环状RNA circACTN4促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的研究

目的探讨环状RNA circACTN4(hsa_circ_0050900)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法利用环状RNA芯片分析4对乳腺癌组织和癌旁组织的circRNA表达谱,并用实时荧光定量PCR验证circACTN4的相对表达水平;用circACTN4过表达质粒及对照质粒分别转染乳腺癌细胞MCF-7/MDA-MB-231,采用CCK-8实验、EdU实验、平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验研究circACTN4在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用;Western blot检测circACTN4对CCND1、CCND2和CDK4蛋白表达的影响;在裸鼠体内探讨circACTN4对移植瘤生长转移的影响。结果CircACTN4在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01),在乳腺癌细胞中的表达高于正常乳腺上皮细胞(P<0.01)。上调circACTN4可增强乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05),提高CCND1、CCND2和CDK4蛋白的表达(P<0.01)。体内实验结果表明:上调circACTN4可促进移植瘤生长与转移,与对照组相比,circACTN4组肿瘤微血管密度显著增加(P<0.05),肺转移结节数量明显增多(P<0.05)。结论circACTN4在乳腺癌组织和细胞显著高表达,可增强乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并在体内促进移植瘤的生长与转移。

CircACTN4调节miR-424-5p/MTHFR轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨circACTN4对乳腺癌(BC)细胞恶性生物学行为的影响,并分析其作用机制。方法:收集2019年1月至2021年12月在唐山市妇幼保健院就诊的45例BC患者的肿瘤组织和邻近的非肿瘤组织;体外培养BC细胞系MDA-MB-468、MDAMB-231、SK-BR-3、MCF-7和人乳腺上皮细胞MCF-10A。RT-qPCR和Western blotting检测circACTN4、miR-424-5p和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)在BC组织和细胞系中的表达。另取MCF-7细胞分为Control组(常规培养)、si-NC组(转染siNC)、si-circACTN4组(转染si-circACTN4)、si-circACTN4+in-miR-424-5p组(转染si-circACTN4和in-miR-424-5p)和si-circACTN4+oe-MTHFR组(转染si-circACTN4+oe-MTHFR),采用CCK-8和克隆形成测定分析细胞增殖能力;Transwell检测BC细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因分析miR-424-5p与circACTN4或MTHFR之间的靶向关系。构建裸鼠异种移植瘤模型,探究circACTN4对体内肿瘤生长的影响。结果:与非肿瘤组织和人乳腺上皮细胞MCF-10A相比,BC组织和细胞系中circACTN4和MTHFR表达上调,miR-424-5p表达下调(P<0.05)。与si-NC组相比,si-circACTN4组BC细胞增殖活力、克隆形成数以及迁移、侵袭细胞数均下调(P<0.05)。与si-circACTN4组相比,si-circACTN4+in-miR-424-5p组和si-circACTN4+oeMTHFR组BC细胞增殖活力、克隆形成数以及迁移、侵袭细胞数均上调(P<0.05)。circACTN4通过靶向BC细胞中的miR-424-5p上调MTHFR表达。circACTN4敲低可抑制裸鼠体内肿瘤生长。结论:敲低circACTN4调控miR-424-5p/MTHFR轴抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭。