人真核翻译起始因子4A3调控的环状RanGTP酶激活蛋白1通过调节滋养细胞的增殖、迁移和侵袭参与子痫前期发病

目的探讨环状RanGTP酶激活蛋白1(circular RanGTPase activating protein 1,circRANGAP1)在子痫前期中对滋养细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法收集2020年8月至2022年12月于中国医科大学附属盛京医院就诊的子痫前期患者及年龄、孕周匹配的对照组产妇的胎盘组织(早发子痫前期组和早发对照组各8例,晚发子痫前期和晚发对照组各24例),采用实时荧光定量法检测胎盘组织中circRANGAP1及人真核翻译起始因子4A3(eukaryotic translation initiation factor 4A3,EIF4A3)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测EIF4A3蛋白表达水平。取滋养细胞系HTR-8/Svneo,采用细胞计数增殖试验、划痕试验和Transwell侵袭试验检测增殖、迁移和侵袭能力,采用RNA结合蛋白免疫沉淀法检测EIF4A3对circRANGAP1的调控作用。敲降EIF4A3表达后,实时荧光定量聚合酶链反应法检测HTR-8/Svneo细胞中circRANGAP1的变化。采用独立样本t检验、非参数χ^(2)检验或Pearson相关分析对数据进行统计学分析。结果(1)早发子痫前期中circRANGAP1表达与早发对照组差异无统计学意义,晚发子痫前期中circRANGAP1表达高于晚发对照组(3.764±3.297与0.960±0.720,t=4.07,P<0.001)。在晚发子痫前期中,circRANGAP1的表达与收缩压及舒张压均呈正相关(收缩压:r=0.639,P<0.01;舒张压:r=0.800,P<0.001)。早发子痫前期中EIF4A3 mRNA及蛋白质表达与早发对照组差异无统计学意义,晚发子痫前期中EIF4A3 mRNA及蛋白质表达高于晚发对照组(mRNA:2.963±3.081与1.149±0.667,t=2.30,P=0.028;蛋白质:2.504±1.008与0.258±0.180,t=4.39,P=0.005)。(2)小干扰(small interfering,siRNA)敲降后,mRANGAP1的表达量差异无统计学意义,而circRANGAP1的表达量降低(1.000±0.004、0.465±0.031与0.621±0.030),其中si-1敲降效率最高(t=23.59,P=0.002)。特异性敲降circRANGAP1后,滋养细胞的增殖(1.297±0.058与1.456±0.030,t=-5.97,P<0.001)、侵袭(94.400±6.504与219.000±19.870,t=-13.32,P<0.001)和迁移[(25.493±3.498)%与(58.456±3.277)%,t=-15.38,P<0.001]能力均升高。(3)EIF4A3在circRANGAP1 pre-mRNA上游区域存在6个结合位点。EIF4A3可以通过区域a和区域b结合,但不能通过区域c结合。siRNA敲降后,EIF4A3的表达量降低(1.003±0.101、0.276±0.060、0.398±0.074与0.184±0.017),其中si-3敲降效率最高。敲降EIF4A3后,滋养细胞中circRANGAP1表达下降(1.004±0.118与0.480±0.039,t=5.96,P=0.027)。结论circRANGAP1在EIF4A3的调控下抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力,参与子痫前期发病。