circFAT1调节miR-211-5p/CCND2轴对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的影响

目的探讨circFAT1对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响及对miR-211-5p/细胞周期蛋白D2(CCND2)轴的调节机制。方法利用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DCM大鼠模型,并随机分为DCM组、circ-NC组、circFAT1组、circFAT1+激动剂-NC组和circFAT1+miR-211-5p激动剂组,以喂食普通饲料的大鼠作为对照组,每组20只。实时PCR检测心肌组织中circFAT1、miR-211-5p、CCND2水平;Western blotting检测心肌组织CCND2蛋白表达;生化分析仪检测大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;心脏超声检测大鼠心功能;HE和Masson染色观察心肌组织病理形态;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证circFAT1、miR-211-5p、CCND2之间的靶向关系。结果与对照组相比,DCM组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)水平降低(P<0.05),FBG、TC、TG、左心室舒张末期直径(LVEDd)、左心室收缩末期直径(LVEDs)、胶原容积分数(CVF)、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05);与DCM组相比,circFAT1组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,LVEF、LVFS水平升高(P<0.05),FBG、TC、TG、LVEDd、LVEDs、CVF、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);miR-211-5p激动剂逆转了circFAT1对DCM心肌损伤的缓解作用,且CCND2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论circFAT1通过调控miR-211-5p/CCND2轴减轻DCM大鼠心肌组织损伤。

circFAT1对胶质母细胞瘤细胞生物过程的机制研究

目的探讨circFAT1吸附miR-1182调控转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路对胶质母细胞瘤(GBM)增殖、侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的调控作用及机制。方法收集50例GBM样本和5例非瘤脑组织(NBT)样本,随机抽取3例GBM和3例NBT样本进行组织RNA测序。体外培养GBM细胞系U87、U251、T98G、LN229及星形胶质细胞系NHA,通过qRT-PCR检测组织和细胞系中circFAT1表达。通过RNase R选择性降解线性转录本以明确circFAT1成环特性。将GBM细胞分为sh-对照组和sh-circFAT1组,采用慢病毒进行转染。转染后集落形成实验、Transwell实验、Western blot实验分别检测细胞增殖、侵袭及EMT能力。荧光原位杂交(FISH)检测circFAT1在GBM细胞内定位,通过双萤光素酶报告基因和RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证circFAT1和miR-1182的相互作用。Western blot实验验证敲低circFAT1后或抑制miR-1182表达对TGF-β/Smad信号通路的调控作用。结果circFAT1在GBM组织和细胞中表达增加(P<0.05)。RNase R可减少线性FAT1表达(P<0.05),而不影响circFAT1。敲除circFAT1抑制了GBM细胞的增殖、侵袭和EMT(P<0.05)。双萤光素酶报告基因和RIP实验证实circFAT1靶向结合miR-1182。敲低circFAT1后TGFB2、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达下降,抑制miR-1182表达后GFB2、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达升高。结论敲除circFAT1可抑制GBM细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制可能与吸附miR-1182调控TGF-β/Smad信号通路有关。

circFAT1在非小细胞肺癌组织中表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的探讨circFAT1在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达情况及沉默circFAT1对NSCLC细胞A549增殖和侵袭力的影响。方法选取行手术切除治疗的NSCLC患者107例,RT-qPCR检测NSCLC和癌旁组织中circFAT1表达,培养A549细胞,分别转染siRNA-circFAT1(si-circFAT1组)、无关序列(si-control组),另外设未转染细胞作为空白组(blank组),RT-qPCR检测细胞中circFAT1表达量,CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭情况。结果NSCLC组织中circFAT1相对表达量高于癌旁组织[(2.47±0.27)vs(1.02±0.15),t=48.959,P<0.001];与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、未发生淋巴结转移比较,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化和发生淋巴结转移的NSCLC组织中circFAT1相对表达量升高(P<0.05);与si-control组和blank组比较,si-circFAT1组细胞中circFAT1相对表达量明显降低(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数减少(P<0.05)。结论NSCLC组织中circFAT1相对表达量升高,沉默circFAT1可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

circFAT1在结直肠癌中的表达及其对肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨circFAT1在结直肠癌中的表达及其对肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法选取我院收治的结直肠癌患者85例,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)和荧光原位杂交(FISH)技术检测circFAT1在肿瘤组织中的表达,分析其与患者临床病理参数和预后的相关性。通过脂质体转染siRNA,敲低circFAT1在肠癌细胞株LoVo中的表达,利用Transwell小室装置检测转染前后肠癌细胞株迁移和侵袭能力的变化。结果circFAT1在结直肠癌组织中表达高于癌旁正常肠黏膜组织(P<0.05)。在结直肠癌中,circFAT1的表达状态与淋巴结转移及患者预后相关(P<0.05)。体外细胞实验显示,下调circFAT1的表达可显著降低肠癌细胞株迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论circFAT1在结直肠癌组织中高表达,且与结直肠癌的恶性演进密切相关。

血清circFAT1在结直肠癌肝转移中的预测价值

目的研究结直肠癌患者血清中circFAT1表达情况,评估其在结直肠癌肝转移中的预测价值。方法选取该院2014年1月—2017年12月在南方医科大学附属东莞人民医院诊治的结直肠癌患者105例为研究对象,其中伴肝转移者35例。采用实时荧光定量PCR技术检测患者术前血清中circFAT1的相对表达量,分析其在患者临床病理参数的表达及其预测效能。结果 circFAT1表达中,肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05)。circFAT1预测结直肠癌肝转移曲线下面积(AUC)为0.839,95%置信区间为0.764~0.914,以4.01为临界值时,其敏感度为68.6%,特异性度88.4%。结论血清circFAT1与肿瘤恶性演进密切相关,可作为结直肠癌肝转移预测的潜在生物标志物。