CircBACH1调节miR-140-5p/MDM2轴对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

目的探讨CircBACH1对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响以及在此过程中对miR-140-5p/MDM2轴的调节机制。方法收集MM组和正常对照组骨髓浆细胞,将人MM细胞系U266细胞分为未转染(Control)组、si-NC组、si1-CircBACH1组、si2-CircBACH1组、si-CircBACH1+anti-miR-NC组、si-CircBACH1+anti-miR-140-5p组。实时荧光定量PCR检测细胞中CircBACH1、miR-140-5p、鼠双微体2(MDM2)mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡及对硼替佐米的敏感性;Western blot检测细胞中B细胞淋巴因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3蛋白的表达;双萤光素酶报告基因实验验证CircBACH1、miR-140-5p、MDM2三者的靶向关系。结果与正常对照组相比,MM组的骨髓浆细胞及U266细胞中CircBACH1、MDM2 m RNA表达升高,miR-140-5p表达降低(P<0.05);与Control组和si-NC组相比,siCircBACH1组细胞中CircBACH1、MDM2的mRNA表达、细胞增殖活性、Bcl-2蛋白表达均降低,miR-140-5p的表达、细胞凋亡率、化疗敏感性及cleaved caspase-3、Bax表达均升高(P<0.05);而回补实验中,si-CircBACH1对MM细胞的影响被anti-miR-140-5p逆转,且MDM2的表达也升高(P<0.05)。双萤光素酶基因报告实验验证了CircBACH1、MDM2均与miR-140-5p存在靶向关系。结论敲低CircBACH1能够上调miR-140-5p表达,下调MDM2的表达,抑制MM细胞的增殖,促进MM细胞凋亡,提高化疗敏感性。

circBACH1靶向miR-4500调控口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的:探讨circBACH1对口腔鳞状细胞癌HSC3细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:体外培养HSC3细胞,分为si-NC组、si-circBACH1组、miR-NC组、miR-4500组、si-circBACH1+anti-miR-NC组、si-circBACH1+anti-miR-4500组,分别转染si-NC、si-circBACH1、miR-NC、miR-4500 mimics、si-circBACH1与anti-miR-NC、si-circBACH1与anti-miR-4500。qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织及各组HSC3细胞中circBACH1、miR-4500的表达量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circBACH1对miR-4500的靶向调控作用;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达量。结果:与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显升高(P<0.01),miR-4500的表达量明显降低(P<0.01)。与si-NC组比较,si-circBACH1组HSC3细胞活力明显降低(P<0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P<0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-4500组HSC3细胞活力明显降低(P<0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P<0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。WT-circBACH1与miR-4500 mimics共转染组HSC3细胞的荧光素酶活性明显低于WT-circBACH1与miR-NC共转染组(P<0.01)。qRT-PCR实验结果显示,与pcDNA组比较,pcDNA-circBACH1组miR-4500的表达量降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circBACH1组miR-4500的表达量升高(P<0.05)。与si-circBACH1+anti-miR-NC组比较,si-circBACH1+anti-miR-4500组HSC3细胞活力明显升高(P<0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显增多(P<0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:干扰circBACH1表达可通过负向调控miR-4500的表达从而抑制口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。