子宫内膜癌组织叉头框转录因子O亚型3a与基质金属蛋白酶-14表达水平及相关性

目的检测子宫内膜癌中叉头框转录因子O亚型(FOXO)3a和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达。方法 63例行子宫内膜癌根治手术患者作为观察组,并留取术后组织,40例子宫内膜复杂性增生患者术后标本作为对照组,40例增生期子宫内膜诊刮标本作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测3组中FOXO3a和MMP-14的表达。结果 FOXO3a和MMP-14在三组中的表达有统计学意义。观察组中FOXO3a和MMP-14的阳性率均与肌层浸润深度、淋巴结累犯密切相关,FOXO3a的阳性率与肿瘤的最大径密切相关。观察组中FOXO3a和MMP-14的表达呈负相关性。结论子宫内膜癌中FOXO3a低表达、MMP-14高表达对肿瘤的形成和进展可能有促进作用,二者具有负向协同作用。

活动性肺结核患者血清ATG3和FOXO3水平变化对患者病情进展及预后评估的相关性分析

目的分析活动性肺结核患者血清中自噬相关基因3(ATG3)和叉头转录因子O亚型3(FOXO3)表达水平变化以及与患者病情进展及预后的关系。方法以2019年9月~2022年9月于本院就诊的91例活动性肺结核患者(观察组)为研究对象,另选取同时期于本院体检的91例健康体检者作为对照组;酶联免疫吸附法检测血清中ATG3和FOXO3表达水平;利用Spearman相关分析活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度之间的相关性;采用Logistic回归分析影响活动性肺结核患者预后的因素;采用ROC曲线分析血清中ATG3和FOXO3表达水平对活动性肺结核患者预后评估的价值。结果与对照组相比,观察组血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与轻症组相比,重症组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与预后不良组相比,预后良好组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著升高(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者ESR、PCT、CRP、TNF-α、INF-γ和IL-2相比差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度呈负相关(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,ESR、CRP、ATG3和FOXO3为影响活动性肺结核患者预后不良的因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清中ATG3和FOXO3表达水平联合预测活动性肺结核患者预后较ATG3和FOXO3单一指标预测效果更优(P<0.05)。结论活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降,且与活动性肺结核病情严重程度相关,二者联合对活动性肺结核患者预后具有较高的评估价值。

基于SIRT1/FOXO3a信号通路探讨“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

【目的】探讨“温阳通脉”灸法防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制。【方法】将10只饲喂普通饲料的C57BL/6J小鼠设为空白组;将30只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、辛伐他汀组和艾灸组,每组10只。于造模第1天开始干预,艾灸组小鼠给予膻中、神阙、内关、血海穴艾灸,辛伐他汀组给予辛伐他汀蒸馏水混悬液灌胃,共干预12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉病理形态结构,透射电镜观察小鼠胸主动脉内皮细胞超微结构,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)和叉头框转录因子O3a(FOXO3a)的mRNA表达水平,Western Blot法检测胸主动脉SIRT1和FOXO3a蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,模型组小鼠胸主动脉及血管内皮细胞病理变化明显,血清炎症因子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1水平升高(P<0.05或P<0.01),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和艾灸组小鼠的胸主动脉及血管内皮细胞结构得到明显改善,血清TNF-α、ICAM-1、VCAM-1水平均降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组和艾灸组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】“温阳通脉”灸法可通过调控SIRT1/FOXO3a信号通路减轻炎症反应防治小鼠AS。

芒柄花黄素调控miR-182/FOXO3轴对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨芒柄花黄素(FM)对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响,以及其作用机制。方法用0、12.5、25.0、50.0、100、200μmol/L FM处理人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;取生长状态良好的Ishikawa细胞,分别用25.0、50.0、100μmol/L FM处理,并命名为FM-L组、FM-M组、FM-H组,另取未处理的Ishikawa细胞作为对照组;利用细胞转染技术对处于对数生长期的Ishikawa细胞进行转染,分为miR-182 mimics组、miR-NC组、miR-182 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、pcDNA-FOXO3组、pcDNA组,将miR-NC、miR-182 mimics转染Ishikawa细胞后再用100μmol/L FM处理,记为FM+miR-NC组、FM+miR-182 mimics组;Transwell测定细胞迁移及侵袭;Western Blot检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、叉头转录因子O亚型3(FOXO3)蛋白表达;RT-PCR检测细胞中miR-182表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-182与FOXO3的靶向关系。结果与0μmol/L FM相比,12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L FM均可促进Ishikawa细胞凋亡,且25.0μmol/L、50.0μmol/L、100μmol/L FM对Ishikawa细胞凋亡的促进作用最显著;与对照组比较,FM-L组、FM-M组和FM-H组的Ishikawa细胞迁移及侵袭数目、MMP-2及MMP-9蛋白和miR-182表达水平显著降低,FOXO3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且FM浓度越高,对应的变化趋势越明显;miR-182可靶向负调控FOXO3的表达;抑制miR-182表达或上调FOXO3表达均可抑制Ishikawa细胞迁移及侵袭数目和MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);miR-182过表达逆转了FM(100μmol/L)对Ishikawa细胞迁移及侵袭的作用。结论FM可通过抑制miR-182并上调FOXO3的表达来抑制Ishikawa细胞的迁移和侵袭。

转录因子FoxO3a对PC12细胞朊蛋白管家基因表达调控的影响

目的探讨叉头转录因子O亚型(FoxO)3a对PC12细胞朊蛋白管家基因(PRNP)表达调控的影响。方法以PC12细胞为研究对象,采用siRNAs沉默基因实验、实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测PRNP转录及蛋白表达水平。通过双荧光素酶(Luc)报告基因检测试验检测Luc活性,进而评估启动子的活性。结果 FoxO3a基因沉默后,S1探针(S1)组PRNP基因表达明显上升(P<0.05);S1组FoxO3a基因被沉默后,朊蛋白(PrP)蛋白表达显著升高,与基因水平一致;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与基础对照组(pGL3-Basic+pRL-Tk)相比,阳性对照组(pGL3-Control+pRL-TK)FLuc/Rluc值明显提高(P<0.01),实验组Ⅰ(pGL3-PNRP+pRL-TK)FLuc/Rluc也显著高于基础对照组(P<0.01);当pGL3-PNRP质粒、pcDNA3.1-FoxO3a高表达质粒与海肾荧光素酶pRL系列(pRL-TK)质粒共转入细胞内,48 h后,与实验组Ⅰ相比,实验组Ⅱ(pGL3-PNRP+pcDNA3.1-FoxO3a+pRL-TK)的FLuc/RLuc值明显下降(P<0.01)。结论 FoxO3a可以负调控PRNP基因的表达,这种调控是通过结合PRNP基因启动子区域而抑制其转录来实现的。

高迁移率族蛋白A2和叉头转录因子O亚型3a在胃癌组织中的表达及意义

目的 探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)和叉头转录因子O亚型3a(FOXO3a)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 选择45例胃癌组织标本为研究组,以其癌旁组织为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织及癌旁组织HMGA2 mRNA和FOXO3a mRNA,采用免疫组化法检测胃癌组织及癌旁组织中的HMGA2和FOXO3a,用SPSS 19.0软件对结果进行统计学分析。结果 HMGA2 mRNA在胃癌组织中表达水平显著高于癌旁组织,FOXO3a mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。HMGA2在胃癌组织中阳性率显著高于癌旁组织,FOXO3a阳性率显著低于癌旁组织(P<0.05)。TNM分期越高、分化程度越低、有淋巴结转移的HMGA2表达越高,FOXO3a表达越低(P<0.05)。HMGA2和FOXO3a成负相关(r=-0.435,P=0.000)。Kaplan-Meier生存分析显示,HMGA2低表达组比高表达组有更好的累积生存率,FOXO3a高表达组比低表达组有更好的累积生存率(P<0.05)。结论 HMGA2在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织、FOXO3a表达水平低于癌旁组织,其异常表达可作为胃癌诊断的分子标记物。

