circMTHFD2靶向miR-2116-3p对肝癌Huh-7细胞变迁的调控机制

目的目前环状RNA亚甲基四氢叶酸脱氢酶基因2(circMTHFD2)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其与miR-2116-3p的关系尚不清楚。文中研究circMTHFD2、miR-2116-3p在肝癌中的表达情况,探讨circMTHFD2是否靶向miR-2116-3p调控肝癌细胞恶性生物行为。方法收集2018年3月至2019年12月在攀枝花学院附属医院肝胆科接受手术的47例肝癌患者的癌组织和癌旁组织(邻近正常肝组织)。RT-qPCR检测肝癌组织和癌旁组织中circMTHFD2和miR-2116-3p表达,并分析其与临床病理特征的相关性。根据转染情况分为:si-NC组(转染si-NC)、si-circMTHFD2组(转染si-circMTHFD2)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circMTHFD2组(转染pcDNA-circMTHFD2)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-2116-3p组(转染miR-2116-3p)、si-circMTHFD2+anti-miR-NC组(共转染si-circMTHFD2和anti-miR-NC)、si-circMTHFD2+anti-miR-2116-3p组(共转染si-circMTHFD2和anti-miR-2116-3p),未经转染处理的Huh-7细胞记为NC组。CCK-8法和平板克隆实验检测Huh-7细胞增殖;划痕愈合实验检测Huh-7细胞迁移;Transwell实验检测Huh-7细胞侵袭。构建荧光素酶报告质粒,再次分为:miR-NC+WT-circMTHFD2组(共转染miR-NC和WT-circMTHFD2)、miR-2116-3p mimics+WT-circMTHFD2组(共转染miR-2116-3p mimics和WT-circMTHFD2)、miR-NC+MUT-circMTHFD2组(共转染miR-NC和MUT-circMTHFD2)、miR-2116-3p mimics+MUT-circMTHFD2组(共转染miR-2116-3p mimics和MUT-circMTHFD2)。双荧光素酶实验和RT-qPCR分析circMTHFD2对miR-2116-3p的靶向调控作用。结果肝癌组织中circMTHFD2表达(4.75±0.35)较癌旁组织(1.00±0.08)显著升高(P<0.05),miR-2116-3p表达较癌旁组织显著降低(P<0.05)。si-circMTHFD2组Huh-7细胞活力、克隆形成数与si-NC组比较显著降低(P<0.05)。si-circMTHFD2组Huh-7细胞划痕愈合率、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白表达与si-NC组、NC组比较显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达与si-NC组、NC组比较显著升高(P<0.05)。miR-2116-3p mimics+WT-circMTHFD2组Huh-7细胞的相对荧光素酶活性较miR-NC+WT-circMTHFD2组显著下降(P<0.05)。pcDNA-circMTHFD2组Huh-7细胞miR-2116-3p表达水平显著低于pcDNA组(P<0.05);si-circMTHFD2组Huh-7细胞miR-2116-3p表达水平显著高于si-NC组(P<0.05)。结论肝癌组织中circMTHFD2表达上调,miR-2116-3p表达下调,circMTHFD2靶向miR-2116-3p调控肝癌细胞Huh-7增殖、迁移和侵袭。抑制circMTHFD2/miR-2116-3p途径是肝癌的潜在治疗策略。