占全部序列4．6%．42个体中共检测到19种单倍型,根据碱基组成特征,19种单倍型可分为两大类型：Ⅰ型和Ⅱ型．两大类型的主要区别在第6、8、17、25、35变异位点上,Ⅰ型的核苷酸分别为G、C、G、A、C,Ⅱ型为A、T、A、G、T．除太湖群体全部表现为Ⅱ型单倍型外,不同水体鳜两大单倍型的分布频率并无明显的地理变化规律．洞庭湖、鄱阳湖、秋浦河和太湖鳜群体内的核苷酸序列差异分别为0．5%、1．0%、0．6%、0．5%,群体间的遗传差异为0．6%-0．9%．利用控制区核苷酸序列构建的NJ分子树中,各群体内的个体均未单独成群,而是互有交叉．由于遗传分化低,初步认为洞庭湖、都阳湖、秋浦河和太湖鳜群体可能同属一个种群——长江种群．

高GC含量的鳜鱼rRNA基因家族的克隆

动物rRNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。该研究结合亲缘生物法生物信息学技术,经反复摸索后选用LA PCR法即LA PCR Taq酶结合GC缓冲液来扩增鳜鱼复杂的rRNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了鳜鱼的3个rRNA基因及其2个间隔序列。分析了鳜鱼与相关动物的rRNA基因序列的同源性和进化关系。探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等措施。

鳜肌球蛋白轻链2基因cDNA的克隆及其发育表达分析

通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1206bp,编码区长度为579bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2相比较,所推导氨基酸序列同源性在66.3%～97.6%,其中与Ca2+结合区域非常保守,7种鱼氨基酸序列同源性为100%.采用实时荧光定量PCR方法对鳜MLC2发育表达分析表明,MLC2在原肠期开始有低量表达,与原肠期相比,尾芽期、肌肉效应期和仔鱼阶段MLC2表达量随发育阶段渐进而升高.

鳜碱性肌球蛋白轻链基因cDNA的克隆及其发育表达分析

肌球蛋白轻链是构成鱼类肌纤维主要组成部分,在鱼类肌肉生长和收缩过程中具有重要作用。鳜鱼具有生长快、肉质细嫩、味道鲜美、营养成分高等优良的性状。研究通过构建鳜肌肉组织cDNA文库分离到两个碱性肌球蛋白轻链基因,即MLC1和MLC3基因。序列分析显示MLC1和MLC3基因cDNA序列全长分别为1237bp和1070bp,分别编码192和150个氨基酸,除去MLC1N端多出的42个氨基酸残基,MLC1与MLC3氨基酸序列同源性为80.3%。通过PROSITEtools软件预测显示两种轻链都具有两个保守的EF-手相结构,其中第二个EF-hand结构除前三个氨基酸外同源性达100%。鱼类MLC3轻链N端没有高等脊椎动物MLC3特有标志序列。采用实时荧光定量PCR方法对鳜鱼MLC1和MLC3发育性表达分析表明,在原肠期开始有低量表达,与原肠期、尾芽期和肌肉效应期相比,心搏期和仔鱼期MLC1和MLC3表达量显著升高。研究结果首次提供了鳜肌肉组织肌球蛋白主要结构基因的分子生物学信息以及它们在鳜肌肉组织发生和功能的相关性。

鳜鱼与鲢鱼肌球蛋白轻链2启动子的克隆及其序列比较分析

采用PCR方法从鳜鱼(Siniperca chuasti)基因组DNA中分离得到了鳜鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为890 bp,包含1个TATA框、3个MEF2结合位点和5个与b HLH转录因子相结合的E-框(CANNTG).用同样的方法从鲢鱼基因组DNA中分离得到鲢鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为870bp,包含了1个TATA框、1个MEF2结合位点和3个与bHLH转录因子相结合的E-框.鳜鱼比鲢鱼肌球蛋白轻链2基因启动子转录调控元件更加丰富.

翘嘴鳜肌球蛋白轻链3b基因(MLC3b)的分子克隆和特征分析

翘嘴鳜以其优良肉质性状近期已成为中国极具商品价值和大力推广的人工养殖名贵鱼类之一。为了解其控制优良肉质性状的遗传基础,本文采用同源克隆RT-PCR方法,获得该鱼肌球蛋白轻链MLC3b基因cDNA序列,该基因cDNA序列为453bp,编码150个氨基酸残基,通过PROSITE tools软件预测显示,该轻链具有两个保守的EF-手相结构和一个C-末端保守序列,且该MLC3轻链N端没有高等脊椎动物特有标志序列。MLC3b基因cDNA序列与MLC3a编码区的同源性达97.7%。本研究结果将为名贵鱼类肉质结构基因及功能的研究提供分子生物学基础。

鳜鱼的生物学特性及人工养殖

阐述了鳜鱼的生物学特性及人工养殖技术。