微小RNA-708靶向调控FOXO3表达及对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨微小RNA-708(miR-708)对叉头转录因子O亚型3(FOXO3)表达的靶向调控作用及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用脂质体法向NSCLC细胞A549转染miR-708抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照(NC组),并设空白对照组。采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-708水平以评估转染效率,分别采用MTT法、细胞划痕实验和侵袭实验检测A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-708对FOXO3的靶向关系,采用QPCR检测FOXO3 mRNA水平。结果Inhibitor组的miR-708水平为0.241±0.057,低于空白对照组的1.027±0.121和NC组的1.186±0.254(P<0.05);与空白对照组和NC组相比,Inhibitor组转染后24~48 h时的细胞增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(33.24±1.98)%和(202.9±8.4)个,均低于空白对照组的(54.23±2.16)%和(352.7±12.5)个及NC组的(55.63±2.78)%和(361.2±13.7)个,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-708模拟物可抑制野生型FOXO3 3’端非翻译区的荧光素酶活性,而不影响突变型。QPCR结果显示,Inhibitor组的FOXO3 mRNA水平高于空白对照组和NC组(P<0.05)。结论下调miR-708水平可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能通过靶向FOXO3来发挥促癌作用,有望成为NSCLC防治的潜在靶点。

FoxO1及自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在胃癌组织的表达及意义

目的探讨叉头转录因子O亚家族1(FoxO1)及自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白轻链3(MAPLC3)在胃癌组织的表达及意义。方法收集本院2015年1月至2016年6月收治的82例手术切除的胃癌组织(胃癌组)及67例癌旁正常组织(对照组),采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平,比较组间的水平变化并分析胃癌组中FoxO1、Beclin1及MAPLC3表达变化的相关性,分析组织FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平变化与胃癌临床病理参数[性别、年龄、TNM分期、分化程度、部位、淋巴结转移及癌胚抗原(CEA)水平]的关系。结果qPCR检测结果显示,胃癌组的FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平依次为(0.489±0.032)、(0.148±0.012)和(0.581±0.038),均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组的FoxO1水平与Beclin1水平呈正相关(r=0.270,P=0.014),Beclin1水平与MAPLC3水平呈正相关(r=0.351,P=0.001),但FoxO1水平与MAPLC3水平无关(r=0.208,P=0.061);FoxO1表达与TNM分期、分化程度及淋巴结转移均有关,Beclin1表达与TNM分期、淋巴结转移及CEA水平均有关,且MAPLC3表达与TNM分期、分化程度及CEA水平均有关。结论FoxO1、Beclin1及MAPLC3在胃癌组织中表达降低,且均与TNM分期有关,对胃癌诊断及病情评估有一定价值。

