circLphn3调节miR-882/NLRX1轴对创伤性脑损伤小鼠神经元损伤的影响

目的探讨circLphn3对创伤性脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)小鼠神经元损伤的改善作用及对微小RNA(microRNA,miR)-882/NLR家族成员X1(NLR family member X1,NLRX1)轴的调节作用。方法撞击法构建TBI小鼠模型,根据注射腺病毒的类型将小鼠随机分为TBI组、过表达对照(over-NC)组、circLphn3过表达(over-circLphn3)组、circLphn3过表达+miR-882激动剂对照(over-circLphn3+agomir-NC组)组、circLphn3过表达+miR-882激动剂(over-circLphn3+miR-882 agomir)组,每组各12只;随机取12只C57BL/6小鼠只钻孔不撞击作为假手术(Sham)组;采用Longa 5级评分法评估小鼠神经功能损伤情况;Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力;酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测血清白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Deoxyribonucleotide terminal transferase mediated nick end labeling,TUNEL)观察伤侧皮层组织形态及细胞凋亡情况;逆转录定量聚合酶链反应(Reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测伤侧皮层组织miR-882,circLphn3,NLRX1 mRNA表达水平;Western blot检测伤侧皮层组织NLRX1,B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bcl-2 associated protein,Bax)蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证circLphn3与miR-882的靶向关系。结果与Sham组比较,TBI组小鼠伤侧皮层组织有出血、炎性细胞浸润等损伤,神经功能评分、在原木板处停留时间、circLphn3水平、NLRX1 mRNA和蛋白水平、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.05),寻找木板所耗时间、IL-1β,TNF-α、细胞凋亡率、miR-882水平、Bax蛋白水平显著增高(P<0.05);与TBI组、over-NC组比较,over-circLphn3组小鼠伤侧皮层组织损伤减轻,神经功能评分、在原木板处停留时间、circLphn3水平、NLRX1 mRNA和蛋白水平、Bcl-2蛋白水平显著上升(P<0.05),寻找木板所耗时间、IL-1β,TNF-α水平、细胞凋亡率、miR-882水平、Bax蛋白水平显著下降(P<0.05);与over-circLphn3组、over-circLphn3+agomir-NC组比较,over-circLphn3+miR-882 agomir组小鼠伤侧皮层组织损伤加重,神经功能评分、在原木板处停留时间、circLphn3水平、NLRX1 mRNA和蛋白水平、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.05),寻找木板所耗时间、IL-1β,TNF-α水平、细胞凋亡率、miR-882水平、Bax蛋白水平显著增高(P<0.05)。circLphn3与miR-882存在结合位点。结论过表达circLphn3可能通过调节miR-882/NLRX1轴来减轻TBI小鼠神经元损伤。