circKIF4A表达与甲状腺癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨circKIF4A表达与甲状腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法采用随机取样法选取2016年4月至2017年4月在该院确诊为甲状腺癌患者120例,在手术中取患者癌组织和癌旁组织,根据手术病理检测分为甲状腺癌组和癌旁组。采用qRT-PCR的方法检测circKIF4A在甲状腺癌组、癌旁组中的相对表达水平,分析circKIF4A表达与甲状腺癌临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存曲线分析circKIF4A表达与甲状腺癌患者预后的关系。Cox回归分析甲状腺癌患者术后5年预后不良的影响因素。结果与癌旁组circKIF4A相对表达水平相比,甲状腺癌组circKIF4A相对表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。circKIF4A表达与包膜侵犯、淋巴结转移、分化程度有关(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线分析显示,circKIF4A高表达患者术后5年累积生存率低于circKIF4A低表达患者,差异有统计学意义(χ^(2)=11.368,P=0.001);多因素分析结果显示,包膜侵犯、分化程度、淋巴结转移、circKIF4A表达水平是甲状腺癌患者术后5年预后不良的影响因素(P<0.05)。结论circKIF4A在甲状腺癌组织中呈高表达,与甲状腺癌患者临床病理特征及术后5年生存情况有关,有作为甲状腺癌预后的潜在标志物的可能。

卵巢癌组织中circKIF4A和miR-942-5p的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系

目的:探讨miR-942-5p、circKIF4A在卵巢癌组织中的表达及与患者预后的关系。方法:选取2015年1月至2017年1月来本院进行手术治疗的154例卵巢癌患者为研究对象,收集手术患者的癌组织及癌旁组织,回顾性分析miR-942-5p、circKIF4A表达与临床病理特征及与预后的关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-942-5p、circKIF4A水平;利用Kaplan-Meier法分析不同miR-942-5p、circKIF4A表达与患者生存时间的关系;多因素Cox回归风险模型分析影响患者预后的因素。结果:circKIF4A在卵巢癌患者癌组织中的表达(4.27±0.33)较癌旁组织(1.00±0.05)升高,miR-942-5p表达(0.63±0.12)较癌旁组织(1.01±0.19)降低,二者表达呈负相关(r=-0.312,P<0.05);卵巢癌患者癌组织中circKIF4A、miR-942-5p表达与年龄、病理类型、WHO组织学分级、肿瘤直径、浸润程度无关,与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分级、有无腹水有关(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,circKIF4A高表达组患者5年累积生存率26.92%(21/78)显著低于低表达组47.37%(36/76),差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=6.651,P=0.010);miR-942-5p高表达组患者5年累积生存率46.25%(37/80)显著高于低表达组患者27.03%(20/74),差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=9.978,P=0.000);Cox结果显示,淋巴结转移、TNM分期、分化程度、circKIF4A高表达、miR-942-5p低表达均是影响卵巢癌患者生存状况的危险因素。结论:卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p呈低表达,circKIF4A呈高表达,二者表达呈负相关,与卵巢癌患者病情发展及预后关系密切。

circKIF4A通过靶向miR-3666调控胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭研究

目的探讨circKIF4A对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对miR-3666的靶向调控作用。方法qRT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中circKIF4A、miR-3666的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,si-NC、si-circKIF4A、miR-NC、miR-3666 mimics、si-circKIF4A+anti-miR-NC、si-circKIF4A+anti-miR3666分别转染至AGS细胞;CCK-8、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测circKIF4A与miR-3666的靶向关系。结果胃癌组织中circKIF4A的表达量升高(P<0.05),miR-3666的表达量降低(P<0.05);转染si-circKIF4A或转染miR-3666 mimics均可降低细胞活力和划痕愈合率(P<0.05),克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05);circKIF4A能够靶向调控miR-3666;共转染si-circKIF4A和anti-miR-3666可恢复转染si-circKIF4A对AGS细胞生物学行为的作用。结论干扰circKIF4A表达可通过靶向miR-3666而抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