miR-29b-3p靶向FoxO3基因改善非酒精性脂肪肝预后的初步研究

目的:探讨miR-29b-3p靶向叉头转录因子O亚型3(forkhead box class O3,FoxO3)对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用。方法:人肝细胞HL-7702(L02)通过miR-29b-3p抑制剂或NC抑制剂或pcDNA-FoxO3转染,经棕榈酸(palmitic acid,PA)处理后,采用油红O染色测定脂质积累;全自动生化分析仪检测甘油三酯(triglycerides,TG)、胆固醇(total cholesterol,TC)含量;ELISA检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用RT-qPCR检测FoxO3、miR-29b-3p mRNA表达;Western blot检测FoxO3蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-29b-3p靶向FoxO3。结果:与对照组比较,PA组TG(2.05±0.22)mmol/L、TC(7.80±1.23)mmol/L、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)(149.67±8.96)%、白介素(interleukin,IL)-6(157.00±18.33)%、IL-8(177.33±24.58)%、miR-29b-3p(161.00±13.00)%、MDA(0.456±0.028)nmol/mL及油红O染成红色的脂滴数量明显升高,SOD(12.91±0.53)ng/mL、GSH-Px(0.515±0.038)ng/mL含量及FoxO3(65.93±4.56)%表达明显降低;miR-29b-3p靶向FoxO3;与PA组比较,PA+miR-29b-3p inhibitor组、PA+miR-29b-3p inhibitor+pcDNA-FoxO3组可明显降低TG、TC、TNF-α、IL-6、IL-8、miR-29b-3p、MDA含量及油红O染成红色的脂滴数量,明显升高SOD、GSH-Px含量。结论:miR-29b-3p靶向FoxO3可减轻PA诱导的L02细胞脂质积累和炎症。

FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤U-2OS细胞顺铂耐药中的作用

目的:探讨FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法:利用RT-PCR和Western blotting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a的表达水平,Western blotting检测转染FOXO3a-si RNA和HIF-1α-si RNA对细胞内FOXO3a和HIF-1α表达的影响,CCK-8和Annexin V/PI染色法检测FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞DDP耐药中的作用。结果:缺氧可使人骨肉瘤细胞U-2OS中FOXO3a mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05)。FOXO3a的表达受HIF-1α调控,与正常细胞组和转染阴性序列HIF-1α-NC组相比,HIF-1α-siRNA组FOXO3a蛋白表达量均显著降低[(0.38±0.03)vs(0.89±0.08),(0.91±0.07),均P<0.01]。在缺氧条件下,FOXO3a-si RNA可降低U-2OS细胞对DDP的耐受性[(38.50±2.83)%vs(61.75±5.73)%,P<0.01],增加DDP诱导的U-2OS细胞凋亡[(73.41±6.13)%vs(32.38±2.23)%,(55.89±4.46)%,均P<0.05]。结论:缺氧通过HIF-1α依赖的方式诱导骨肉瘤细胞内FOXO3a表达,从而增强瘤细胞对DPP的耐药性。

circ-FOXO3靶向miR-761调控对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及其机制

目的研究circ-叉头转录因子O亚型(FOXO)3靶向miR-761调控对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及其机制。方法培养非小细胞肺癌细胞,分为pcDNA组、pcDNA-circ-FOXO3组、si-NC组、si-circ-FOXO3组、anti-miR-NC组、anti-miR-761组、pcDNA-circ-FOXO3+miR-NC组、pcDNA-circ-FOXO3+miR-761组,另将正常培养的NCI-H1299细胞记为NC组。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞circ-FOXO3和miR-761表达水平;细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western印迹法检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Cleaved-胱天蛋白酶(caspase)-3蛋白表达;验证circ-FOXO3和miR-761的靶向关系。结果过表达circ-FOXO3或抑制miR-761可降低NCI-H1299细胞增殖活力,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。上调miR-761可减弱circ-FOXO3过表达对NCI-H1299细胞的作用。结论过表达circ-FOXO3可能通过靶向下调miR-761,抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,并诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。

人叉头转录因子O亚型3基因重组表达质粒的构建及鉴定

目的构建人叉头转录因子O亚型3(forkhead box class O3,FOXO3)基因重组表达质粒,并检测其在人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达。方法利用3对引物从人cDNA中分别扩增大小为382、829和891 bp的3个目的片段,胶回收后进行拼接,获得hFOXO3的CDS片段,与pcDNA3.1(+)载体连接,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hFOXO3,转染人PBMC,采用Real-time PCR和Western blot分别检测hFOXO3基因mRNA水平及蛋白表达水平。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;转染PBMC后,pcDNA3.1(+)-hFOXO3组hFOXO3基因mRNA的水平分别为转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组的2 599.7和2 377.8倍,且差异均有统计学意义(P<0.001);pcDNA3.1(+)-hFOXO3组hFOXO3蛋白的表达水平分别为转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组的2和1.8倍,且差异均有统计学意义(P<0.01);而转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组间hFOXO3基因mRNA水平和蛋白的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-hFOXO3重组表达质粒,其在人PBMC中能进行hFOXO3基因mRNA的转录及蛋白的表达,为进一步研究hFOXO3的生物学功能及其作用机制奠定了基础。

氧化应激通过激活Cdk5抑制FOXO1的神经元损伤及其机制

目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。

DNA甲基转移酶1和叉头蛋白转录因子O亚型3a在结肠癌中的表达关系研究

目的通过检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)和叉头蛋白转录因子O亚型(FOXO)3a在结肠癌患者血清中的水平,分析两者在结肠癌中的关系以及联合检测预测结肠癌发生的诊断效能。方法选取2019年9月至2020年9月西安国际医学中心医院确诊并收治的结肠癌患者105例作为结肠癌组,65例同期经活检确诊的结肠息肉患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测患者血清中DNMT1、FOXO3a水平;Pearson相关分析结肠癌患者血清中DNMT1、FOXO3a的相关性;采用受试者工作特征曲线对DNMT1、FOXO3a水平在结肠癌中的诊断价值进行评估。结果对照组与结肠癌组患者血清中DNMT1水平分别为0.93±0.28和1.34±0.35,与对照组相比,结肠癌组患者中DNMT1水平显著升高,差异具有统计学意义(t=7.990,P<0.001);两组患者血清中FOXO3a水平分别为1.04±0.39和0.69±0.18,与对照组相比,结肠癌组患者中FOXO3a水平降低,差异具有统计学意义(t=7.940,P<0.001)。DNMT1和FOXO3a的水平在结肠癌患者血清中呈负相关(r=-0.687,P<0.001)。DNMT1预测结肠癌发生的曲线下面积(AUC)为0.843,敏感性为71.40%,特异性为90.80%;FOXO3a预测结肠癌发生的AUC为0.812,敏感性为88.60%,特异性为67.70%;二者联合预测结肠癌发生的AUC为0.859,敏感性为89.50%,特异性为92.30%;与FOXO3a单独检测相比,二者联合检测对结肠癌的预测价值更高(Z=1.982,P=0.047)。结论结肠癌患者血清中DNMT1水平升高,FOXO3a水平则降低,二者在结肠癌患者血清中呈负相关,二者联合检测能够有效提高结肠癌的诊断价值。

南非草药蝴蝶亚仙人掌对db/db小鼠肝脏糖脂代谢和PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的:观察南非草药蝴蝶亚仙人掌(HG)对糖尿病db/db小鼠糖脂代谢的影响,基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头转录因子O亚族1(FoxO1)信号通路探索HG对db/db小鼠肝脏可能的机制。方法:30只db/db小鼠根据空腹血糖随机分为5组:模型组、二甲双胍组(0.195 g·kg^(-1))、HG低剂量组(0.39 g·kg^(-1))、HG中剂量组(0.78 g·kg^(-1))、HG高剂量组(1.56 g·kg^(-1)),每组6只,并设6只m/m小鼠为正常组。正常组和模型组小鼠给予9 mL·kg^(-1)等体积生理盐水灌胃。每周检测各组小鼠体质量、饮食水量及空腹血糖。连续给药6周后取材,测空腹血清胰岛素(FINS)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素(UREA)、肌酐(CREA),取肝脏包埋切片行苏木素-伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)及油红O染色。免疫组化检测肝脏中PI3K p85、磷酸化(p)-Akt和p-FoxO1的磷酸化蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织中PI3K、Akt、FoxO1 mRNA的表达变化。结果:给药干预6周后发现,与模型组比较,HG低、中、高剂量组小鼠的空腹血糖均明显下调(P<0.05);HG低、中剂量组胰岛抵抗指数水平均有明显降低(P<0.05);HG低、中、高剂量组均可明显降低TC、TG与LDL表达水平(P<0.05,P<0.01);病理方面,与模型组比较,蝴蝶亚仙人掌可缓解小鼠肝细胞脂肪样变性,减轻肝脏内脂滴体积和含量,并一定程度增加肝脏内糖原颗粒的分布。免疫组化检测发现,与模型组比较,HG低、中、高剂量组PI3K p85蛋白表达均显著增加(P<0.01);HG中、高剂量组p-Akt蛋白表达均明显增加(P<0.05,P<0.01);HG低、中、高剂量组p-FoxO1蛋白表达均明显增加(P<0.05,P<0.01)。基因检测发现,与模型组比较,HG低、中、高剂量组PI3K mRNA均明显升高(P<0.05),HG高剂量组Akt mRNA明显升高(P<0.05),HG低、中、高剂量组FoxO1 mRNA均明显降低(P<0.05)。结论:HG可缓解db/db小鼠糖脂代谢紊乱,可能与其激活肝脏PI3K/Akt/FoxO1信号通路有关。

FOXO转录因子亚家族在瘢痕疙瘩中的表达及意义初探

目的检测人类叉头框O(FOXO)转录因子亚家族(FOXO1、FOXO3a、FOXO4、FOXO6)在人瘢痕疙瘩组织中的表达,为下一步探讨FOXO转录因子亚家族对瘢痕疙瘩生物学活性的影响提供实验依据。方法通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法以及免疫组织化学染色法检测FOXO转录因子亚家族中FOXO1、FOXO3a、FOXO4、FOXO6在人瘢痕疙瘩组织中的表达情况。结果实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法以及免疫组织化学染色法均证实与正常皮肤组织相比FOXO1、FOXO3a、FOXO4在瘢痕疙瘩组织中的表达均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01),FOXO6的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论瘢痕疙瘩中显著低表达的FOXO1、FOXO3a、FOXO4可能对瘢痕疙瘩的生物学活性有影响。

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的：通过调控转录因子叉头框蛋白O3a（FoxO3a）/分泌型糖蛋白2（Wnt2）/β-连环蛋白（β-catenin）通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法：雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组（尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1）,黄芪甲苷低、中、高剂量组（20,40,80 mg·kg-1）,每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测大鼠骨钙素（bone gla protein,BGP）,降钙素（calcitonin,CT）,骨保护素（osteoprotegerin,OPG）,核转录因子-κB（NF-κB）受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）,丙二醛（malondialdehyde,MDA）,过氧化氢酶（catalase,CAT）,谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值（bone mineral density,BMD）,采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66（shc）,p-p66（shc）蛋白的表达。结果：与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低（P〈0.05,P〈0.01）;黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力（P〈0.05,P〈0.01）;同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平（P〈0.05）,升高CAT,SOD和GSH-Px水平（P〈0.05,P〈0.01）。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66（shc）/p66（shc）水平（P〈0.05）;升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平（P〈0.05,P〈0.01）,抑制FoxO3a蛋白表达水平（P〈0.01）。结论：黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。

