脱氧核酶对cip1/waf1 mRNA的切割及对人绒毛膜癌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨脱氧核酶对cip1/waf1mRNA的切割作用及对人绒毛膜癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 针对cip1/waf1基因的核苷酸序列,合成“10～2 3”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割cip1/waf1mRNA ;转染绒毛膜癌细胞后,用RT PCR扩增和荧光免疫方法测定cip1/waf1和凋亡相关基因bcl 2和bax的表达。结果 未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3′末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割cip1/waf1mRNA ;在转染绒毛膜癌细胞后,DzTi比DzT对cip1/waf1mRNA表现出更强的切割作用,能显著地降低细胞内cip1/waf1蛋白(p2 1cip1/waf1蛋白或p2 1蛋白)水平(P <0 0 1) ,下调bax基因的表达(P <0 0 5 ) ,但对bcl 2基因的表达和细胞的生长未表现出显著的影响(P >0 0 5 )。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT′和DzTi′在胞外和胞内均不表现对cip1/waf1mRNA的切割作用。结论 人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割cip1/waf1mRNA ,并能上调凋亡促进基因bax的表达,表明脱氧核酶确实能够通过切割cip1/waf1mRNA来参与细胞的凋亡过程。