circNOX4通过靶向EZH2调控肝内胆管癌细胞增殖

目的:探讨circNOX4通过靶向EZH2调控肝内胆管癌(ICC)细胞增殖的分子机制。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常胆管上皮细胞(H69)和ICC细胞系(HCCC-9810、RBE、CCLP1、QBC939)中circNOX4的表达水平。荧光原位杂交技术(FISH)和核质分离实验确定circNOX4的亚细胞定位。EDU实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证circNOX4对ICC细胞增殖的影响。蛋白质印迹法(Western blot)明确circNOX4与EZH2的相关性。两组间比较应用t检验,多组间比较应用单因素方差分析。结果:ICC细胞系circNOX4表达高于人正常胆管上皮细胞H69(H69:1.008±0.156,HCCC-9810:1.584±0.429,CCLP1:2.951±0.222,QBC939:6.404±0.511,RBE:10.305±2.988,F=23.97,P<0.05)。FISH实验和核质分离qRT-PCR实验可知,circNOX4主要分布于细胞核内。敲减circNOX4可以使RBE(2 d:siNC:0.646±0.119;sicircNOX4:0.358±0.032,t=4.67 P<0.05;3 d:siNC:1.041±0.052;sicircNOX4:0.620±0.084,t=8.54,P<0.05;4 d:siNC:1.707±0.070;sicircNOX4:1.007±0.081;t=13.07,P<0.05)和QBC939(2 d:siNC:0.534±0.010;sicircNOX4:0.403±0.017,t=13.52,P<0.05;3 d:siNC:0.887±0.034;sicircNOX4:0.589±0.023,t=14.68,P<0.05;4 d:siNC:1.496±0.151;sicircNOX4:0.865±0.122,t=6.51,P<0.05)细胞的增殖受到抑制。Western blot结果可知敲减circNOX4可以抑制EZH2的蛋白表达,敲减circNOX4同时回复EZH2可以恢复细胞增殖能力(4 d:siNC:1.611±0.061;sicircNOX4:0.810±0.025;sicircNOX4+EZH2:1.485±0.026;siNC比sicircNOX4:t=25.90,P<0.05;sicircNOX4比sicircNOX4+EZH2:t=37.56,P<0.05)。结论:circNOX4在ICC细胞系中高表达,并通过介导EZH2的表达调控细胞增殖能力。