circCSPP1在胃癌组织中的表达水平及其对胃癌患者的预后价值

目的分析circCSPP1在胃癌及癌旁组织中的表达水平,并探讨其与胃癌临床病理特征和患者预后的关系。方法收集2018年1月至2020年1月在我院接受根治性切除术治疗的胃癌患者118例,检测癌组织及癌旁组织circCSPP1表达水平,评价circCSPP1表达水平与胃癌患者临床病理资料相关性,Kaplan-Meier曲线分析circCSPP1表达水平与患者生存率关系;Cox回归分析评价影响胃癌患者预后的因素。结果circCSPP1在TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期胃癌组织及癌旁组织中相对表达水平分别为2.08±0.17、3.29±0.27、1.01±0.12,即在胃癌组织中表达显著上调(F=4.292,P=0.005)。circCSPP1在胃癌组织中表达水平与肿瘤直径、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和其他器官转移有关(P<0.05)。circCSPP1低表达组患者生存率显著高于circCSPP1高表达组患者(χ^(2)=5.332,P<0.05)。单因素Cox回归分析表明,胃癌组织中肿瘤直径≥5 cm、浸润深度T_(3)~T_(4)、有淋巴结转移、有其他器官转移、circCSPP1高表达是胃癌预后不良影响因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明,浸润深度T_(3)~T_(4)、有淋巴结转移和circCSPP1高表达是胃癌预后不良独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌组织中circCSPP1表达显著上调,circCSPP1高表达是胃癌预后不良独立危险因素。

circCSPP1通过吸附miR-431上调ZEB1的表达促进结直肠癌侵袭转移

目的研究ZEB1与circCSPP1及miR-431的相关性,探讨circCSPP1通过吸附miR-431上调ZEB1的表达进而促进结直肠癌侵袭转移。方法通过TargetScan、miRDB和mirWalk等三个数据库,探索结直肠癌细胞中ZEB1是否为miR-431的潜在靶点;在SW620和LOVO两组细胞株中,通过质粒转染构建过表达miR-431组(miR-431 mimic)和对照组(mimic control)、敲低miR-431组(inhibitor)和对照组(inhibitor control)等四组细胞,用RT-qPCR和Western blot分别检测各组细胞ZEB1的mRNA和蛋白表达水平。通过RIP实验研究Ago2结合ZEB1和miR-431的相对富集含量,探索miR-431与ZEB1是否存在相关作用关系。在SW620和LOVO两组细胞株中,通过质粒转染构建control组、circCSPP1+mimic control、circCSPP1+miR-431 mimic、circCSPP1+sh-nc和circCSPP1+sh-ZEB1等五组细胞,用RT-qPCR分别检测各组细胞ZEB1的mRNA表达水平;通过Transwell实验分别检测各组细胞ZEB1的侵袭和迁移能力。用Western blot检测细胞Snail、E-cadherin等EMT相关蛋白的水平。结果基于三个数据库,发现ZEB1、SMAD4、DAAM1、CDK14和ROCK1可能是miR-431的潜在靶点,且ZEB1可被miR-431下调;在SW620和LOVO两组细胞株中,miR-431可明显促进结直肠癌细胞ZEB1 mRNA和蛋白的表达。miR-431可能与ZEB1直接结合Ago2蛋白,并通过Ago2蛋白抑制miR-431。过表达circCSPP1可明显促进ZEB1的表达,但过表达miR-431或敲低ZEB1可逆转circCSPP1对ZEB1的促进作用;circCSPP1可促进结直肠细胞的侵袭和迁移,但过表达miR-431或敲低ZEB1可逆转此作用。过表达circCSPP1明显促进ZEB1和Snail的表达,降低E-cadherin的表达,但过表达miR-431或敲低ZEB1可逆转circCSPP1对上述蛋白的作用。结论ZEB1是结直肠细胞中miR-431的靶基因,且miR-431可抑制ZEB1的表达。circCSPP1可吸附miR-431上调ZEB1的表达进而促进结直肠癌细胞的侵袭和迁移。circCSPP1可通过调节miR-431/ZEB1通路促进结直肠癌的恶性进展。

circCSPP1靶向miR-495-3p调控结直肠癌细胞的增殖和糖酵解

目的研究环状RNA中心体/纺锤体相关蛋白基因(circCSPP1)在结直肠癌细胞增殖和糖酵解中的作用,并探索其潜在机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circCSPP1和miR-495-3p在结直肠癌组织、癌旁组织中的表达。将si-NC、si-circCSPP1、miR-NC、miR-495-3p mimics、si-circCSPP1+anti-miR-NC、si-circCSPP1+anti-miR-495-3p分别转染HCT116细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,试剂盒检测细胞中葡萄糖消耗和乳酸水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定circCSPP1与miR-495-3p之间相互作用。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中circCSPP1表达显著升高,miR-495-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制circCSPP1或过表达miR-495-3p后,HCT116细胞活力显著降低,葡糖糖消耗和乳酸产生水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-495-3p表达可逆转抑制circCSPP1对HCT116细胞活力和糖酵解反应的影响(P<0.05)。miR-495-3p是circCSPP1的靶基因,circCSPP1负调控miR-495-3p表达。结论抑制circCSPP1能够抑制胃癌细胞的增殖和糖酵解反应,其机制与靶向调控miR-495-3p有关。

circCSPP1通过吸附miR-431促进结直肠癌增殖转移

目的探讨环状RNA circCSPP1通过吸附miR-431而促进结直肠癌增殖和转移的作用及其机制。方法通过生物信息学方法分析circCSPP1在人结直肠癌组织中的表达;实时定量PCR法检测结直肠癌临床样本中circCSPP1的表达;以结肠癌细胞株SW620和LOVO为研究对象,MTT检测circCSPP1对细胞增殖活性的影响;克隆形成实验探究circCSPP1对结直肠癌细胞克隆形成的效应;Transwell实验检测circCSPP1在肿瘤细胞迁移/侵袭中的作用;生物信息学方法预测circCSPP1可能的miRNA结合位点,通过双荧光素酶实验验证cricCSPP1与miR-431之间的联系,敲减和过表达circCSPP1后检测miR-431的表达,验证二者的相关性;荧光原位杂交实验验证circCSPP1与miR-431在胞浆中共表达,分析miR-431表达与结直肠癌临床特征的关系。结果生物信息学分析表明circCSPP1在结直肠癌组织中高表达,这一现象在临床样本中得到证实;MTT实验结果表明,circCSPP1受到抑制后,结直肠癌细胞的增殖活性下降;克隆形成实验的结果提示沉默circCSPP1可以减少结直肠癌细胞的克隆。Transwell迁移实验中,抑制circCSPP1可以降低肿瘤细胞的迁移率。Transwell侵袭实验表明,结直肠癌细胞株的circCSPP1受到抑制后,侵袭率显著下降。在探究circCSPP1影响癌细胞的机制时,对预测的5种miRNA逐一验证,发现miR-431的荧光素酶活性降低,表明cricCSPP1与miR-431之间存在结合位点。通过正反验证,敲减circCSPP1后,细胞中miR-431水平升高,过表达circCSPP1后,miR-431表达水平降低。FISH实验中,circCSPP1及miR-431均被证实主要存在于胞浆中。结论circCSPP1在结直肠癌组织中显著高表达;circCSPP1正向调控结直肠癌的进展。circCSPP1通过海绵样吸附作用抑制了相关细胞中的miR-431表达水平,并最终影响结直肠癌患者的生存及预后。