猪卵巢颗粒细胞中circINHBA的鉴定及与细胞凋亡的相关性分析

实验室前期通过RNA测序发现1个新的环状RNA分子circINHBA,并确定其在猪健康和早期闭锁卵泡中呈现显著差异表达。本研究旨在鉴定并分析circINHBA的表达模式,探索其在猪卵泡颗粒细胞(GCs)凋亡中的作用,为揭示调控猪卵泡闭锁的机制、筛选调控猪卵泡闭锁和GCs凋亡的靶标调节物提供依据。根据circINHBA,设计跨反向剪切位点的发散引物,通过PCR、琼脂糖凝胶电泳、Sanger测序鉴定circINHBA的环状结构,并通过使用或不使用Rnase R消化的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行稳定性检验;利用核质分离技术和荧光原位杂交技术(FISH)分析猪卵泡GCs中circINHBA的亚细胞定位;RT-qPCR检测circINHBA在猪健康和早期闭锁卵泡中的表达情况,通过circINHBA干扰试验分析其对凋亡标志基因BCL2和BAX表达的影响;利用流式细胞术分析circINHBA对猪卵泡GCs凋亡的影响。结果:成功验证circINHBA为一种新的环状RNA分子,具有稳定的环状结构;定量分析发现,circINHBA在健康卵泡中的表达量显著高于早期闭锁卵泡,且亚细胞定位结果表明其主要分布于细胞质;特异性si-RNA干扰试验及凋亡标志基因检测发现circINHBA具有抑制猪卵泡GCs凋亡的作用。综上,本研究证实了1个全新circINHBA分子对猪卵泡GCs凋亡的影响,揭示了其在猪卵泡闭锁过程中的潜在作用,为进一步探究环状RNA分子在猪卵泡闭锁过程中的调控作用及分子机制奠定了基础。