环状RNA-circEPSTI1在子宫颈癌生长与侵袭中的作用及机制

目的探讨环状RNA-circEPSTI1在子宫颈癌生长与侵袭中的作用及其机制。方法采用qRT-PCR技术检测子宫颈癌细胞系及组织、正常子宫颈上皮细胞及正常子宫颈组织中circEPSTI1的表达,分析circEPSTI1的表达与子宫颈癌临床病理特征的关系;转染si-circEPSTI1干扰SiHa与HeLa细胞中circEPSTI1的表达,采用qRT-PCR技术验证转染效率。采用CCK-8、Transwell侵袭和裸鼠成瘤实验检测circEPSTI1对子宫颈癌细胞生长与侵袭的影响。采用Western blot法检测circEPSTI1对EPSTI1、Twist、Slug蛋白表达的影响。结果circEPSTI1在子宫颈癌细胞系中的表达水平明显高于正常子宫颈上皮细胞(P<0.01);circEPSTI1在子宫颈癌组织中的表达水平明显高于正常子宫颈组织(P<0.01);circEPSTI1表达与子宫颈癌的高级别FIGO分期、组织学分级以及淋巴结转移密切相关;qRT-PCR结果显示,SiHa与HeLa细胞中circEPSTI1被成功干扰。CCK-8实验显示,si-circEPSTI1组的SiHa与HeLa细胞的OD值均明显低于si-NC组(P<0.01)。在裸鼠成瘤实验中,si-circEPSTI1组的肿瘤质量明显低于si-NC组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,si-circEPSTI1组的SiHa与HeLa细胞穿过基质胶的细胞数量均明显低于si-NC组(P<0.01)。Western blot法结果显示,si-circEPSTI1组的EPSTI1、Twist、Slug蛋白表达水平明显低于si-NC组(P<0.05)。结论circEPSTI1在子宫颈癌中表达增高并与子宫颈癌的高级别FIGO分期、组织学分级以及淋巴结转移密切相关,抑制circEPSTI1能够抑制子宫颈癌细胞的生长和侵袭,其机制可能与调控EPSTI1、Twist、Slug信号通路有关。

circEPSTI1与恶性肿瘤关系的研究进展

环状RNA(circular RNA,circ RNA)是一类具有共价闭合环状结构的内源性非编码RNA,不具有5’帽状结构和3’腺苷酸尾结构。由于其闭合环状结构对核酸外切酶具有较高的耐受性,circ RNA不易被降解,因此,可稳定存在于真核生物细胞的细胞质中。1976年,circ RNA首次被Sanger等[1]发现,最初认为是RNA错误剪接所产生的无功能产物。随着生物信息学和高通量测序技术等的发展,大量研究报道circ RNA在肿瘤中具有海绵化微小RNA(micro RNA)。

敲低circEPSTI1抑制人胃癌SGC-7901细胞生长与增殖

目的研究环状RNA circEPSTI1对人胃癌SGC-7901细胞生长与增殖的影响.方法：运用MTT实验检测敲低circEPSTI1对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI检测敲低circEPSTI1对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡作用.结果：MTT实验发现,敲低circEPSTI1后人胃癌SGC-7901细胞的生长逐渐减慢,增殖能力明显被抑制;AnnexinV-FITC/PI实验显示,敲低circEPSTI1 能显著促进胃癌SGC-7901细胞凋亡.结论：敲低circEPSTI1可抑制人胃癌细胞生长,诱导胃癌细胞凋亡.

敲低circEPSTI1抑制人胃癌SGC-7901细胞生长与增殖

目的:探讨环状RNAcircEPSTI1对人胃癌SGC-7901细胞的生物学功能。方法:运用MTT实验检测circEPSTI1对人胃癌SGC-7901细胞的生长能力;AnnexinV-FITC/PI检测circEPSTI1对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡作用。结果:MTT检测发现,敲低circEPSTI1可抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长,具有时间依赖性;AnnexinV-FITC/PI实验显示,敲低circEPSTI1能显著促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:敲低circEPSTI1可抑制人胃癌细胞生长,诱导胃癌细胞凋亡。

circEPSTI1通过靶向调控miR-216b-5p调节胃癌细胞顺铂耐药性

该研究的目的是为了观察circEPSTI1是否通过靶向调控miR-216b-5p对胃癌细胞顺铂耐药性产生影响,并探讨其可能的作用机制。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织、人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌细胞HGC27与胃癌耐药性细胞HGC27/DDP中circEPSTI1与miR-216b-5p的表达情况;使用双荧光素酶报告实验验证circEPSTI1与miR-216b-5p的靶向调控关系;以HGC27/DDP细胞为研究对象,实验分组:si-NC组、si-circEPSTI1组、si-circEPSTI1+anti-miR-NC组、si-circEPSTI1+anti-miR-216b-5p组;采用CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭;Western blot检测Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况。结果显示,与癌旁组织相比,胃癌组织中的circEPSTI1表达上调(P<0.05), miR-216b-5p表达下调(P<0.05);与GES-1细胞相比,HGC27细胞、HGC27/DDP细胞的circEPSTI1表达上调(P<0.05), miR-216b-5p表达下调(P<0.05);与HGC27细胞相比, HGC27/DDP细胞的circEPSTI1表达上调(P<0.05), miR-216b-5p表达下调(P<0.05);miR-216b-5p过表达可降低wt-circEPSTI1的荧光素酶活性(P<0.05),未影响mut-circEPSTI1的荧光素酶活性;与si-NC组相比, si-circEPSTI1组细胞增殖抑制率、凋亡率和Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05), N-cadherin蛋白表达下调(P<0.05);与si-circEPSTI1+antimiR-NC组相比, si-circEPSTI1+anti-miR-216b-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率和Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增加(P<0.05),N-cadherin蛋白表达上调(P<0.05)。结果表明, circEPSTI1通过靶向抑制miR-216b-5p表达促进胃癌耐药性细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,抑制胃癌耐药性细胞凋亡,从而增强胃癌细胞对DDP的耐药性,该机制可能与改变凋亡相关蛋白表达情况和逆转上皮–间质转化过程有关。