下调circKIF4A对甲状腺癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响及其机制探讨

目的探讨下调circKIF4A对甲状腺癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响及潜在的调节机制。方法通过对甲状腺癌细胞系、干细胞系以及30例甲状腺癌肿瘤组织与癌旁组织标本进行qRT-PCR实验来检测甲状腺癌组织与细胞系以及干细胞系中circKIF4A的表达水平。转染siRNA靶向下调甲状腺癌细胞中的circKIF4A表达,转染siRNA作为对照,并通过CCK8实验、Transwell实验以及细胞球囊形成实验来评估si-circKIF4A对甲状腺癌细胞的增殖、侵袭能力及干细胞特性的影响。利用CircInteractome和TargetScan生信工具预测circKIF4A可能结合的miR-NA及其下游靶基因。此外,通过荧光素酶报告基因实验以及qRT-PCR和Western blotting法来验证这些分子间的互作关系。结果与正常甲状腺上皮细胞相比,甲状腺癌的组织及细胞系中circKIF4A表达显著增高。敲低circKIF4A表达显著降低了甲状腺癌TPC-1和KAT-5细胞系的增殖、侵袭能力和细胞干性成球能力(P均<0.05)。核质分离实验发现,circKIF4A主要存在于细胞质中。miR-335-5p在敲低circKIF4A的TPC-1和KAT-5细胞系中的表达均上调(P均<0.05);在野生型circKIF4A细胞中,共转染miR-335-5p相对于野生型circKIF4A+miR-NC共转染者,荧光酶活性显著降低(P<0.05)。与野生型KIF4A+miR-NC相比,野生型KIF4A+miR-335-5p处理细胞中的荧光酶活性下降(P<0.05)。在转染miR-335-5p的细胞中,与转染miR-NC相比,KIF4A的表达减少(P<0.05)。相比转染si-NC,转染si-circKIF4A的细胞中KIF4A mRNA、蛋白表达降低;而与转染si-circKIF4A比较,添加miR-335-5p抑制剂的细胞中KIF4A mRNA、蛋白表达上调(P均<0.05)。结论circKIF4A可通过调控miR-335-5p,间接上调KIF4A蛋白的表达,从而增强甲状腺癌细胞的增殖、侵袭与细胞干性成球能力。

CircKIF4A靶向调控miR-384表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨circKIF4A对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-384的调控作用机制。方法采用q RT-PCR法检测卵巢癌组织与癌旁组织中circKIF4A、miR-384的表达量;分别将si-NC、sicircKIF4A、miR-NC、miR-384 mimics、si-circKIF4A与anti-miR-NC、si-circKIF4A与anti-miR-384转染入SKOV3细胞;采用q RT-PCR法检测SKOV3细胞中circKIF4A、miR-384的表达量;采用MTT实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡能力;双荧光素酶报告实验检测circKIF4A与miR-384的靶向关系。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中circKIF4A的表达水平升高[(1.00±0.06),(4.28±0.32)](t=62.915, P <0.05),miR-384的表达水平降低[(1.00±0.05),(0.43±0.03)](t=61.047, P <0.05);转染si-circKIF4A后SKOV3细胞OD值降低[(0.75±0.05),(0.41±0.03)](t=17.493, P <0.05),凋亡率升高[(6.36±0.53)%,(23.19±2.21)%](t=22.216,P <0.05);转染miR-384 mimics后SKOV3细胞OD值降低[(0.73±0.05),(0.47±0.04)](t=12.182, P <0.05),凋亡率升高[(7.53±0.41)%,(19.11±1.06)%](t=30.567, P <0.05);双荧光素酶报告实验证实circKIF4A能够吸附miR-384,并可充当miR-384的海绵分子;共转染si-circKIF4A与anti-miR-384后SKOV3细胞OD值升高[(0.40±0.04),(0.65±0.03)](t=15.000, P <0.05),凋亡率降低[(25.20±2.21)%,(10.37±0.86)%](t=18.761, P <0.05)。结论抑制circKIF4A表达可负向调控miR-384的表达从而抑制卵巢癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。