玉溪雪茄烟发酵霉变病原菌鉴定及生防菌筛选

为明确云南玉溪雪茄烟发酵过程中的霉变病原菌,采用组织分离法从霉变烟叶上分离病原菌,并依据柯赫氏法则,结合形态学和ITS基因鉴定病原物种类,以病原菌为指示菌筛选生防菌,经室内发酵验证防霉变效果及对香气成分的影响。柯赫氏试验结果表明,原分离病菌XJ-a与显症烟叶再分离病菌XJ-b在形态、显微、病状上高度相似,两株病原菌ITS序列与多株Aspergillusflavus菌聚为一支,序列一致性大于99%,综合形态学和分子生物学特征,确定雪茄烟叶发酵霉变病原菌为黄曲霉(A.flavus)。筛选获得3株抑菌活性较强的生防菌,其中菌株CC-3对黄曲霉的抑制带宽度达9.04 mm,鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。在发酵中添加CC-3可显著降低烟叶霉变率,在发酵15 d和30 d霉变率分别下降64.44%和52.66%,并且香气物质总量提高28.96%。本研究确定黄曲霉是玉溪雪茄烟发酵的主要致霉菌,添加生防菌CC-3进行发酵可降低黄曲霉的侵染同时提高香气成分含量。

雪茄烟叶中霉菌快速计数测试片的筛选及主要霉菌种类的鉴定

为明确引起雪茄烟叶霉变的主要霉菌种类,并筛选出适用于霉菌快速计数的测试片,分析了市售陆桥ET005、默克MC-Media、环凯HP003、3M 70200775800、美正LR10035种霉菌快速测试片在霉变雪茄烟叶中的计数效果,并采用平板计数法比对分析5种测试片检测结果的可信度及测试周期。同时对主要霉菌进行分离和纯化,并采用形态学、ITS测序和MALDI-TOF MS相结合的方法进行菌种鉴定。结果表明:霉菌快速计数测试片法检测结果略低于平板计数法,但其操作简单,判读清晰。其中,美正霉菌快速测试片综合检测效果最好,可满足日常检测的需要。引起雪茄烟叶霉变的霉菌具有多样性,曲霉属(Aspergillus sp.)是引起雪茄烟叶霉变的主要菌属,土曲霉(Aspergillus terreus)和黄曲霉(Aspergillus flavus)均可引起雪茄烟叶霉变。

雪茄烟叶关键致霉菌分离鉴定与拮抗菌株筛选及抑霉效果

为明确引起雪茄烟叶霉变的微生物种类、筛选拮抗菌株用以防治发酵雪茄烟叶霉变,从中国湖北省和多米尼加共和国产烟区的霉变雪茄烟叶中分离纯化得到致霉菌和拮抗菌株,结合形态学与分子生物学方法对菌株进行鉴定,并通过平板拮抗试验和雪茄烟叶发酵抑霉试验研究拮抗菌株的抑霉效果。结果表明,湖北省霉变雪茄烟叶的致霉菌主要为青霉属(Penicillium),其次为曲霉属(Aspergillus),多米尼加霉变雪茄烟叶的致霉菌主要为帚霉属(Sarocladium),其次为青霉属(Penicillium)。从样品中共分离出4种依赖培养型霉菌分别为桔青霉(Penicillium citrinum)、苏门答腊青霉(Penicillium sumatraense)、韦斯特迪克氏曲霉(Aspergillus westerdijkiae)和短柄帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)。筛选到对致霉菌具有良好拮抗效果的2株菌株分别为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)和沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),对霉菌的抑制率分别为96.94%和40.67%。其中,贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)可更有效地抑制发酵过程中雪茄烟叶致霉菌的滋生。