降脂通络软胶囊调控SIRT1/FoxO3通路对膜性肾病大鼠细胞凋亡的影响

目的:通过观察降脂通络软胶囊对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/叉头转录因子O3(FoxO3)蛋白表达及足细胞凋亡的影响,探讨其治疗MN的可能分子机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只,随机选取1组作为正常组,其余5组分别为模型组、盐酸贝那普利(西药)组(10 mg·kg^(-1))和降脂通络软胶囊低、中、高剂量(中药低、中、高剂量)组(25、50、100 mg·kg^(-1)),并通过尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法造模。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续4周灌胃给药,并在第4周末留取肾组织,采用电镜、免疫荧光观察肾脏病理学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾脏SIRT1、FoxO3蛋白的表达情况,免疫组化(IHC)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、死亡启动子重组蛋白(Bad)、足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、膜蛋白(Podocin)的蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中促凋亡因子Bax、Bad、FoxO3蛋白表达均明显增加(P<0.05),抗凋亡因子Bcl-2、SIRT1、Nephrin、Podocin蛋白表达均降低(P<0.05);与模型组比较,各治疗组肾组织中Bax、Bad、FoxO3蛋白表达明显减少(P<0.05),Bcl-2、SIRT1、Nephrin、Podocin表达明显升高(P<0.05)。结论:降脂通络软胶囊对MN的肾保护作用可能与其调控SIRT1/FoxO3通路,减少足细胞凋亡,维护足细胞结构稳定有关。

黄芪甲苷对2型糖尿病肾病大鼠肾组织PI3K/Akt/FoxO1信号调控的影响

目的:研究黄芪甲苷对2型糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其对磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)信号的调控作用,探讨黄芪甲苷保护2型糖尿病肾病的机制。方法:6周高糖高脂饮食后,给予链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射(35 mg·kg^-1)建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为正常组,模型组,黄芪甲苷(20,40,80 mg·kg^-1)组及盐酸二甲双胍(阳性药)组。连续给药8周后检测各组大鼠体质量,肾脏指数,血糖,24 h尿蛋白,尿微量白蛋白,尿肌酐,血肌酐及血尿素氮含量的变化;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;马松(Masson)三色染色观察胶原表达水平;过碘酸六胺银(PASM)染色观察基底膜的变化;免疫组化检测磷酸化FoxO1(p-FoxO1)蛋白表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析PI3K/Akt/FoxO1信号蛋白及自噬标记蛋白PI3K,微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ,B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/腺病毒E1B 19 k Da相互作用蛋白3(BNIP3),Beclin1,p-Akt,Akt表达水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球基底膜增厚,细胞外基质增多,系膜扩张,胶原蛋白显著增加,PI3K/Akt/FoxO1信号增强(P <0. 01),自噬活性减弱(P <0. 01);与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量肾脏组织病变明显改善,明显抑制肾组织PI3K,Akt及FoxO1磷酸化水平(P <0. 05,P <0. 01),同时增强自噬反应,上调BNIP3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1的表达(P <0. 05,P <0. 01)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制PI3K/Akt/FoxO1信号增加肾组织细胞自噬活性,减缓了2型糖尿病肾病的发展进程。

胃癌患者中PARP1、eIF4E、cyclinE与FOXO3a基因表达水平及其与HER2表达的相关性

目的 研究舟山海岛地区胃癌组织中人表皮生长因子受体2 （HER2）表达水平与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）,真核起始因子4E（e IF4E）,细胞周期蛋白E（cyclin E）,叉头转录因子O亚型（FOXO） 3a的基因表达情况关系,并研究PARP1、e IF4E、cyclin E,FOXO3a与胃癌临床病理特征的相互关联。方法 收集18例原发性胃癌患者手术切除的肿瘤组织及相应的癌旁组织,利用反转录与实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PARP1、e IF4E、cyclin E和FOXO3a的mRNA表达情况,分析其与HER2免疫组化结果及临床病理特征的关系。结果 FOXO3a与cyclin E基因在胃癌组织中的表达量明显高于癌旁组织,差异均具有统计学意义（P 〈0. 05）。EIF4E、FOXO3a与cyclin E基因在HER2阳性胃癌患者组织中的表达量明显高于HER2阴性患者,差异均具有统计学意义（P 〈0. 05）。PARP1 mRNA表达与胃癌肿瘤大小呈负相关,e IF4E mRNA表达与临床病理分级呈相关（P 〈0. 05）。结论 胃癌组织中PARP1、e IF4E、cyclin E,FOXO3a与HER2具有明显相关性,参与胃癌的发生发展过程。